半固體儲存培養(yǎng)基是一種在微生物學(xué)研究和細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域中扮演重要角色的培養(yǎng)基。它主要用于觀察微生物的動力、菌種的保藏與運(yùn)輸、厭氧菌的培養(yǎng)、菌種鑒定、細(xì)胞培養(yǎng)、噬菌體效價測定以及微生物趨化性研究等。半固體培養(yǎng)基通常由液體培養(yǎng)基加入少量凝固劑制成,例如瓊脂的用量在0.2~0.7%之間。在具體應(yīng)用上,半固體培養(yǎng)基可以用于以下方面:1.**微生物動力觀察**:通過推測細(xì)菌是否有鞭毛來進(jìn)行鑒定。2.**菌種保藏與運(yùn)輸**:便于菌種的短時間保存和長途運(yùn)輸。3.**厭氧菌培養(yǎng)**:適用于厭氧菌的培養(yǎng),對于研究厭氧微生物的生長和代謝至關(guān)重要。4.**菌種鑒定**:通過觀察菌落的形態(tài)和生長特性來區(qū)分不同的微生物種類。5.**細(xì)胞培養(yǎng)**:在細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域,半固體培養(yǎng)基廣泛應(yīng)用于干細(xì)胞、細(xì)胞克隆、細(xì)胞表達(dá)和細(xì)胞毒性等實驗。6.**噬菌體效價測定**:用于雙層平板法測定噬菌體的效價,是研究病毒與宿主相互作用的重要手段。7.**微生物趨化性研究**:幫助研究微生物的趨化性,即微生物對化學(xué)物質(zhì)的定向移動反應(yīng)。EMB是Eosin Methylene Blue的縮寫,這是一種含有兩種染料的培養(yǎng)基。硫酸亞鐵瓊脂平板
支原體培養(yǎng)基基礎(chǔ)(含精氨酸)是一種專門用于培養(yǎng)支原體的培養(yǎng)基,它包含精氨酸作為生長因子,適用于那些需要精氨酸才能生長的支原體,如口腔支原體等。以下是該培養(yǎng)基的一些特點(diǎn)和配制方法:1.**配方組成**:通常包含豬胃消化粉、牛肉浸粉、酵母浸粉、氯化鈉、葡萄糖、L-精氨酸和酚紅等成分。2.**配制方法**:-稱取培養(yǎng)基粉末,按照說明書比例(通常是25.52g/L)溶解在蒸餾水中。-加熱溶解并調(diào)節(jié)pH至7.1-0.2(25℃)。-121℃高壓滅菌15分鐘。-冷卻至室溫后,無菌操作下加入滅活小牛血清或馬血清(通常為200mL)和青霉素(通常為80萬單位)。-混勻后分裝到無菌試管中備用。3.**用途**:主要用于藥品和生物制品中支原體的檢測,特別是口腔支原體的培養(yǎng)和檢測。4.**培養(yǎng)條件**:通常在36℃±1℃的條件下培養(yǎng)7-14天。5.**觀察指標(biāo)**:培養(yǎng)基中的酚紅作為pH指示劑,支原體生長時會因代謝產(chǎn)物改變培養(yǎng)基的pH值,導(dǎo)致顏色變化。例如,口腔支原體分解精氨酸產(chǎn)堿,使培養(yǎng)基顏色由橙色變?yōu)榧t色。6.**質(zhì)量控制**:通過接種已知的質(zhì)控菌株來驗證培養(yǎng)基的靈敏度和有效性。TSA+卵磷脂+吐溫80平板將純培養(yǎng)的菌株涂布在TSA板上,培養(yǎng)至單一菌落后,將培養(yǎng)皿密封保存在4℃或-80℃的環(huán)境中。
CIN-1培養(yǎng)基基礎(chǔ)是一種用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的選擇性培養(yǎng)基。其配方包含胰蛋白胨、酵母浸粉、甘露醇、氯化鈉、去氧膽酸鈉、硫酸鎂、瓊脂、Irgasan、中性紅、結(jié)晶紫和氯化鍶等成分,pH值約為7.5±0.1(25℃)。這種培養(yǎng)基通過其成分的選擇性作用,可以有效地促進(jìn)目標(biāo)菌的生長,同時抑制其他非目標(biāo)菌。**CIN-1培養(yǎng)基基礎(chǔ)的用途**:主要用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(GB標(biāo)準(zhǔn))。**添加劑**:每瓶需配套添加CIN-1添加劑,每200mlCIN-1培養(yǎng)基基礎(chǔ)添加1支HB0269-2。**配制方法**:稱取58.0gCIN-1培養(yǎng)基基礎(chǔ),加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝三角瓶,每瓶200ml,121℃高壓滅菌15分鐘,冷卻至50℃左右時,加入一支過濾除菌的CIN-1添加劑(含頭孢菌素3mg,新生霉素0.5mg),混勻,傾入無菌平皿。**檢驗原理**:胰蛋白胨和酵母浸粉提供菌體生長所需要的氮源、碳源和微量元素;甘露醇作為可發(fā)酵碳源;氯化鈉維持培養(yǎng)基體系滲透壓;硫酸鎂提供菌體生長的微量元素;去氧膽酸鈉和結(jié)晶紫能夠抑制革蘭氏陽性菌;中性紅作為酸堿指示劑;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
蠟狀芽孢桿菌瓊脂基礎(chǔ)(TSSB)是一種用于分離和培養(yǎng)蠟樣芽孢桿菌(Bacilluscereus)的培養(yǎng)基。以下是它的一些主要特點(diǎn):1.**成分**:蠟狀芽孢桿菌瓊脂基礎(chǔ)的配方包含胰酪蛋白胨、牛肉浸粉、D-甘露醇、氯化鈉、苯酚紅和瓊脂等成分。其中,胰酪蛋白胨和牛肉浸粉提供碳源和氮源,D-甘露醇作為可發(fā)酵的糖,氯化鈉維持滲透壓,苯酚紅作為pH指示劑,瓊脂作為凝固劑。2.**pH值**:該培養(yǎng)基的pH值通常調(diào)節(jié)在7.2±0.2(25℃)。3.**滅菌處理**:制備好的培養(yǎng)基需要進(jìn)行121℃高壓滅菌15分鐘。4.**添加劑**:每瓶需配套添加多粘菌素B和50%卵黃乳液使用,每100ml蠟樣芽孢桿菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)中添加1支多粘菌素B和2支50%卵黃乳液。5.**用法**:稱取本品43.0g加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝每瓶100ml,121℃高壓滅菌15分鐘,冷至50℃左右時,每瓶加入10ml50%的無菌卵黃乳液和多粘菌素B10000IU混勻,傾入無菌平皿,備用。6.**菌落特征**:蠟樣芽孢桿菌在TSSB上生長時,菌落通常為微粉紅色,周圍有淡粉紅色沉淀環(huán),這有助于識別蠟樣芽孢桿菌。7.**質(zhì)量控制**:進(jìn)行微生物靈敏度試驗時,按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基,接種質(zhì)控菌株,放置36±1℃需氧培養(yǎng)24-48小時。與傳統(tǒng)瓊脂培養(yǎng)基相比,馬鈴薯浸出液瓊脂培養(yǎng)皿中的微生物生長速度更快,菌落形態(tài)更為清晰。
四號瓊脂基礎(chǔ)(No.4AgarBase)是一種用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基,主要用于霍亂弧菌的選擇性分離培養(yǎng)。以下是它的一些主要特點(diǎn)和使用方法:1.**成分**:-蛋白胨:20.0g/L-牛肉浸粉:5.0g/L-氯化鈉:5.0g/L-無水亞硫酸鈉:3.0g/L-十二烷基硫酸鈉:0.5g/L-豬膽粉:5.0g/L-利凡諾:0.03g/L-慶大霉素:500U/L-瓊脂:15.0g/L-pH值:8.5±0.2(25℃)2.**檢驗原理**:-蛋白胨和牛肉浸粉提供碳氮源、維生素和生長因子;-氯化鈉維持均衡的滲透壓;-亞硫酸鈉可刺激弧菌生長;-十二烷基硫酸鈉、豬膽粉、利凡諾、慶大霉素和亞碲酸鉀及較高的pH值可抑制革蘭氏陽性菌和部分革蘭氏陰性雜菌;-霍亂弧菌對酸性環(huán)境比較敏感,因此該pH值可增強(qiáng)其生長;-瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。3.**配制方法**:-稱取53.5g干粉培養(yǎng)基,加入1L蒸餾水或去離子水,加熱煮沸充分溶解,冷卻至50℃左右,每500mL培養(yǎng)基加入配套試劑1支(SR0080)(5mg亞碲酸鉀),搖勻立即傾注平皿。4.**使用方法**:-從冷藏柜中取出平板皿,并恢復(fù)至室溫。-將包裝整體送入試驗地點(diǎn)。-試驗或接種。-將平板從潔凈室取出,按規(guī)定的溫度和時間倒置培養(yǎng)。-觀察、計數(shù)。"去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)皿"(Deoxycholate Agar Plate)是一種用于微生物學(xué)實驗室中細(xì)菌分離和鑒定的培養(yǎng)基。麥芽糖酵母浸粉瓊脂預(yù)裝培養(yǎng)皿
未來研究將進(jìn)一步探索改良Letheen瓊脂培養(yǎng)基在研究領(lǐng)域的優(yōu)越性能,以及在微生物學(xué)實驗設(shè)計中的靈活性。硫酸亞鐵瓊脂平板
牛津瓊脂(OXA)基礎(chǔ)是一種用于分離培養(yǎng)李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)的選擇性培養(yǎng)基。它的成分包括特殊蛋白胨、可溶性淀粉、氯化鈉、七葉苷、檸檬酸鐵銨、氯化鋰和瓊脂等,pH值控制在7.0±0.2(25℃)。**特點(diǎn)**:1.**選擇性**:含有氯化鋰和抗生物質(zhì)添加劑(如多粘菌素E、放線菌酮、吖啶黃素、頭孢雙硫唑甲氧、磷霉素),這些成分能夠抑制革蘭氏陰性菌和大多數(shù)革蘭氏陽性菌的生長,特別是非李斯特氏菌。2.**應(yīng)用**:主要用于食品、水和污水樣本中李斯特氏菌的選擇性分離培養(yǎng),符合ISO和SN標(biāo)準(zhǔn)。3.**配制方法**:通常稱取5.85g的OXA基礎(chǔ)粉末,溶解在100mL蒸餾水中,高壓滅菌15分鐘后冷卻至50℃,再加入配套的添加劑,混勻后傾入無菌平皿備用。4.**結(jié)果觀察**:李斯特氏菌在OXA培養(yǎng)基上生長時,會形成黑色菌落,并且菌落周圍可能有黑色環(huán)。牛津瓊脂基礎(chǔ)因其高選擇性和特異性,是檢測食品和水樣本中李斯特氏菌污染的重要工具。硫酸亞鐵瓊脂平板