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聚氯乙烯乳液在家居產(chǎn)品中的作用
洪匯新材-如何制備水性環(huán)氧防腐涂料
洪匯新材攜水性產(chǎn)品亮2021中國(guó)涂料峰會(huì)暨展覽會(huì)
洪匯新材精彩亮相第七屆國(guó)際水性工業(yè)涂料涂裝技術(shù)峰會(huì)
脂質(zhì)顆粒的加入導(dǎo)致內(nèi)體DNA釋放增加。Delgado等人通過(guò)在腎細(xì)胞中添加魚(yú)精蛋白,設(shè)法提高了固體脂質(zhì)納米顆粒的轉(zhuǎn)染效率,但與不添加魚(yú)精蛋白的對(duì)照組相比,相同的多功能單元,DNA/魚(yú)精蛋白/SLN(固體脂質(zhì)納米顆粒),降低了HEK 293細(xì)胞系(人胚胎腎細(xì)胞)的轉(zhuǎn)染效率。這給了我們希望,通過(guò)加入必要的配體的可能性,使用納米顆粒的轉(zhuǎn)染可能會(huì)調(diào)整到給定的細(xì)胞類型。Bahrami et al.經(jīng)表明,不同種類的納米顆粒以不同的方式與細(xì)胞膜結(jié)合。形成這些鍵的差異取決于它們的球形或非球形形狀,也取決于不同納米顆粒所表現(xiàn)出的各種粘附電位以及它們進(jìn)入后引起的膜形狀變化。Prabha等人的實(shí)驗(yàn)表明,納米顆粒的大小對(duì)COS-1(非洲綠猴腎細(xì)胞)和HEK 293細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率有***影響:使用較小的納米顆粒時(shí),轉(zhuǎn)染效率分別是使用較大納米顆粒的27倍和4倍。在兩種分散體中,小顆粒和大顆粒的細(xì)胞攝取、表面電荷和DNA釋放是相同的,這表明使用納米顆粒進(jìn)行基因傳遞的效率受到許多因素的影響,它們的使用應(yīng)該根據(jù)細(xì)胞類型和應(yīng)用條件進(jìn)行具體調(diào)整。此外,用作納米顆粒分散劑的不同物質(zhì),如十六種不同類型納米顆粒的豬肺表面活性劑和牛血清白蛋白,對(duì)其在溶液中的團(tuán)聚有***影響。超聲輔助轉(zhuǎn)染涉及在宿主細(xì)胞膜上制造微小的孔,以促進(jìn)核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。江蘇大鼠轉(zhuǎn)染試劑
人類原代干細(xì)胞是另一種公認(rèn)的難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染這種細(xì)胞類型的比較大挑戰(zhàn)仍然是效率低和細(xì)胞活力低。2015年,王等報(bào)道了Lipofectamine 2000和XtremeGENE HP等轉(zhuǎn)染試劑在人牙周韌帶干細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率非常低(<6%),而陽(yáng)性對(duì)照慢病毒載體的轉(zhuǎn)染效率約為95%。與同一研究中采用的磁輔助轉(zhuǎn)染技術(shù)相比,后者表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)染效率(~11%)和更低的毒性。在另一項(xiàng)涉及人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hBM-MSC)的研究中,Lipofectamine LTX被證明比TransIT-2020、Lipofectamine 3000和聚乙烯亞胺(PEI)等其他試劑產(chǎn)生比較好的轉(zhuǎn)染效率(至少高出三倍),但細(xì)胞存活率較低(<50%)。相比之下,使用TransIT-2020試劑可能會(huì)獲得更好的結(jié)果,該試劑的效率約為30%,細(xì)胞回收率高達(dá)90%,細(xì)胞干性約為95%。另一個(gè)難以轉(zhuǎn)染干細(xì)胞的例子是誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)。在一項(xiàng)比較轉(zhuǎn)染人類ipsc衍生心肌細(xì)胞(hiPSC-CMSs)的不同非病毒方法的研究中,與其他試劑(Lipofectamine 3000、Lipofectamine 2000和基于pei的非脂質(zhì)體試劑TransporterTM5和PEI25)相比,Lipofectamine STEM顯示出更高的轉(zhuǎn)染效率(高達(dá)32%),其效率低于20%。重慶jetPEI 轉(zhuǎn)染試劑在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹(shù)狀大分子(PAMAM G4)的幫助下。
PEI的分子量對(duì)細(xì)胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。由于PEI在細(xì)胞內(nèi)不可降解,所以分子量越高,細(xì)胞毒性越強(qiáng)。此外,具有較高分子量的PEI形成更穩(wěn)定的聚合物,使其更容易轉(zhuǎn)染,但更難在細(xì)胞內(nèi)釋放核酸。另一方面,PEI產(chǎn)生的復(fù)合物分子量降低,更難以轉(zhuǎn)染;但它更容易釋放核酸。因此,確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實(shí)現(xiàn)的。然而,一些改進(jìn)使PEI在應(yīng)用中更加先進(jìn)。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯(lián),可***降低細(xì)胞毒性并保持較高的轉(zhuǎn)染效率。通過(guò)用丙烯酸乙酯修飾胺,伯胺的乙酰化,或在聚合物結(jié)構(gòu)中引入帶負(fù)電荷的丙酸或琥珀酸基團(tuán),可以制備出各種無(wú)毒的分支PEI衍生物。由此產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功。
流式細(xì)胞術(shù)可以更精確地定量表達(dá)特定熒光基因的細(xì)胞,以評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。另一種評(píng)估轉(zhuǎn)染效率的方法是通過(guò)監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染后的特定蛋白表達(dá)。將轉(zhuǎn)基因引入細(xì)胞可能會(huì)改變由轉(zhuǎn)基因或細(xì)胞中其他基因編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)。同樣,轉(zhuǎn)染小RNA也可以調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞中特定下游遺傳靶點(diǎn)的表達(dá)。免疫印跡和免疫熒光染色可用于評(píng)估轉(zhuǎn)染后蛋白表達(dá)的變化。在這兩種方法中,使用特異性抗體結(jié)合靶蛋白是至關(guān)重要的,后者需要使用與一抗結(jié)合的熒光標(biāo)記二級(jí)抗體來(lái)檢測(cè)感興趣的蛋白質(zhì)。另一方面,在免疫印跡中,可以使用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)偶聯(lián)的二抗與一抗結(jié)合,進(jìn)行特異性蛋白檢測(cè)。免疫印跡法允許對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行半定量,而免疫熒光染色法允許通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行定量檢測(cè)。通過(guò)檢查特定蛋白表達(dá)來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率更具可重復(fù)性和直接性。然而,使用抗體所固有的非特異性蛋白質(zhì)結(jié)合問(wèn)題和獲得假陰性結(jié)果的可能性,這可能是由于不及時(shí)測(cè)定蛋白質(zhì)表達(dá)引起的,仍然是使用這些方法的缺點(diǎn)。常用的物理/機(jī)械轉(zhuǎn)染方法包括電穿孔、聲孔、基因顯微注射和激光照射。
脂質(zhì)復(fù)合物(CLNACs)通過(guò)網(wǎng)格蛋白參與的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,并被困在核內(nèi)小體中,從這些囊泡結(jié)構(gòu)中釋放出來(lái),進(jìn)入核周區(qū)域,***進(jìn)入細(xì)胞核。內(nèi)吞作用在一定程度上取決于脂質(zhì)體載體的物理化學(xué)性質(zhì)。Friend和同事描述了可能由脂質(zhì)體與核膜融合而形成的囊泡和網(wǎng)狀核內(nèi)膜。**近有研究表明,很大一部分從核內(nèi)體釋放到細(xì)胞質(zhì)質(zhì)的質(zhì)粒由于與細(xì)胞質(zhì)中的大離子凝聚劑結(jié)合而失去活性。這可能解釋了脂質(zhì)轉(zhuǎn)染所觀察到的低且可變的轉(zhuǎn)染率。雖然這些脂質(zhì)載體從細(xì)胞外部到細(xì)胞核的路徑尚未完全確定,但核酸能夠產(chǎn)生其效果本身就是一項(xiàng)驚人的壯舉。至少對(duì)于質(zhì)粒而言,較小的結(jié)構(gòu)體比較大的質(zhì)粒具有更高的轉(zhuǎn)染率。核酸外排,雖然不是常見(jiàn)的報(bào)道,但也被證明會(huì)發(fā)生。并被困在核內(nèi)小體中,從這些囊泡結(jié)構(gòu)中釋放出來(lái),進(jìn)入核周區(qū)域,后進(jìn)入細(xì)胞核。武漢轉(zhuǎn)染試劑現(xiàn)貨
是由非離子核酸與陽(yáng)離子脂質(zhì)體(CLs)表面結(jié)合,形成多層脂質(zhì)-核酸復(fù)合物而形成的。江蘇大鼠轉(zhuǎn)染試劑
選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個(gè)因素,包括轉(zhuǎn)染核酸的類型和轉(zhuǎn)染的復(fù)雜性(單轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染)。一些試劑如Effectene和TransIT-X2是專門(mén)用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的,而一些試劑如Lipofectamine RNAiMAX更適合于小寡核苷酸的轉(zhuǎn)染。哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞由于其有限的壽命和有限的擴(kuò)增能力,通常比其他細(xì)胞類型更不容易受到轉(zhuǎn)染。非脂質(zhì)體試劑在轉(zhuǎn)染人原代細(xì)胞方面優(yōu)于脂質(zhì)體試劑,包括PEC、HASMC和HAEC、人原代成肌細(xì)胞和AGS。相比之下,據(jù)報(bào)道,基于脂質(zhì)體的試劑(如Lipofectamine和DharmaFECT家族)在轉(zhuǎn)染其他原代人細(xì)胞(如原代臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)和BM-MSC方面比非脂質(zhì)體試劑產(chǎn)生更高的轉(zhuǎn)染效率。江蘇大鼠轉(zhuǎn)染試劑