siRNA脂質(zhì)體

RNA干擾(RNAi)途徑允許siRNA和miRNAs負向調(diào)節(jié)蛋白表達。siRNA是21～23對核苷酸組成的雙鏈RNA，可誘導(dǎo)同源靶mRNA沉默。為了發(fā)揮作用，雙鏈siRNA分裂成兩個單鏈RNA:乘客鏈和引導(dǎo)鏈。乘客鏈被argonaute-2蛋白降解,而引導(dǎo)鏈則被納入RNAi誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體中，該復(fù)合體結(jié)合與引導(dǎo)鏈互補的mRNA并將其切割。siRNA似乎具有***多種疾病的巨大潛力，因為它們可以很容易地下調(diào)各種靶mRNA，而不考慮它們的位置(即在細胞核或細胞質(zhì)中)，并且它們的特異性結(jié)合表明它們比傳統(tǒng)化學(xué)藥物誘導(dǎo)的副作用更少。作為一種新型的基于核酸的***策略，siRNA***與傳統(tǒng)的化學(xué)藥物相比具有許多優(yōu)勢。然而，為了促進基于siRNA的***方法的發(fā)展，必須克服一些挑戰(zhàn)，包括需要識別適當(dāng)?shù)陌谢蚝烷_發(fā)優(yōu)化的遞送系統(tǒng)。許多研究人員試圖利用陽離子脂質(zhì)體提高siRNA的細胞遞送和基因沉默效率。例如，由DC-6-14、DOPE和膽固醇組成的陽離子脂質(zhì)體被用于遞送螢火蟲熒光素酶特異性的siRNA。當(dāng)陽離子脂質(zhì)體與siRNA持續(xù)劇烈攪拌混合時，轉(zhuǎn)染效率提高，說明將siRNA加載到陽離子脂質(zhì)體上的方法可以調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)染效率。siRNA脂叢的***應(yīng)用因靶蛋白而異。 Zeta電位被認為是影響細胞攝取和藥物傳遞的重要因素之一。北京企業(yè)脂質(zhì)體載藥

為了***免疫性疾病，將針對甘油醛3-磷酸脫氫酶(***DH)的siRNA與含1,2-dilinoleyl-4-(2-dimethylaminoethyl)-[1,3]-dioxolane、DSPC和膽固醇的陽離子脂質(zhì)體絡(luò)合。用該復(fù)合物(5mg/kgsiRNA)處理小鼠，4天后，腹腔巨噬細胞和樹突狀細胞的***DH表達量減少40%，脾源性抗原呈遞細胞的***DH表達量減少60%。在其他研究中，將重鏈鐵蛋白特異性siRNA與陽離子脂質(zhì)體結(jié)合，并局部給藥于荷U251細胞的人膠質(zhì)瘤小鼠。**內(nèi)注射鐵蛋白特異性siRNA與DC-Chol和DOPE組成的陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物，其抑制**生長的程度與卡莫司定(一種主要用于膠質(zhì)瘤***的DNA烷基化劑)相當(dāng)。argonaute-2特異性siRNA已被證明可誘導(dǎo)細胞凋亡，使用由DC-6-14、DSPC、DOPE和DSPC-PEG2000組成陽離子脂質(zhì)體遞送argonaute-2特異性siRNA時發(fā)現(xiàn)，將這些復(fù)合物靜脈注射到接種Lewis肺*的小鼠體內(nèi)(每隔一天1mg/kg，共5次)，這些復(fù)合物可降低**組織中argonaute-2的表達，并***抑制**生長。北京企業(yè)脂質(zhì)體載藥脂質(zhì)體根據(jù)室室結(jié)構(gòu)和層狀結(jié)構(gòu)可分為單層囊泡(ULVs)、寡層囊泡(OLVs)、多層囊泡(MLV)和多泡脂質(zhì)體(MVLs)。

脂質(zhì)體共價連接藥物-脂質(zhì)偶聯(lián)載***式通過連接劑將藥物分?與脂質(zhì)共價連接是另?種在脂質(zhì)體內(nèi)裝載藥物的有效策略，例如Mepact。MDP是主要?蘭?陽性菌細胞壁的組成部分，具有****應(yīng)答的作?。由于MDP是?溶性低分?量分?，其脂質(zhì)體在儲存過程中存在包封效率低和藥物泄漏等問題。為了提?MDP的脂溶性，通過肽間隔劑將MDP與PE連接，合成MTP-PE(muramyltripeptide-phosphatidylethanolamine)。在??理鹽?重建凍?產(chǎn)物(MTP-PE,POPC和OOPS)時，MTP-PE的兩親分?嵌?脂質(zhì)體的膜雙層。脂質(zhì)體內(nèi)存在MTP-PE，未發(fā)現(xiàn)游離MTP-PE。Vyxeos采?被動加載和主動加載相結(jié)合的?法，這是?個被批準(zhǔn)在同?囊泡中加載兩種不同藥物(阿糖胞苷和柔紅霉素)的脂質(zhì)體。簡??之，當(dāng)脂質(zhì)泡沫與Cu(葡糖酸鹽)2、三?醇胺(TEA)、pH7.4和阿糖胞苷溶液?合時，阿糖胞苷被被動地封裝到脂質(zhì)體中。經(jīng)過減漿和緩沖液交換以去除未包封的藥物和Cu(葡糖酸鹽)2/TEA后，中性pH的柔紅霉素緩沖液與載糖胞苷脂質(zhì)體孵育。

脂質(zhì)體靶向遞送中**核靶向功能已知**具有核靶向功能。為了增強質(zhì)粒DNA的核轉(zhuǎn)運，**與PAMAM樹狀大分子偶聯(lián)，與DOPE(1:1)混合形成脂質(zhì)體。與聚亞胺相比，PAMAM-**/DOPE陽離子脂質(zhì)體增強了HEK293細胞中質(zhì)粒DNA的表達，并顯示出較低的細胞毒性(m.w.25,000)?？偟膩碚f，靶向配體的修飾可以幫助實現(xiàn)特異性靶向，避免非特異性分布到肝臟和其他組織。然而，從商業(yè)化的角度來看，配體定制技術(shù)仍然面臨許多障礙，包括需要更流線型的制造工藝和改進的質(zhì)量控制。陽離子脂質(zhì)體遞送化藥和核酸的優(yōu)勢。

寡核苷酸脂質(zhì)體

寡核苷酸是一種<50個堿基的短核酸聚合物。AS-ODN（反義寡脫氧核苷酸）是與互補的mRNA序列結(jié)合的單鏈DNA或RNA。由于AS-ODNs可以下調(diào)某些RNA并抑制靶蛋白的表達，因此它們被認為具有作為核酸藥物的潛力。然而，為了開發(fā)基于寡核苷酸的***方法，必須克服寡核苷酸在生理環(huán)境中的不穩(wěn)定性及其細胞攝取不足的問題。Zhang及其同事開發(fā)了由1,2-二油?；?3-三甲銨基丙烷(DOTAP)、磷脂酰膽堿和膽固醇組成的陽離子脂體，用于針對Raf-1蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶(一種已知的*****靶標(biāo)信號蛋白)的AS-ODNs全身遞送。他們觀察到,全身給藥AS-ODNs與陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物可降低肝臟和**組織中Raf-1蛋白的表達，并抑制小鼠PC-3**的生長。在另一項研究中，bcl2特異性AS-ODNs與魚精蛋白和陽離子脂質(zhì)體(由DC-Chol、磷脂酰膽堿和DSPE-PEG2000組成)絡(luò)合。脂質(zhì)體***增加Bcl-2AS-ODNs的細胞攝取，導(dǎo)致Bcl-2蛋白水平***下調(diào)。研究了AS-ODNs和陽離子脂質(zhì)體***特應(yīng)性皮炎的療效。將靶向白介素-13的AS-ODNs與DOTAP和膽酸鈉組成的陽離子脂質(zhì)體配合，局部應(yīng)用于特應(yīng)性皮炎小鼠皮損。這種***劑量依賴性地緩解了特應(yīng)性皮炎，200ugIL-13的AS-ODNs的抑制作用比較大。 被動載藥?法是在脂質(zhì)體制備過程中對藥物進?包封的方法。靶向脂質(zhì)體載藥研發(fā)

載藥脂質(zhì)體可以采用超濾法、凝膠過濾法、低速離心法、透析法等多種方法來純化。北京企業(yè)脂質(zhì)體載藥

陰離子脂體由帶負電荷的脂質(zhì)組成，如磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸和磷脂酸，由于它們被巨噬細胞攝取，循環(huán)時間縮短。帶負電的小脂質(zhì)體比其對應(yīng)的中性和帶正電的脂質(zhì)體被***得更快。此外，在帶負電荷的小脂質(zhì)體中觀察到一種雙相***模式。 另一方面， 與中性和帶正電的脂質(zhì)體相比， 血液單核細胞和肺在帶負電的大脂質(zhì)體的攝取中起主要作用。表面修飾的脂質(zhì)體(攜帶配體)比天然脂質(zhì)體更容易被***。 然而， 脂質(zhì)體通過摻入膽固醇可在一定程度上減少肝臟對脂質(zhì)體的攝取， 這可能會使磷脂包裝轉(zhuǎn)變?yōu)楦鼒杂灿行虻哪?。北京企業(yè)脂質(zhì)體載藥