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體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-11-28

**近一項(xiàng)與抗血管生成基因傳遞高度相關(guān)的發(fā)現(xiàn)是,陽離子脂質(zhì)體(CLs)選擇性地靶向**的血管系統(tǒng)。陰離子或電中性脂質(zhì)體沒有發(fā)現(xiàn)這種作用。Campbell和他的同事[95]發(fā)現(xiàn),與電中性脂質(zhì)體相比,使用CLs在**血管內(nèi)皮細(xì)胞(VECs)中積累更多,CLs通過添加5mol%聚乙二醇來穩(wěn)定。在兩種人類**類型(LS174T和MCAIV)和兩個(gè)位置(顱窗和背側(cè)皮膚褶腔)中發(fā)現(xiàn)了**VECs的選擇性遞送。**血管中囊泡的分布是不均勻的,這可能與該技術(shù)是否足以根除足夠數(shù)量的**VECs以實(shí)現(xiàn)**消退反應(yīng)有關(guān)。有趣的是,注射后24小時(shí),脂質(zhì)體上50%的摩爾電荷***增加了小鼠肺部的積聚。PEI的分子量對(duì)細(xì)胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體

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此外,病毒濃度被認(rèn)為是影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的另一個(gè)因素。在Haas等人的評(píng)估中測(cè)試的其他幾個(gè)參數(shù)中,即含有不同輔助蛋白的HIV慢病毒載體構(gòu)建,纖維連接蛋白片段的存在/不存在以及在人臍帶血和胚胎腎細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)培養(yǎng)基中添加多陽離子硫酸魚精蛋白,只有病毒滴度似乎與病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率直接相關(guān)。轉(zhuǎn)染介質(zhì)的條件也可能影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。例如,在轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中,使用胎牛血清比牛血清產(chǎn)生更好的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。同樣,研究表明,deae-葡聚糖等多陽離子可以比較大限度地減少帶負(fù)電荷細(xì)胞之間的排斥力,并促進(jìn)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)。影響化學(xué)轉(zhuǎn)染效率的因素中國澳門轉(zhuǎn)染試劑疫苗超聲輔助轉(zhuǎn)染涉及在宿主細(xì)胞膜上制造微小的孔,以促進(jìn)核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。

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不同種類的納米顆粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞系后,產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。這些大量的測(cè)試表明,納米顆粒作為載體的效率與普通的非病毒轉(zhuǎn)染方法相當(dāng)。Tabatt等人所做的研究比較了使用脂質(zhì)體、陽離子固體li-pid納米顆粒和兩種商用轉(zhuǎn)染劑對(duì)COS-1細(xì)胞系(非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞)使用四種不同的轉(zhuǎn)染介質(zhì)所取得的轉(zhuǎn)染效果。固體脂質(zhì)na-noparticles轉(zhuǎn)染組和溶酶體(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸銨)轉(zhuǎn)染組的熒光素酶基因表達(dá)效率沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的***差異,在每種轉(zhuǎn)染介質(zhì)中保持相同水平。然而,獲得的轉(zhuǎn)染效率低于使用商業(yè)轉(zhuǎn)染劑EscortTM 的效率,該轉(zhuǎn)染劑由DOPE(1,2-二-(順式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)組成。研究人員通過在HepG2細(xì)胞(人肝細(xì)胞肝*細(xì)胞系)上使用固體脂質(zhì)納米顆粒,實(shí)現(xiàn)了與市買的lipo-fectamine相同的綠色熒光蛋白和熒光素酶蛋白表達(dá)水平。

為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA,含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。雖然有幾項(xiàng)研究已經(jīng)調(diào)查了血液成分如何使脂質(zhì)和聚合物納米顆粒不穩(wěn)定,對(duì)于介導(dǎo)細(xì)胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統(tǒng)的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統(tǒng)給藥進(jìn)入血液后會(huì)發(fā)生不斷的變化。過多的聚合物鏈或脂質(zhì)體成分不強(qiáng)烈附著于復(fù)合物將從顆粒中脫落,而新的成分,如脂蛋白,可以粘附在復(fù)合物的表面。這不僅會(huì)導(dǎo)致顆粒的不穩(wěn)定,還會(huì)改變生物分布或促進(jìn)體內(nèi)***。了解在體內(nèi)遞送的每個(gè)階段(在給藥部位,在血液循環(huán)過程中,在***和組織的細(xì)胞外基質(zhì)中,以及**終進(jìn)入靶細(xì)胞時(shí)),多聚物和脂聚物的組成如何變化,可能有助于設(shè)計(jì)具有更高穩(wěn)定性的合成載體系統(tǒng)?;瘜W(xué)轉(zhuǎn)染可分為基于脂質(zhì)體或非基于脂質(zhì)體。

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deae-葡聚糖是一種化學(xué)修飾的葡聚糖類似物。通過用二乙基氨基乙基修飾,右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質(zhì)子化,這使得它可以自組裝成帶負(fù)電荷核酸的納米顆粒。deae -葡聚糖是***個(gè)用于核酸轉(zhuǎn)染的陽離子聚合物。早在20世紀(jì)50年代,它就極大地增強(qiáng)了脊髓灰質(zhì)炎病毒和SV40病毒DNA在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染。隨后,deae -葡聚糖被廣泛應(yīng)用于RNA或DNA的轉(zhuǎn)染。然而,由于以下原因,deae -葡聚糖并沒有作為比較好候選物:轉(zhuǎn)染效率遠(yuǎn)低于脂質(zhì)體等其他試劑;deae -葡聚糖的細(xì)胞毒性和免疫原性不容忽視。小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。蘇州轉(zhuǎn)染試劑現(xiàn)貨

人類原代干細(xì)胞是另一種公認(rèn)的難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染這種細(xì)胞類型的挑戰(zhàn)仍然是效率低和細(xì)胞活力低。體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體

基因和RNAi***在臨床上的應(yīng)用需要安全高效的載體。迄今為止,核酸***的兩種主要方法是基于病毒和非病毒載體。與病毒載體相關(guān)的安全問題有很多:誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)、不必要的突變和**。因此,在開發(fā)基于脂質(zhì)或聚合載體的非病毒載體是勢(shì)在必行的。1965年,Vaheri和Pagano引入了二乙基氨基乙基修飾的葡聚糖,這是第一種用于基因傳遞的聚合物。1987年,F(xiàn)elgner引入了DOTMA,這是第一種用于DNA轉(zhuǎn)染的陽離子脂質(zhì)。從那時(shí)起,大量不同的脂質(zhì)和聚合物被開發(fā)出來。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級(jí)脂質(zhì)體囊泡中的技術(shù),開發(fā)出了Gemate系列轉(zhuǎn)染試劑。體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體