質(zhì)子泵抑制劑可以通過(guò)基于從一個(gè)供體蛋白到受體蛋白的能量轉(zhuǎn)移的物理測(cè)量來(lái)評(píng)估，也可以通過(guò)化學(xué)測(cè)量來(lái)評(píng)估，在化學(xué)測(cè)量中，表達(dá)的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的相互作用活性可以在刺激時(shí)通過(guò)適當(dāng)?shù)膱?bào)告系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)，它是熒光共振能量轉(zhuǎn)移研究質(zhì)子泵抑制劑的替代方法。多個(gè)質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導(dǎo)RNA的質(zhì)粒遞送到宿主細(xì)胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進(jìn)行基因組編輯。除了使用多個(gè)質(zhì)粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細(xì)胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達(dá)兩種不同基因的載體，通過(guò)一個(gè)內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)連接，只有一個(gè)啟動(dòng)子。研究已經(jīng)確定了陽(yáng)離子脂質(zhì)體（CLs）的某些特征，這些特征增強(qiáng)了它們?cè)隗w內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)核酸的能力。體外轉(zhuǎn)染試劑幫轉(zhuǎn)染

PEI的分子量對(duì)細(xì)胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。由于PEI在細(xì)胞內(nèi)不可降解，所以分子量越高，細(xì)胞毒性越強(qiáng)。此外，具有較高分子量的PEI形成更穩(wěn)定的聚合物，使其更容易轉(zhuǎn)染，但更難在細(xì)胞內(nèi)釋放核酸。另一方面，PEI產(chǎn)生的復(fù)合物分子量降低，更難以轉(zhuǎn)染;但它更容易釋放核酸。因此，確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實(shí)現(xiàn)的。然而，一些改進(jìn)使PEI在應(yīng)用中更加先進(jìn)。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯(lián)，可***降低細(xì)胞毒性并保持較高的轉(zhuǎn)染效率。通過(guò)用丙烯酸乙酯修飾胺，伯胺的乙酰化，或在聚合物結(jié)構(gòu)中引入帶負(fù)電荷的丙酸或琥珀酸基團(tuán)，可以制備出各種無(wú)毒的分支PEI衍生物。由此產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功。inhibtor轉(zhuǎn)染試劑現(xiàn)貨RNA 轉(zhuǎn)染試劑是一類(lèi)能夠?qū)?RNA 分子導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)作用原理。

納米顆粒，由于其在DNA轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中的保護(hù)能力，在不久的將來(lái)可以用作轉(zhuǎn)基因的非病毒載體。通過(guò)將納米粒子與許多不同的配體和化合物連接來(lái)修飾納米粒子，有助于改善它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸。將納米顆粒靶向到細(xì)胞內(nèi)的特定位置，配子和胚胎，可以通過(guò)磁轉(zhuǎn)染來(lái)實(shí)現(xiàn)。盡管與市售的用于體外培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑相比，使用納米顆粒轉(zhuǎn)染具有相當(dāng)?shù)男屎透偷募?xì)胞毒性，但仍需要證明以這種方式傳遞DNA會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)相似水平的基因表達(dá)，特別是考慮到該技術(shù)可能導(dǎo)致副作用。

魚(yú)精蛋白作為RNA遞送穩(wěn)定劑具有重要作用，其具體作用機(jī)制主要包括以下幾個(gè)方面：一、保護(hù)RNA免受降解魚(yú)精蛋白是一種天然陽(yáng)離子肽混合物，由于其帶正電荷的特性，可以與帶負(fù)電荷的RNA通過(guò)相反電荷驅(qū)動(dòng)耦合23。在生物系統(tǒng)中，RNA很容易被RNase降解，而魚(yú)精蛋白可以與RNA復(fù)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而保護(hù)RNA免受降解1213。例如，通過(guò)將單鏈RNA（ssRNA）與帶正電荷的蛋白魚(yú)精蛋白復(fù)合，可以穩(wěn)定陰離子RNA1213。二、增強(qiáng)細(xì)胞穿透性魚(yú)精蛋白不僅可以保護(hù)RNA，還能增強(qiáng)RNA的穿透細(xì)胞的能力。魚(yú)精蛋白-RNA復(fù)合物的形成具有雙重功能，一方面保護(hù)RNA不被降解，另一方面增強(qiáng)其穿透進(jìn)入細(xì)胞的能力23。這種增強(qiáng)的細(xì)胞穿透性可能是由于魚(yú)精蛋白的陽(yáng)離子性質(zhì)，使其能夠與細(xì)胞膜相互作用，促進(jìn)RNA的進(jìn)入細(xì)胞2。影響物理轉(zhuǎn)染或機(jī)械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。

三、脂質(zhì)體組成對(duì)轉(zhuǎn)染效率的影響不同脂質(zhì)組成的影響：研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體的組成對(duì)不同類(lèi)型細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率有影響。例如，四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質(zhì)體配方對(duì)不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率不同。Huh7和AGS細(xì)胞的比較好脂質(zhì)體組成是T1P0和T3P1；COS7細(xì)胞是T3P1和T1P1；A549細(xì)胞是T1P1和T1P36。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的影響：脂質(zhì)體復(fù)合物的形狀會(huì)隨著DOPE比例的增加從層狀結(jié)構(gòu)變?yōu)榈沽切谓Y(jié)構(gòu)，但在所有使用的細(xì)胞系中，特定結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)染效率上沒(méi)有明確的優(yōu)勢(shì)6。四、其他因素的影響血清的影響：對(duì)于某些細(xì)胞，血清的存在會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。如Siha細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)轉(zhuǎn)染效率更高，而在Caco-2細(xì)胞的轉(zhuǎn)染中，血清在本實(shí)驗(yàn)室條件下并不影響轉(zhuǎn)染效率19。細(xì)胞傳代次數(shù)：Caco-2細(xì)胞在2-5次細(xì)胞傳代時(shí)轉(zhuǎn)染效率比較高9。綜上所述，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染對(duì)不同類(lèi)型細(xì)胞的影響存在多方面的差異，包括轉(zhuǎn)染效率、影響因素以及脂質(zhì)體組成等。在進(jìn)行脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要根據(jù)不同的細(xì)胞類(lèi)型優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，以獲得比較好的轉(zhuǎn)染效果。為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。廣東轉(zhuǎn)染試劑難轉(zhuǎn)染

流式細(xì)胞術(shù)可以更精確地定量表達(dá)特定熒光基因的細(xì)胞，以評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。體外轉(zhuǎn)染試劑幫轉(zhuǎn)染

為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。雖然有幾項(xiàng)研究已經(jīng)調(diào)查了血液成分如何使脂質(zhì)和聚合物納米顆粒不穩(wěn)定，對(duì)于介導(dǎo)細(xì)胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統(tǒng)的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統(tǒng)給藥進(jìn)入血液后會(huì)發(fā)生不斷的變化。過(guò)多的聚合物鏈或脂質(zhì)體成分不強(qiáng)烈附著于復(fù)合物將從顆粒中脫落，而新的成分，如脂蛋白，可以粘附在復(fù)合物的表面。這不僅會(huì)導(dǎo)致顆粒的不穩(wěn)定，還會(huì)改變生物分布或促進(jìn)體內(nèi)***。了解在體內(nèi)遞送的每個(gè)階段(在給藥部位，在血液循環(huán)過(guò)程中，在***和組織的細(xì)胞外基質(zhì)中，以及**終進(jìn)入靶細(xì)胞時(shí))，多聚物和脂聚物的組成如何變化，可能有助于設(shè)計(jì)具有更高穩(wěn)定性的合成載體系統(tǒng)。體外轉(zhuǎn)染試劑幫轉(zhuǎn)染