為了在體外和體內(nèi)可重復地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。雖然有幾項研究已經(jīng)調(diào)查了血液成分如何使脂質(zhì)和聚合物納米顆粒不穩(wěn)定，對于介導細胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統(tǒng)的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統(tǒng)給藥進入血液后會發(fā)生不斷的變化。過多的聚合物鏈或脂質(zhì)體成分不強烈附著于復合物將從顆粒中脫落，而新的成分，如脂蛋白，可以粘附在復合物的表面。這不僅會導致顆粒的不穩(wěn)定，還會改變生物分布或促進體內(nèi)***。了解在體內(nèi)遞送的每個階段(在給藥部位，在血液循環(huán)過程中，在***和組織的細胞外基質(zhì)中，以及**終進入靶細胞時)，多聚物和脂聚物的組成如何變化，可能有助于設(shè)計具有更高穩(wěn)定性的合成載體系統(tǒng)。在轉(zhuǎn)染實驗中使用對照對于確定所使用的轉(zhuǎn)染試劑和核酸的效果和效率至關(guān)重要。長沙轉(zhuǎn)染試劑價格

此外，病毒濃度被認為是影響轉(zhuǎn)導效率的另一個因素。在Haas等人的評估中測試的其他幾個參數(shù)中，即含有不同輔助蛋白的HIV慢病毒載體構(gòu)建，纖維連接蛋白片段的存在/不存在以及在人臍帶血和胚胎腎細胞的轉(zhuǎn)導培養(yǎng)基中添加多陽離子硫酸魚精蛋白，只有病毒滴度似乎與病毒轉(zhuǎn)導效率直接相關(guān)。轉(zhuǎn)染介質(zhì)的條件也可能影響轉(zhuǎn)導效率。例如，在轉(zhuǎn)導過程中，使用胎牛血清比牛血清產(chǎn)生更好的轉(zhuǎn)導效率。同樣，研究表明，deae-葡聚糖等多陽離子可以比較大限度地減少帶負電荷細胞之間的排斥力，并促進病毒轉(zhuǎn)導。影響化學轉(zhuǎn)染效率的因素遼寧大鼠轉(zhuǎn)染試劑在大腸桿菌細胞中復制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細菌DNA中的頻率相似。

脂質(zhì)體組成：脂質(zhì)體的組成對轉(zhuǎn)染效率有重要影響。不同的脂質(zhì)體可能具有不同的電荷性質(zhì)、大小和穩(wěn)定性，這些因素都會影響脂質(zhì)體與細胞的相互作用。陽離子脂質(zhì)體通常具有較高的轉(zhuǎn)染效率，因為它們可以與帶負電荷的DNA結(jié)合，并通過靜電作用與細胞表面結(jié)合。例如，Lipofectamine2000和Lipofectamine3000都是常用的陽離子脂質(zhì)體，它們在不同類型的細胞中都表現(xiàn)出較高的轉(zhuǎn)染效率11316。脂質(zhì)體的組成還可能影響其在細胞內(nèi)的釋放和穩(wěn)定性。一些脂質(zhì)體可能更容易被細胞內(nèi)的酶降解，從而降低轉(zhuǎn)染效率。

質(zhì)子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉(zhuǎn)移的物理測量來評估，也可以通過化學測量來評估，在化學測量中，表達的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當?shù)膱蟾嫦到y(tǒng)來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)，它是熒光共振能量轉(zhuǎn)移研究質(zhì)子泵抑制劑的替代方法。多個質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導RNA的質(zhì)粒遞送到宿主細胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進行基因組編輯。除了使用多個質(zhì)粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達兩種不同基因的載體，通過一個內(nèi)部核糖體進入位點連接，只有一個啟動子。轉(zhuǎn)染是將外源核酸送入細胞的過程，其目的是使外源基因編碼的蛋白能夠在細胞中表達。

納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細胞轉(zhuǎn)染，但似乎找到一種既能改善基因表達又不影響細胞、不對細胞造成損害的比較好技術(shù)也至關(guān)重要。納米顆粒參與內(nèi)皮運輸?shù)哪芰κ蛊淠軌蚓脑O(shè)計**精確的方法，將基因結(jié)構(gòu)靶向到特定的作用位置。來自不同化合物和元素的納米顆粒的作用方式與轉(zhuǎn)染的非病毒載體相同，這使它們能夠通過內(nèi)吞作用將DNA運輸過細胞膜。DNA被包裹起來，很容易從核內(nèi)體中釋放出來，也被核酸酶保護著不被消化。由于有許多不同種類的納米顆粒，找到**適合轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞的納米顆粒是至關(guān)重要的。將納米顆粒與其他化合物連接成多功能、復雜的運輸單元，可以提高穿越細胞膜和細胞內(nèi)運輸?shù)男?。將蛋白質(zhì)或多肽結(jié)合到納米顆粒上，根據(jù)細胞類型的不同，轉(zhuǎn)染效率提高了5到10倍。Severino et al.進行的研究也指出了陽離子脂質(zhì)作為基因遞送納米載體的潛在毒性。青海小鼠轉(zhuǎn)染試劑

在轉(zhuǎn)染中，DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運到宿主細胞中。長沙轉(zhuǎn)染試劑價格

影響物理轉(zhuǎn)染或機械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。例如，電穿孔技術(shù)依賴于電場來增加宿主細胞膜的通透性，以內(nèi)化外來核酸。因此，電穿孔過程中的電壓和持續(xù)時間是決定電穿孔成功與否的重要因素。施加高壓的長時間電穿孔可能會導致細胞損傷并降低轉(zhuǎn)染效率。通過增加電脈沖的數(shù)量也可以提高電轉(zhuǎn)染效率，但這可能會降低細胞活力。另一方面，電轉(zhuǎn)染效率取決于所使用的細胞類型，每當要電轉(zhuǎn)染一種新的細胞類型時，應(yīng)優(yōu)化電穿孔條件。一些細胞如T淋巴細胞，即使在標準的電穿孔條件下也可能轉(zhuǎn)染不良，而電轉(zhuǎn)染成纖維細胞通?？梢援a(chǎn)生良好的轉(zhuǎn)染結(jié)果。電穿孔緩沖液的組成是影響轉(zhuǎn)染效率的另一個關(guān)鍵參數(shù)。據(jù)報道，電穿孔緩沖液中的ATP酶抑制劑如利多卡因可提高電穿孔后的細胞活力，而使用K+-based緩沖液的轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于Mg2+-based緩沖液。假設(shè)Mg2+離子在***ATP酶以恢復電穿孔后的離子穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，以比較大限度地減少細胞死亡，但可能會降低轉(zhuǎn)染效率。因此，應(yīng)優(yōu)化由多種成分組成的合適的電穿孔緩沖液配方，以確保轉(zhuǎn)染效率和電穿孔后細胞活力之間的平衡。長沙轉(zhuǎn)染試劑價格