RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達和80％以上的活細胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細胞進行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細胞。此外，基因表達迅速且持久，對經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對于在納米載體形成之前預混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時用單獨形成的納米載體轉(zhuǎn)染細胞（平行共轉(zhuǎn)染），分析決定共轉(zhuǎn)染效率的定量參數(shù)。同時遞送siRNA和mRNA也表明整合方法的比較高共轉(zhuǎn)染效率，但由于兩個**運營實體的峰值輸出在動力學上不同，連續(xù)交付的效率比較高。在選擇合適的小RNA分子進行轉(zhuǎn)染相關功能分析之前，應先確定其實驗需要。長沙轉(zhuǎn)染試劑公司

RNA轉(zhuǎn)染試劑是一類能夠?qū)NA分子導入細胞內(nèi)的物質(zhì)，其作用原理主要涉及以下幾個方面。利用電荷相互作用：許多RNA轉(zhuǎn)染試劑是陽離子性的，它們可以與帶負電荷的RNA分子通過靜電相互作用結合形成復合物。例如，魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物，由于相反電荷驅(qū)動的耦合作用，被用于細胞內(nèi)核酸的遞送8。魚精蛋白不僅可以保護RNA免受生物系統(tǒng)中的降解，還能增強其對細胞的穿透能力。陽離子脂質(zhì)體也是常見的轉(zhuǎn)染試劑之一。以LipofectamineTM2000為例，它可以介導攜帶綠色熒光蛋白基因的真核表達載體轉(zhuǎn)染至雞成骨細胞9。陽離子脂質(zhì)體通過其陽離子頭部與RNA的負電荷相互作用，形成脂質(zhì)體-RNA復合物，然后通過與細胞膜的融合或內(nèi)吞作用將RNA導入細胞內(nèi)。內(nèi)吞作用途徑：一些RNA轉(zhuǎn)染試劑通過內(nèi)吞作用進入細胞。如合成的8-mer兩親性反式多聚2'-O-甲基尿苷硫代磷酸三酯RNA元件（2'-OMeUtaPS），它能介導將不帶電荷的聚A尾磷酸二酰胺基嗎啉代序列（PMO）高效遞送至HeLapLuc705細胞或肌管肌肉細胞。已確定大胞飲作用是HeLapLuc705細胞中使用的主要內(nèi)吞途徑。湖南轉(zhuǎn)染試劑在轉(zhuǎn)染中，DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運到宿主細胞中。

對于容易轉(zhuǎn)染的貼壁細胞如人胚腎細胞（HEK293）和人宮頸*細胞（HeLa），脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率相對較高。這些細胞具有較強的內(nèi)吞能力，能夠有效地攝取脂質(zhì)體-核酸復合物。例如，在標準的轉(zhuǎn)染條件下，HEK293細胞的轉(zhuǎn)染效率可以達到50%-70%。而對于一些難轉(zhuǎn)染的貼壁細胞，如原代肝細胞和某些神經(jīng)細胞，其轉(zhuǎn)染效率較低。這是因為它們的細胞膜結構比較復雜，可能存在較厚的糖萼或者緊密的細胞間連接，阻礙了脂質(zhì)體-核酸復合物的進入。例如，原代肝細胞的轉(zhuǎn)染效率可能只有10%-20%。

一般來說，貼壁細胞對脂質(zhì)體的耐受性相對較好。但是，在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的情況下，即使是耐受性好的細胞也會受到影響。例如，HeLa細胞在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染時，可能會出現(xiàn)細胞膜完整性受損，表現(xiàn)為細胞內(nèi)乳酸脫氫酶（LDH）釋放增加，細胞的代謝活動也會受到一定程度的干擾。對于難轉(zhuǎn)染的貼壁細胞，由于其本身比較脆弱，較低濃度的脂質(zhì)體也可能產(chǎn)生明顯的細胞毒性。比如原代神經(jīng)細胞，脂質(zhì)體可能會破壞其精細的神經(jīng)突起結構，影響細胞的正常生理功能。

考慮多因子轉(zhuǎn)染能力如果實驗需要同時轉(zhuǎn)染多個RNA分子或進行共轉(zhuǎn)染實驗，那么選擇具有多因子轉(zhuǎn)染能力的試劑是重要的。共轉(zhuǎn)染效果：一些轉(zhuǎn)染試劑可以有效地實現(xiàn)多個RNA分子的共轉(zhuǎn)染，而另一些試劑可能在共轉(zhuǎn)染方面效果不佳。在脂質(zhì)體方法用于modRNA轉(zhuǎn)染各種類型細胞的初步研究中，MessageMax能將modGFP高效轉(zhuǎn)染入多種細胞中，并實現(xiàn)modGFP和modmCherry在MEF細胞中的共轉(zhuǎn)及核內(nèi)因子nGFP和mTBX5在MEF細胞核中的定位5。選擇適合多因子轉(zhuǎn)染的試劑：根據(jù)實驗需求，選擇能夠滿足多因子轉(zhuǎn)染要求的轉(zhuǎn)染試劑。例如，如果實驗需要同時轉(zhuǎn)染多個基因或進行基因編輯實驗，那么選擇具有多因子轉(zhuǎn)染能力的轉(zhuǎn)染試劑可以提高實驗效率。PEI的分子量對細胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑GenMute試劑在人肝*細胞模型中的應用：在人肝*細胞HepG2和Huh7.5中，研究對比了脂質(zhì)體類的Lipofectamine?RNAiMAX和HepG2特異性的聚合物類GenMute?兩種轉(zhuǎn)染試劑30。通過細胞成像分析發(fā)現(xiàn)，GenMute處理的細胞對熒光標記的陰性對照siRNA的攝取高于LipofectamineRNAiMAX轉(zhuǎn)染的細胞。并且，MTT實驗表明，GenMute轉(zhuǎn)染的細胞比LipofectamineRNAiMAX處理的細胞具有更高的存活率。這提示在人肝*細胞模型中，GenMute試劑可能是更適合的轉(zhuǎn)染試劑，在提高轉(zhuǎn)染效率的同時降低了細胞死亡。siRNA共軛殼聚糖納米顆粒在脊髓損傷模型中的應用：在創(chuàng)傷性脊髓損傷（SCI）模型中，通過制備帶有抗體靶向部分的siRNA共軛殼聚糖復合物，以抑制誘導型一氧化氮合酶（iNOS）的表達，該復合物主要靶向M1巨噬細胞31。實驗結果表明，Ab-siRNA共軛殼聚糖納米顆粒在體外***降低了M1極化巨噬細胞中的iNOS表達，具有高轉(zhuǎn)染效率和低細胞毒性。在體內(nèi)應用該納米顆粒后，SCI后的iNOS表達和細胞凋亡均減少。這說明在特定的病理模型中，針對性設計的納米顆粒轉(zhuǎn)染試劑可以在提高轉(zhuǎn)染效率的同時降低細胞死亡。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中。lipo3000轉(zhuǎn)染試劑疫苗

化學轉(zhuǎn)染可分為基于脂質(zhì)體或非基于脂質(zhì)體。長沙轉(zhuǎn)染試劑公司

    考慮RNA需求較少的RNA需求可以降低實驗成本，同時也可以減少對細胞的潛在毒性。比較不同試劑的RNA用量：不同的轉(zhuǎn)染試劑可能需要不同量的RNA才能達到相同的轉(zhuǎn)染效果。在選擇比較好的RNA轉(zhuǎn)染試劑并將其與電穿孔法進行病毒RNA的比較的研究中，某些商業(yè)轉(zhuǎn)染試劑在適當優(yōu)化后，細胞死亡少得多，RNA需求少，轉(zhuǎn)染效率提高3?？紤]實驗規(guī)模：如果實驗需要大量轉(zhuǎn)染細胞，那么選擇RNA需求較少的試劑可以降低成本。例如，在大規(guī)模的細胞培養(yǎng)實驗中，選擇RNA需求少的轉(zhuǎn)染試劑可以節(jié)省成本和資源。四、考慮血清兼容性在有血清的情況下能夠遞送RNA的轉(zhuǎn)染試劑可以簡化實驗操作，提高實驗的可重復性。血清對轉(zhuǎn)染的影響：一些轉(zhuǎn)染試劑在有血清的情況下可能會降低轉(zhuǎn)染效率，而另一些試劑則可以在血清存在的情況下正常工作。在比較不同商業(yè)RNA轉(zhuǎn)染試劑將黃熱病病毒（YFV）和丙型肝炎病毒（HCV）RNA復制子遞送至Huh7細胞的能力的研究中，討論了與高效轉(zhuǎn)染相關的因素，以及在存在血清的情況下能夠遞送RNA的優(yōu)勢3。選擇血清兼容的試劑：如果實驗需要在有血清的條件下進行，那么選擇血清兼容的轉(zhuǎn)染試劑是必要的。例如，在一些細胞培養(yǎng)實驗中，血清是細胞生長所必需的。 長沙轉(zhuǎn)染試劑公司