轉(zhuǎn)染時(shí)間：轉(zhuǎn)染時(shí)間的長(zhǎng)短也會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。過長(zhǎng)或過短的轉(zhuǎn)染時(shí)間都可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低。在陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000對(duì)PC12細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染時(shí)間為6h時(shí)轉(zhuǎn)染效率較高3。在優(yōu)化宮頸*細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率的實(shí)驗(yàn)中，Hela細(xì)胞系和Siha細(xì)胞系的比較好轉(zhuǎn)染時(shí)間為24小時(shí)1。細(xì)胞接種密度：細(xì)胞接種密度也會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。過高或過低的細(xì)胞接種密度都可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低。在脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞效率的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，2×105接種密度時(shí)轉(zhuǎn)染效率比較高9。在優(yōu)化宮頸*細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率的實(shí)驗(yàn)中，Hela細(xì)胞系和Siha細(xì)胞系的比較好接種密度分別為1.5×104（每孔24孔板）1。血清的有無：血清的存在可能會(huì)影響脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率。一些實(shí)驗(yàn)表明，血清可能會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率，而另一些實(shí)驗(yàn)則表明血清對(duì)轉(zhuǎn)染效率沒有影響。在優(yōu)化宮頸*細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率的實(shí)驗(yàn)中，與含血清培養(yǎng)基相比，只有Siha細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)在轉(zhuǎn)染前獲得了更高的轉(zhuǎn)染效率（P＜0.01）1。在脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞效率的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，血清在本實(shí)驗(yàn)室條件下并不影響轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染是將外來核酸傳遞到真核細(xì)胞中以修飾宿主細(xì)胞的遺傳組成的過程。河北細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

考慮多因子轉(zhuǎn)染能力如果實(shí)驗(yàn)需要同時(shí)轉(zhuǎn)染多個(gè)RNA分子或進(jìn)行共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，那么選擇具有多因子轉(zhuǎn)染能力的試劑是重要的。共轉(zhuǎn)染效果：一些轉(zhuǎn)染試劑可以有效地實(shí)現(xiàn)多個(gè)RNA分子的共轉(zhuǎn)染，而另一些試劑可能在共轉(zhuǎn)染方面效果不佳。在脂質(zhì)體方法用于modRNA轉(zhuǎn)染各種類型細(xì)胞的初步研究中，MessageMax能將modGFP高效轉(zhuǎn)染入多種細(xì)胞中，并實(shí)現(xiàn)modGFP和modmCherry在MEF細(xì)胞中的共轉(zhuǎn)及核內(nèi)因子nGFP和mTBX5在MEF細(xì)胞核中的定位5。選擇適合多因子轉(zhuǎn)染的試劑：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇能夠滿足多因子轉(zhuǎn)染要求的轉(zhuǎn)染試劑。例如，如果實(shí)驗(yàn)需要同時(shí)轉(zhuǎn)染多個(gè)基因或進(jìn)行基因編輯實(shí)驗(yàn)，那么選擇具有多因子轉(zhuǎn)染能力的轉(zhuǎn)染試劑可以提高實(shí)驗(yàn)效率。西安轉(zhuǎn)染試劑難轉(zhuǎn)染是由非離子核酸與陽離子脂質(zhì)體（CLs）表面結(jié)合，形成多層脂質(zhì)-核酸復(fù)合物而形成的。

轉(zhuǎn)染試劑用量：轉(zhuǎn)染試劑的用量是影響轉(zhuǎn)染效率的重要因素之一。過多或過少的轉(zhuǎn)染試劑都可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低。在陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000對(duì)PC12細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)lipo2000用量為5μL，DNA2μg，轉(zhuǎn)染時(shí)間為6h時(shí)，PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)染率高達(dá)40%，且未影響細(xì)胞的正常分泌3。在脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞效率的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，研究了細(xì)胞接種密度、DNA用量、脂質(zhì)體與DNA的比例等因素對(duì)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率的影響。結(jié)果表明，2-5次細(xì)胞傳代，2×105接種密度、4μgDNA用量、2.5:1的脂質(zhì)體與DNA比例、30min脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物形成時(shí)間以及6h細(xì)胞與復(fù)合物孵育時(shí)間，轉(zhuǎn)染效率比較高9

考慮細(xì)胞毒性低細(xì)胞毒性的轉(zhuǎn)染試劑對(duì)于保持細(xì)胞的活性和正常生理功能至關(guān)重要。評(píng)估細(xì)胞活力：可以通過檢測(cè)細(xì)胞的存活率、增殖能力等指標(biāo)來評(píng)估轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞毒性。在研究不同轉(zhuǎn)染試劑對(duì)C2C12細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率時(shí)，通過優(yōu)化DNA:轉(zhuǎn)染劑比例和細(xì)胞密度，使所有試劑在達(dá)到較高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和活力的影響有限6。在比較不同轉(zhuǎn)染試劑遞送siRNA的攝取、敲低效率和毒性情況的研究中，新開發(fā)的CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時(shí)毒性比較低7。選擇溫和的試劑：一些轉(zhuǎn)染試劑可能對(duì)細(xì)胞的毒性較小，例如基于脂質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑通常比基于病毒的轉(zhuǎn)染試劑更溫和。在顱內(nèi)遞送合成mRNA的研究中，使用常用的轉(zhuǎn)染試劑將合成mRNA遞送至小鼠大腦，結(jié)果表明該模型中合成mRNA可以成功遞送至大腦，且沒有可測(cè)量的毒性8。流式細(xì)胞術(shù)可以更精確地定量表達(dá)特定熒光基因的細(xì)胞，以評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。

其他轉(zhuǎn)染試劑：機(jī)制概述：例如CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染機(jī)制可能與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑不同。該試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時(shí)毒性比較低。其具體轉(zhuǎn)染機(jī)制可能涉及對(duì)RNA的攝取、細(xì)胞利用率及細(xì)胞毒性的綜合作用。在不同細(xì)胞類型中的表現(xiàn)：目前文獻(xiàn)中未明確提及CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑在特定細(xì)胞類型中的具體表現(xiàn)，但研究表明該試劑為難轉(zhuǎn)染細(xì)胞的RNA干擾帶來了新的選擇7。綜上所述，不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類型中的轉(zhuǎn)染機(jī)制存在差異，這些差異主要表現(xiàn)在與RNA的結(jié)合方式、進(jìn)入細(xì)胞的途徑以及在細(xì)胞內(nèi)的釋放和作用方式等方面。了解這些差異對(duì)于選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行特定細(xì)胞類型的RNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)具有重要意義。在轉(zhuǎn)染中，DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運(yùn)到宿主細(xì)胞中。中國澳門mRNA轉(zhuǎn)染試劑

RNA 轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類型中的效果存在明顯差異。河北細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

優(yōu)化電轉(zhuǎn)方法篩選**適電壓和脈沖時(shí)間：不同細(xì)胞種類電轉(zhuǎn)所需的**適電壓和脈沖時(shí)間不同。例如，人成纖維細(xì)胞電轉(zhuǎn)modRNA的**適電壓為440V，**適脈沖時(shí)間為30ms；Hela、293T、3T3細(xì)胞電轉(zhuǎn)**適電壓分別為425V、400V、440V，**適脈沖時(shí)間均為30ms；人/兔外周血來源的懸浮的單個(gè)核細(xì)胞的**適電壓分別為840V和860V，**適脈沖時(shí)間均為20ms。通過篩選**適電壓和脈沖時(shí)間，可以提高RNA轉(zhuǎn)染效率，同時(shí)證明了電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)染modRNA進(jìn)入細(xì)胞的可行性，且可同時(shí)將兩種modRNA導(dǎo)入同一個(gè)細(xì)胞內(nèi)6。RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細(xì)胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實(shí)現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細(xì)胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達(dá)和80％以上的活細(xì)胞。GFPRNA對(duì)未刺激的人PBMC或鼠脾細(xì)胞進(jìn)行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細(xì)胞。此外，基因表達(dá)迅速且持久，對(duì)經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細(xì)胞未觀察到不良影響7。河北細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑