其他轉(zhuǎn)染試劑：機制概述：例如CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染機制可能與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑不同。該試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時毒性比較低。其具體轉(zhuǎn)染機制可能涉及對RNA的攝取、細胞利用率及細胞毒性的綜合作用。在不同細胞類型中的表現(xiàn)：目前文獻中未明確提及CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑在特定細胞類型中的具體表現(xiàn)，但研究表明該試劑為難轉(zhuǎn)染細胞的RNA干擾帶來了新的選擇7。綜上所述，不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中的轉(zhuǎn)染機制存在差異，這些差異主要表現(xiàn)在與RNA的結(jié)合方式、進入細胞的途徑以及在細胞內(nèi)的釋放和作用方式等方面。了解這些差異對于選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑進行特定細胞類型的RNA轉(zhuǎn)染實驗具有重要意義。但似乎找到一種既能改善基因表達又不影響細胞、不對細胞造成損害的技術(shù)也至關(guān)重要。北京轉(zhuǎn)染試劑公司

考慮細胞毒性低細胞毒性的轉(zhuǎn)染試劑對于保持細胞的活性和正常生理功能至關(guān)重要。評估細胞活力：可以通過檢測細胞的存活率、增殖能力等指標來評估轉(zhuǎn)染試劑的細胞毒性。在研究不同轉(zhuǎn)染試劑對C2C12細胞的轉(zhuǎn)染效率時，通過優(yōu)化DNA:轉(zhuǎn)染劑比例和細胞密度，使所有試劑在達到較高轉(zhuǎn)染效率的同時，對細胞生長和活力的影響有限6。在比較不同轉(zhuǎn)染試劑遞送siRNA的攝取、敲低效率和毒性情況的研究中，新開發(fā)的CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時毒性比較低7。選擇溫和的試劑：一些轉(zhuǎn)染試劑可能對細胞的毒性較小，例如基于脂質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑通常比基于病毒的轉(zhuǎn)染試劑更溫和。在顱內(nèi)遞送合成mRNA的研究中，使用常用的轉(zhuǎn)染試劑將合成mRNA遞送至小鼠大腦，結(jié)果表明該模型中合成mRNA可以成功遞送至大腦，且沒有可測量的毒性8。lipo3000轉(zhuǎn)染試劑性價比高在選擇合適的小RNA分子進行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應先確定其實驗需要。

    emlikiForestvirus相關(guān)細胞：利用基于SemlikiForestvirus的RNA和DNA向量研究非病毒細胞穿透肽遞送載體PepFect6與陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000的轉(zhuǎn)染效率，并評估它們對病毒復制的影響。結(jié)果表明，PepFect6***證明能夠?qū)⒋螅?3-19kbp）構(gòu)建體轉(zhuǎn)運穿過細胞膜。但使用PepFect6試劑遞送的DNA分子被發(fā)現(xiàn)比使用Lipofectamine2000試劑遞送的DNA分子晚約。***，雖然PepFect6和Lipofectamine2000試劑都可用于alphavirus研究，但PepFect6更受青睞，因為它不會引起正常細胞表型的變化，也不會影響先前轉(zhuǎn)染細胞中病毒的正常復制***周期12。奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞：應用帶有FAM標記的miRNA-185mimics為報告基因，檢測兩種不同轉(zhuǎn)染試劑（LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000）在細胞接種12、18、24h后的轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果顯示，無論使用Lipofectamine2000還是LipofectamineRNAiMAX作為奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞的轉(zhuǎn)染試劑，各組間12h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于18、24h，18h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于24h；LipofectamineRNAiMAX各時間點的轉(zhuǎn)染效率均極***高于Lipofectamine2000。使用LipofectamineRNAiMAX作為奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞的轉(zhuǎn)染試劑時，12h的熒光強度極***高于18、24h。

陽離子聚合物作為轉(zhuǎn)染試劑結(jié)合機制：以陽離子聚合物EZTransCellReagent為例，在優(yōu)化RNA干擾（RNAi）條件的研究中發(fā)現(xiàn)，陽離子聚合物通過與RNA分子結(jié)合來實現(xiàn)轉(zhuǎn)染14。例如，設(shè)計針對GFP的shRNA，使用EZ轉(zhuǎn)染試劑將其轉(zhuǎn)染到細胞中，shRNA***降低了GFP的表達。預稀釋的轉(zhuǎn)染試劑在室溫下以及小核酸的存在可增加轉(zhuǎn)染效率，且在24小時時達到峰值。與環(huán)狀核酸相比，線性核酸與陽離子聚合物結(jié)合時顯示出更高的轉(zhuǎn)染效率和更高的基因組整合率。作用特點：陽離子聚合物介導的RNAi條件優(yōu)化后，為未來的RNAi研究提供了有用的數(shù)據(jù)。納米顆粒，由于其在DNA轉(zhuǎn)運到細胞中的保護能力，在不久的將來可以用作轉(zhuǎn)基因的非病毒載體。

魚精蛋白作為RNA遞送穩(wěn)定劑具有重要作用，其具體作用機制主要包括以下幾個方面：一、保護RNA免受降解魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物，由于其帶正電荷的特性，可以與帶負電荷的RNA通過相反電荷驅(qū)動耦合23。在生物系統(tǒng)中，RNA很容易被RNase降解，而魚精蛋白可以與RNA復合，形成穩(wěn)定的復合物，從而保護RNA免受降解1213。例如，通過將單鏈RNA（ssRNA）與帶正電荷的蛋白魚精蛋白復合，可以穩(wěn)定陰離子RNA1213。二、增強細胞穿透性魚精蛋白不僅可以保護RNA，還能增強RNA的穿透細胞的能力。魚精蛋白-RNA復合物的形成具有雙重功能，一方面保護RNA不被降解，另一方面增強其穿透進入細胞的能力23。這種增強的細胞穿透性可能是由于魚精蛋白的陽離子性質(zhì)，使其能夠與細胞膜相互作用，促進RNA的進入細胞2。在腺病毒載體或脂質(zhì)體的全身遞送后，轉(zhuǎn)基因表達相對短暫。上海Lipo2000轉(zhuǎn)染試劑

與DNA轉(zhuǎn)染類似，RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導入真核細胞。北京轉(zhuǎn)染試劑公司

聯(lián)合使用其他技術(shù)優(yōu)化DNA和RNA轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)染試劑在肌肉細胞中的應用：在C2C12細胞中，比較了五種商業(yè)轉(zhuǎn)染試劑（Lipofectamine®3000、Viafect?、Fugene®HD、C2C12CellAvalanche®和JetOPTIMUS®）的轉(zhuǎn)染效率7。通過優(yōu)化DNA:轉(zhuǎn)染劑比例和細胞密度，所有試劑都達到了超過60%的轉(zhuǎn)染效率，且對細胞生長和活力的影響有限。然而，在C2C12細胞中優(yōu)化的用于DNA轉(zhuǎn)移的條件下，這些試劑對siRNA的轉(zhuǎn)移效率較低，并且對原代肌肉細胞的毒性較高。這提示在使用轉(zhuǎn)染試劑時，可以通過聯(lián)合使用其他技術(shù)或優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，以提高轉(zhuǎn)染效率并降低細胞死亡。例如，可以進一步研究不同試劑之間的聯(lián)合使用，或者優(yōu)化轉(zhuǎn)染后的培養(yǎng)條件，以降低細胞毒性。綜上所述，在不同細胞模型中提高RNA轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率同時降低細胞死亡，可以通過選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑、優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件以及聯(lián)合使用其他技術(shù)等方法來實現(xiàn)。未來的研究可以進一步深入探討不同細胞模型中比較好的轉(zhuǎn)染策略，以滿足不同研究領(lǐng)域的需求。北京轉(zhuǎn)染試劑公司