為何血清會(huì)存在批間差?如何避免此影響?因?yàn)檠鍋?lái)源于動(dòng)物,其組成成分有1000種左右,每個(gè)批號(hào)的組分和組分含量都是不固定的,因此批間差異是可能存在的。為了避免批間差異對(duì)細(xì)胞的影響,XP建議先進(jìn)行批號(hào)測(cè)試,篩選合適的批號(hào),備好庫(kù)存(血清未開(kāi)封時(shí),在-20℃下可保...
聚合酶鏈反應(yīng)也可以用作以下敏感試驗(yàn)的一部分組織分型,對(duì)移植至關(guān)重要。截至2008年,甚至有人提議用聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)取代傳統(tǒng)的血型抗體檢測(cè)。許多形式的病癥涉及致病基因的改變。通過(guò)使用基于聚合酶鏈反應(yīng)的測(cè)試來(lái)研究這些突變,醫(yī)治方案有時(shí)可以根據(jù)患者的不同而不同。聚合...
在體光纖成像記錄活細(xì)胞成像的安全性,對(duì)于被標(biāo)記細(xì)胞的基因表達(dá)譜和蛋白質(zhì)組進(jìn)行分析,可以評(píng)估報(bào)告基因?qū)?xì)胞功能的干擾作用。小動(dòng)物活的物體成像技術(shù),活的物體動(dòng)物成像技術(shù)的優(yōu)勢(shì),1、實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)、無(wú)創(chuàng)的在體監(jiān)測(cè) 2、發(fā)現(xiàn)早期病變,縮短評(píng)價(jià)周期3、評(píng)價(jià)更科學(xué),準(zhǔn)確、可靠4...
小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?來(lái)源不同:胎牛血清 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清采自出生10至14 天的小牛。組份與比例不同:兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同...
膜片鉗使用的注意事項(xiàng):工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對(duì)相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。它的基本原理是以一個(gè)光潔,直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細(xì)胞的膜接觸,之后對(duì)微電極另一端開(kāi)口處施加適當(dāng)?shù)呢?fù)壓用電極的纖細(xì)開(kāi)口...
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的循環(huán)參數(shù):預(yù)變性,模板DNA完全變性與PCR酶的完全對(duì)PCR能否成功至關(guān)重要,建議加熱時(shí)間參考試劑說(shuō)明書,一般未修飾的Taq酶時(shí)間為兩分鐘。變性步驟,循環(huán)中一般95℃,30秒足以使各種靶DNA序列完全變性,可能的情況下可縮短該步驟時(shí)間。變性時(shí)間...
膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:全細(xì)胞式膜片方式使細(xì)胞內(nèi)與浴槽之間的漏流極少。電極本身阻抗(1~10mω)與細(xì)胞封接后的阻抗相比較低,這種低接觸阻抗使單管電壓鉗容易實(shí)現(xiàn)。電極管內(nèi)與細(xì)胞之間彌散交換與平衡快,因而容易控制細(xì)胞內(nèi)液的成分。細(xì)胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有...
膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法:膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過(guò)加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過(guò)的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來(lái),由于電性能隔離與微電極的相對(duì)低電阻(1~5MΩ),只要對(duì)微電極施以電壓就...
膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過(guò)加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過(guò)的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來(lái),由于電性能隔離與微電極的相對(duì)低電阻(1~5MΩ),只要對(duì)微電極施以電壓就能對(duì)膜片進(jìn)行鉗制,從微電極引...
膜片鉗技術(shù)原理:膜片鉗技術(shù)的建立,對(duì)生物學(xué)科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過(guò)離子通道的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜單一的(或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。些技術(shù)的出現(xiàn)自然將細(xì)胞水平和分子水平的生理學(xué)研究聯(lián)系在一起,同時(shí)又將神經(jīng)科學(xué)的不同分野必...
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種在體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列的方法,故又稱為基因的體外擴(kuò)增法。PCR技術(shù)類似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR能快速特異擴(kuò)增任何已知目的基因或DN段,并能輕易在皮克(pg)水平起始DNA混合物...
在體監(jiān)測(cè)基因療于中的基因表達(dá),隨著 后基因組時(shí)代的到來(lái)和人們對(duì)疾病發(fā)生的發(fā)展機(jī)制的深入了解, 在基因水平上療于壞掉的、 心血管疾病、 和分子遺傳病等惡性疾病已經(jīng)得到國(guó)內(nèi)外研究人員越來(lái)越 較多的關(guān)注。如何客觀地檢測(cè)基因療于的臨床療效判斷終點(diǎn), 有效監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)基因在生...
在體光纖成像記錄相干斷層掃描的局限性是單能掃描生物組織表面下1-2毫米的深度。這是由于深度越大,光線無(wú)散射的射出表面的比例就越小,以至于無(wú)法檢測(cè)到。但是在檢測(cè)過(guò)程中不需要樣品制備過(guò)程,成像過(guò)程也不需要接觸被成像的組織。更重要的是,設(shè)備產(chǎn)生的激光是對(duì)人眼安全的近...
膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的,電壓鉗是利用負(fù)反饋技術(shù)將膜電位在空間和時(shí)間上固定于某一測(cè)定值,以研究動(dòng)作電位產(chǎn)生過(guò)程中膜的離子通透性與膜電位之間的依從關(guān)系。但電壓鉗只能研究一個(gè)細(xì)胞上眾多通道的綜合活動(dòng)規(guī)律,而無(wú)法反映單個(gè)通道的活動(dòng)特點(diǎn),同時(shí)通過(guò)細(xì)胞內(nèi)...
胎牛血清的合規(guī)血源產(chǎn)地對(duì)于細(xì)微差異即可決定成敗的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)來(lái)說(shuō),選擇來(lái)源安全、品質(zhì)優(yōu)良的胎牛血清至關(guān)重要。作為牛肉制品的副產(chǎn)品,胎牛血清的傳統(tǒng)產(chǎn)地包括澳大利亞,新西蘭, 美國(guó), 南美(烏拉圭&巴西)以及歐洲等畜牧業(yè)發(fā)達(dá)的區(qū)域。業(yè)內(nèi)通常會(huì)根據(jù)不同產(chǎn)地的牛情況,...
在體監(jiān)測(cè)基因療于中的基因表達(dá),隨著 后基因組時(shí)代的到來(lái)和人們對(duì)疾病發(fā)生的發(fā)展機(jī)制的深入了解, 在基因水平上療于壞掉的、 心血管疾病、 和分子遺傳病等惡性疾病已經(jīng)得到國(guó)內(nèi)外研究人員越來(lái)越 較多的關(guān)注。如何客觀地檢測(cè)基因療于的臨床療效判斷終點(diǎn), 有效監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)基因在生...
膜片鉗在通道研究中的重要作用:對(duì)離子通道生理與病理情況下作用機(jī)制的研究:通過(guò)對(duì)各種生理或病理情況下細(xì)胞膜某種離子通道特性的研究,了解該離子的生理意義及其在疾病過(guò)程中的作用機(jī)制。如對(duì)鈣離子在腦缺血神經(jīng)細(xì)胞損害中作用機(jī)制的研究表明,缺血性腦損害過(guò)程中,Ca2+ 介...
膜片鉗技術(shù)是用于紀(jì)錄全細(xì)胞或個(gè)別細(xì)胞膜上離子信道電生理特性的研究方法,目的在于提供基礎(chǔ)研究知識(shí)與新藥開(kāi)發(fā)時(shí)研究細(xì)胞電特性或小分子藥物對(duì)細(xì)胞膜上離子信道特性的影響,替開(kāi)發(fā)標(biāo)靶藥物提供一個(gè)測(cè)試平臺(tái)。傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)膜片鉗系統(tǒng)由人工操作,實(shí)驗(yàn)人員在取得元代細(xì)胞(例如心...
膜片鉗實(shí)驗(yàn)系統(tǒng):根據(jù)不同的電生理實(shí)驗(yàn)要求,可以組建不同的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),但有若干共同的基本部件,包括機(jī)械部分(防震工作臺(tái)、屏蔽罩、儀器設(shè)備架)、光學(xué)部分(顯微鏡、視頻監(jiān)視器、單色光系統(tǒng))、電子部件(膜片鉗放大器、刺激器、數(shù)據(jù)采集的設(shè)備、計(jì)算機(jī)系統(tǒng))和微操縱器在大多數(shù)...
在體光纖成像記錄可見(jiàn)光成像體內(nèi)可見(jiàn)光成像包括生物發(fā)光與熒光兩種技術(shù)。生物發(fā)光是用熒光素酶基因標(biāo)記DNA,利用其產(chǎn)生的蛋白酶與相應(yīng)底物發(fā)生生化反應(yīng)產(chǎn)生生物體內(nèi)的光信號(hào);而熒光技術(shù)則采用熒光報(bào)告基因(GFP、RFP)或熒光染料(包括熒光量子點(diǎn))等新型納米標(biāo)記材料進(jìn)...
基于聚合酶鏈反應(yīng)的遺傳(或脫氧核糖核酸)指紋圖譜協(xié)議的發(fā)展已在法醫(yī)學(xué)中得到較廣應(yīng)用:遺傳指紋以其辨別力的形式,可以從世界上所有人群中獨(dú)特地區(qū)分任何一個(gè)人。微小的DNA樣本可以從犯罪現(xiàn)場(chǎng),和比較的從嫌疑人那里,或者從DNA資料庫(kù)早期的證據(jù)或罪犯。這些測(cè)試的簡(jiǎn)單版...
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)準(zhǔn)備:引物內(nèi)部不應(yīng)出現(xiàn)互補(bǔ)序列。兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列,尤其是避免3 ′端的互補(bǔ)重疊。引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過(guò)70%,引物3′末端連續(xù)8個(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有完全互補(bǔ)序列,否則易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。引物3‘端的堿基,特別是...
膜片鉗電生理記錄技術(shù):膜片鉗技術(shù)的基本原理:膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級(jí),因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。然后對(duì)該膜片實(shí)行電壓鉗位,測(cè)量單個(gè)離子通道開(kāi)放產(chǎn)生的微小電流,這種...
聚合酶鏈反應(yīng)同時(shí)擴(kuò)增單個(gè)精子中幾個(gè)基因座的能力]增強(qiáng)了極大地增強(qiáng)了通過(guò)研究減數(shù)分裂后染色體交叉來(lái)進(jìn)行基因定位的傳統(tǒng)任務(wù)。通過(guò)分析數(shù)千個(gè)單個(gè)精子,已經(jīng)直接觀察到非常緊密基因座之間罕見(jiàn)的交叉事件。類似地,可以分析異常的缺失、插入、易位或倒位,所有這些都無(wú)需等待(或...
膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過(guò)加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過(guò)的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來(lái),由于電性能隔離與微電極的相對(duì)低電阻(1~5MΩ),只要對(duì)微電極施以電壓就能對(duì)膜片進(jìn)行鉗制,從微電極引...
在體光纖成像記錄的工作原理是將光源入射的光束經(jīng)由光纖送入調(diào)制器,在調(diào)制器內(nèi)與外界被測(cè)參數(shù)的相互作用, 使光的光學(xué)性質(zhì)如光的強(qiáng)度、波長(zhǎng)、頻率、相位、偏振態(tài)等發(fā)生變化,成為被調(diào)制的光信號(hào),再經(jīng)過(guò)光纖送入光電器件、經(jīng)解調(diào)器后獲得被測(cè)參數(shù)。整個(gè)過(guò)程中,光束經(jīng)由光纖導(dǎo)入...
膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過(guò)加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過(guò)的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來(lái),由于電性能隔離與微電極的相對(duì)低電阻(1~5MΩ),只要對(duì)微電極施以電壓就能對(duì)膜片進(jìn)行鉗制,從微電極引...
一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法:為了測(cè)量在不同藥物對(duì)細(xì)胞中的離子通道的影響,通常需要在膜片鉗實(shí)驗(yàn)中實(shí)施灌流。例如,需要檢驗(yàn)?zāi)撤N是否對(duì)某種離子通道的影響,則需要在細(xì)胞封接后記錄電流數(shù)據(jù),然后通過(guò)在細(xì)胞周圍快速給藥再次記錄電流數(shù)據(jù)即可對(duì)比數(shù)據(jù)判斷該對(duì)離子通道的...
在體光纖成像記錄就是生物樣本的造影技術(shù),依照樣本尺度大小可以概分為組織造影與細(xì)胞分子的顯微技術(shù)。這些大致都需要光學(xué)技術(shù)配合生物樣本的特性發(fā)展,少數(shù)會(huì)使用光以外的波動(dòng)性質(zhì)將圖像光信號(hào)變?yōu)殡娦盘?hào)的器件,它是利用少數(shù)載流子的注入、存儲(chǔ)和轉(zhuǎn)移等物理過(guò)程來(lái)完成幾種電路功...
不同產(chǎn)地的胎牛血清,品質(zhì)也是相差甚遠(yuǎn)。值得注意的是,胎牛血清是動(dòng)物源生物制品,我國(guó)對(duì)于動(dòng)物源制品的進(jìn)口一直有很嚴(yán)格的規(guī)定,目前我國(guó)批準(zhǔn)進(jìn)口的胎牛血清來(lái)源是澳大利亞、新西蘭和烏拉圭,合法正規(guī)途徑進(jìn)口的胎牛血清必須在產(chǎn)品包裝上標(biāo)注血源地。這意味著,其他血源地的胎牛...