膜片鉗操作實驗:在大多數(shù)膜片鉗實驗,要求所有實驗儀器及設備均具有良好的機械穩(wěn)定性,以使微電極與細胞膜之間的相對運動盡可能小。防震工作臺放置倒置顯微鏡和與之固定連接的微操縱器,其他設備置于臺外。屏蔽罩由銅絲網(wǎng)制成,接地以防止周圍環(huán)境的雜散電場對膜片鉗放大器的探頭電路的干擾。儀器設備架要靠近工作臺,便于測量儀器與光學儀器配接。倒置顯微鏡是膜片鉗實驗系統(tǒng)的主要光學部件,它不光具有較好的視覺效果,便于將玻璃電極與細胞的頂部接觸,而且是借助移動物鏡來實現(xiàn)聚焦,具有較好的機械穩(wěn)定性。視頻監(jiān)視器主要是用來監(jiān)視實驗過程中的操作,特別是能將封接參數(shù)(如封接阻抗)與細胞的形態(tài)對應,以實現(xiàn)良好的封接。膜片鉗技術是在...
膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規(guī)全細胞模式的胞質滲漏問題,有學者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經(jīng)微電極灌流到含有類甾醇的細胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導電性孔道,借此對全細胞膜電流進行記錄。由于此模式的胞質滲漏極為緩慢,局部串聯(lián)阻抗較常規(guī)全細胞模式高,所以鉗制速度很慢,也稱為緩慢全細胞模式。它適合于小細胞的電壓鉗位,對于直徑大于30μm的細胞很難實現(xiàn)鉗位。不足之處是由于電極與細胞間交換快,細胞內(nèi)環(huán)境很容易破壞,因此記錄所用的電極液應與胞漿主要成分相同,如高k+,低na+和ca2+及一定的緩沖成分和能量代謝所需的物質。...
膜片鉗使用的注意事項:工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質分子對相應離子通透難易程度等特性的一種實驗技術。它的基本原理是以一個光潔,直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細胞的膜接觸,之后對微電極另一端開口處施加適當?shù)呢搲河秒姌O的纖細開口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入,如此在微電極開口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會形成緊密的封接,它的電阻能夠達到數(shù)個或數(shù)十個千兆歐,這世界上就是在化學上完全隔離了吸附在微電極開口處的那一片膜同膜的其余部分,通過微電極記錄到的電流變化光光和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關聯(lián)。膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100M...
膜片鉗實驗系統(tǒng):根據(jù)不同的電生理實驗要求,可以組建不同的實驗系統(tǒng),但有若干共同的基本部件,包括機械部分(防震工作臺、屏蔽罩、儀器設備架)、光學部分(顯微鏡、視頻監(jiān)視器、單色光系統(tǒng))、電子部件(膜片鉗放大器、刺激器、數(shù)據(jù)采集的設備、計算機系統(tǒng))和微操縱器在大多數(shù)膜片鉗實驗,要求所有實驗儀器及設備均具有良好的機械穩(wěn)定性,以使微電極與細胞膜之間的相對運動盡可能小。防震工作臺放置倒置顯微鏡和與之固定連接的微操縱器,其他設備置于臺外。屏蔽罩由銅絲網(wǎng)制成,接地以防止周圍環(huán)境的雜散電場對膜片鉗放大器的探頭電路的干擾。儀器設備架要靠近工作臺,便于測量儀器與光學儀器配接。記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎上進一步...
膜片鉗在通道研究中的重要作用:對離子通道生理與病理情況下作用機制的研究:通過對各種生理或病理情況下細胞膜某種離子通道特性的研究,了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機制。如對鈣離子在腦缺血神經(jīng)細胞損害中作用機制的研究表明,缺血性腦損害過程中,Ca2+ 介導現(xiàn)象起非常重要的作用,缺血缺氧使Ca2+通道開放,過多的Ca2+進入細胞內(nèi)就出現(xiàn)Ca2+超載,導致神經(jīng)元及細胞膜損害,膜轉運功能障礙,嚴重的可使神經(jīng)元壞死。膜片破裂再將玻管慢慢地從細胞表面垂直地提起,斷端游離部分自行融合成脂質雙層。嘉興全自動膜片鉗實驗應用膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規(guī)全細...
膜片鉗技術原理:膜片鉗技術的建立,對生物學科學特別是神經(jīng)科學是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個的離子通道分子活動的技術。些技術的出現(xiàn)自然將細胞水平和分子水平的生理學研究聯(lián)系在一起,同時又將神經(jīng)科學的不同分野必然地融匯在一起,改變了既往各個分野互不聯(lián)系、互不滲透,阻礙人們很全認識能力的弊端。由于電極與細胞膜的高阻封接,在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離,因此,此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進玻璃吸管,用一個極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測量此電流強度,就替代單一離子通道電流。膜片鉗使用操作流程及注意事項:檢查實驗室門窗。蕪湖...
膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規(guī)全細胞模式的胞質滲漏問題,有學者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經(jīng)微電極灌流到含有類甾醇的細胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導電性孔道,借此對全細胞膜電流進行記錄。由于此模式的胞質滲漏極為緩慢,局部串聯(lián)阻抗較常規(guī)全細胞模式高,所以鉗制速度很慢,也稱為緩慢全細胞模式。它適合于小細胞的電壓鉗位,對于直徑大于30μm的細胞很難實現(xiàn)鉗位。不足之處是由于電極與細胞間交換快,細胞內(nèi)環(huán)境很容易破壞,因此記錄所用的電極液應與胞漿主要成分相同,如高k+,低na+和ca2+及一定的緩沖成分和能量代謝所需的物質。...
膜片鉗技術原理:膜片鉗技術的建立,對生物學科學特別是神經(jīng)科學是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個的離子通道分子活動的技術。些技術的出現(xiàn)自然將細胞水平和分子水平的生理學研究聯(lián)系在一起,同時又將神經(jīng)科學的不同分野必然地融匯在一起,改變了既往各個分野互不聯(lián)系、互不滲透,阻礙人們很全認識能力的弊端。由于電極與細胞膜的高阻封接,在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離,因此,此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進玻璃吸管,用一個極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測量此電流強度,就替代單一離子通道電流。膜片鉗使用的注意事項:在放大器打開時不能用手、金屬...
膜片鉗技術:膜片鉗技術是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來,由于電極與細胞膜的高阻封接,在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離,因此,此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進玻璃吸管,用一個極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測量此電流強度,就替代單一離子通道電流。膜片鉗技術的建立,對生物學科學特別是神經(jīng)科學是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個的離子通道分子活動的技術。些技術的出現(xiàn)自然將細胞水平和分子水平的生理學研究聯(lián)系在一起,同時又將神經(jīng)科學的不同分野必然地融匯在一起,改變了既往各個分野互...
膜片鉗技術基本原理與特點:膜片鉗技術本質上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術主要是通過保持細胞跨膜電位不變,并迅速控制其數(shù)值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術不能替代的作用。該技術的主要缺陷是必須在細胞內(nèi)插入兩個電極,對細胞損傷很大,在小細胞如神經(jīng)元,就難以實現(xiàn),又因細胞形態(tài)復雜,很難保持細胞膜各處生物特性的一致。膜片鉗使用操作流程及注意...
膜片鉗芯片技術是繼細胞芯片之后的又一種嶄新的分析細胞電生理參數(shù)的芯片技術.由于該芯片除了具有傳統(tǒng)膜片鉗的高分辨和高準確性特點外,還具有高通量、自動化以及細胞多通道參數(shù)和細胞網(wǎng)絡參數(shù)在線和實時檢測等優(yōu)點.因此,該芯片技術將很大促進細胞離子通道、細胞網(wǎng)絡傳導以及藥物篩選的研究和應用.文中具體介紹了膜片鉗芯片技術的發(fā)展及其應用,結合作者的研究工作,著重介紹了膜片鉗芯片技術在味覺細胞研究的比較新進展。膜片鉗技術是用于紀錄全細胞或個別細胞膜上離子信道電生理特性的研究方法膜片鉗放大器是整個實驗系統(tǒng)中的中心,它可用來作單通道或全細胞記錄。紹興全自動實用膜片鉗服務膜片鉗操作實驗:在大多數(shù)膜片鉗實驗,要求所有實...
膜片鉗技術是通過微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細胞膜,用千兆歐姆以上的阻抗使之封接,在電學上分隔和電極尖開口處相接的細胞膜的小區(qū)域(膜片)以及其周圍,在此基礎上固定點位,對這膜片上的離子通道的離子電流(pA級)進行監(jiān)測記錄的方法。測量回路的中心部分是使用場效應管運算放大器構成的I-V轉換器。當場效應管運算放大器的正負輸入端子是等電位,向正輸入端子施加指令電位時,因為短路負端子以及膜片都可等電位地達到鉗制的作用,字膜片微電極與默片之間形成10GΩ以上封接時,其間達到Z小的分流電流。膜片鉗使用操作流程及注意事項:電腦里面的軟件不得隨意刪改,不得在本機電腦下載別的軟件。無錫細胞生物學膜片鉗成像...
膜片鉗操作實驗:在大多數(shù)膜片鉗實驗,要求所有實驗儀器及設備均具有良好的機械穩(wěn)定性,以使微電極與細胞膜之間的相對運動盡可能小。防震工作臺放置倒置顯微鏡和與之固定連接的微操縱器,其他設備置于臺外。屏蔽罩由銅絲網(wǎng)制成,接地以防止周圍環(huán)境的雜散電場對膜片鉗放大器的探頭電路的干擾。儀器設備架要靠近工作臺,便于測量儀器與光學儀器配接。倒置顯微鏡是膜片鉗實驗系統(tǒng)的主要光學部件,它不光具有較好的視覺效果,便于將玻璃電極與細胞的頂部接觸,而且是借助移動物鏡來實現(xiàn)聚焦,具有較好的機械穩(wěn)定性。視頻監(jiān)視器主要是用來監(jiān)視實驗過程中的操作,特別是能將封接參數(shù)(如封接阻抗)與細胞的形態(tài)對應,以實現(xiàn)良好的封接。膜片鉗使用的注...
一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法:為了測量在不同藥物對細胞中的離子通道的影響,通常需要在膜片鉗實驗中實施灌流。例如,需要檢驗某種是否對某種離子通道的影響,則需要在細胞封接后記錄電流數(shù)據(jù),然后通過在細胞周圍快速給藥再次記錄電流數(shù)據(jù)即可對比數(shù)據(jù)判斷該對離子通道的影響。以往多采用橡皮泥等簡單設備固定灌流管進行實驗,經(jīng)常出現(xiàn)灌流管固定不良影響實驗的情況,也有精密的灌流裝置,但是結構復雜,且成本非常高。膜片鉗技術是在電壓鉗技術基礎上發(fā)展起來的。膜片鉗技術是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來。東莞神經(jīng)生物學實用膜片鉗網(wǎng)站膜片鉗實驗常見問題及解決方法:膜片...
膜片鉗使用的注意事項:1.為了防止塵埃、靜電傷害機器,每天做實驗前請用清水拖地。2.拉制儀使用前需預熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時,請先用砂紙輕微打磨,再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀,如果銀絲電極30min未變黑,則考慮更換次氯酸鈉。4.先開放大器,后開軟件;先關軟件,后關放大器。5.非必須用到汞燈時請不要打開汞燈電源,打開后至少需1個小時才可關閉。6.在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導電的物品接觸電極絲(包括地線),在取放細胞片時請關閉放大器。膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內(nèi)細...
膜片鉗技術——打開細胞電生理之門:定義:膜片鉗技術被稱為研究離子通道的“金標準”,是一種基于電工學和電化學原理的分析手段,可以通過檢測細胞的電信號(電生理性質)來研究化學物質、電、機械力等刺激因素對細胞功能的影響,從而幫助揭示細胞在生命活動中的化學和生物學機制。原理:膜片鉗技術是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來,由于電極與細胞膜的高阻封接,在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離,因此,此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進玻璃吸管,用一個極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測量此電流強度,就替代單一離子通道電流。膜片鉗使用操作流程及注意...
膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規(guī)全細胞模式的胞質滲漏問題,有學者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經(jīng)微電極灌流到含有類甾醇的細胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導電性孔道,借此對全細胞膜電流進行記錄。由于此模式的胞質滲漏極為緩慢,局部串聯(lián)阻抗較常規(guī)全細胞模式高,所以鉗制速度很慢,也稱為緩慢全細胞模式。它適合于小細胞的電壓鉗位,對于直徑大于30μm的細胞很難實現(xiàn)鉗位。不足之處是由于電極與細胞間交換快,細胞內(nèi)環(huán)境很容易破壞,因此記錄所用的電極液應與胞漿主要成分相同,如高k+,低na+和ca2+及一定的緩沖成分和能量代謝所需的物質。...
膜片鉗使用的注意事項:1.向玻璃微電極灌注內(nèi)液時切勿灌太多(1cm左右為適),以防液體進入銀絲底部增加噪聲。2.安裝玻璃微電極時,電極應與銀絲平行,防止刮蹭銀絲電極。3.玻璃微電極需先用甲醇浸泡,再用酒精燈微燒兩端,使其平滑。4.換液時應時刻觀察浴槽,防止液面過低或液體溢出污染鏡頭,Z適液面為微高于出液口。5.浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時清洗,防止長菌影響實驗。6.打雷天氣必須禁止膜片鉗實驗。7.干燥季節(jié)請先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。8.每位實驗者請在E盤建立自己的文件夾儲存數(shù)據(jù)。膜片鉗實驗操作的過程中,總會遇到各種各樣的問題,對實驗人員造成很多困擾。蘇州醫(yī)學膜片鉗技術原理及步驟膜片鉗技術基...
膜片鉗使用操作流程及注意事項:1.實驗結束后必須關閉實驗室的水電,檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學必須履行實驗室相關要求,完成值日等相關工作(值日生按照實驗室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職)。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉制儀提前預熱(至少30min)。且用完及時關閉。電熱加熱線溫度很高,在使用時注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改,不得在本機電腦下載別的軟件,拷數(shù)據(jù)時需用實驗室配置的U盤。5.禁止私拉電線,如有實驗要求可與老師及時溝通。膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,...
膜片鉗電生理記錄技術:膜片鉗技術的基本原理:膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位,測量單個離子通道開放產(chǎn)生的微小電流,這種通道的開放是一種隨機過程。通過觀測單個通道開放的電流幅值分布、開放概率、開放壽命分布等功能參數(shù),并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關系。將該部分細胞采用負壓吸破,可以形成比較常見的全細胞記錄模式,可以研究整個細胞的生理功能和離子通道電生理功能。膜片鉗使用的注意事項:先開放大器,后開軟件;先關軟件,后關放大器。蘇州神經(jīng)生物學膜片鉗實驗服務...
膜片鉗使用的注意事項:1.向玻璃微電極灌注內(nèi)液時切勿灌太多(1cm左右為適),以防液體進入銀絲底部增加噪聲。2.安裝玻璃微電極時,電極應與銀絲平行,防止刮蹭銀絲電極。3.玻璃微電極需先用甲醇浸泡,再用酒精燈微燒兩端,使其平滑。4.換液時應時刻觀察浴槽,防止液面過低或液體溢出污染鏡頭,Z適液面為微高于出液口。5.浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時清洗,防止長菌影響實驗。6.打雷天氣必須禁止膜片鉗實驗。7.干燥季節(jié)請先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。8.每位實驗者請在E盤建立自己的文件夾儲存數(shù)據(jù)。內(nèi)面向外式膜片細胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調控。湖州藥理學腦定位膜片鉗哪家好膜片鉗使用操作流程及注意事項:1.實驗...
膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規(guī)全細胞模式的胞質滲漏問題,有學者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經(jīng)微電極灌流到含有類甾醇的細胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導電性孔道,借此對全細胞膜電流進行記錄。由于此模式的胞質滲漏極為緩慢,局部串聯(lián)阻抗較常規(guī)全細胞模式高,所以鉗制速度很慢,也稱為緩慢全細胞模式。它適合于小細胞的電壓鉗位,對于直徑大于30μm的細胞很難實現(xiàn)鉗位。不足之處是由于電極與細胞間交換快,細胞內(nèi)環(huán)境很容易破壞,因此記錄所用的電極液應與胞漿主要成分相同,如高k+,低na+和ca2+及一定的緩沖成分和能量代謝所需的物質。...
膜片鉗電生理紀錄系統(tǒng)及記錄方法:細胞膜由雙層脂膜組成,具有密封絕緣的特性,因此當紀錄 電極接觸到細胞膜時電阻會開始上升,然后以人工方式對紀錄電極內(nèi)施加一個負壓,可以讓電極與胞膜之間吸附得更為緊密而電阻也會加速上升,當紀錄電極的電阻達到千兆歐姆(Giga Ω)時,意味著細胞膜與電極之間幾乎沒有電流漏出,之后對電極內(nèi)壓力施以一個快速的負壓將細胞膜吸破,這樣紀錄電極與細胞胞體之間會形成一個封閉的電容,此時就可以開始對細胞進行實驗。電壓鉗技術主要是通過保持細胞跨膜電位不變,并迅速控制其數(shù)值。杭州細胞生物學膜片鉗技術研究方案膜片鉗電生理紀錄系統(tǒng)及記錄方法:膜片鉗技術是用于紀錄全細胞或個別細胞膜上離子信道...
膜片鉗使用的注意事項:1.為了防止塵埃、靜電傷害機器,每天做實驗前請用清水拖地。2.拉制儀使用前需預熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時,請先用砂紙輕微打磨,再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀,如果銀絲電極30min未變黑,則考慮更換次氯酸鈉。4.先開放大器,后開軟件;先關軟件,后關放大器。5.非必須用到汞燈時請不要打開汞燈電源,打開后至少需1個小時才可關閉。6.在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導電的物品接觸電極絲(包括地線),在取放細胞片時請關閉放大器。膜片鉗系統(tǒng)有如下應用局限性:迫切需要一種新型的全自動膜片鉗電生理紀錄系統(tǒng)來解決以上問題。紹興藥理學實用膜片鉗服務膜片鉗使用的注意...
膜片鉗技術的基本原理是通過負反饋使得膜電位與指令電壓相等,在電壓鉗制的條件下記錄膜電流。上面是電阻反饋式膜片鉗放大器的電路示意圖。A1為一極高輸入阻抗、極低噪聲的場效應管運算放大器,由于A1極高的開環(huán)增益使得兩個輸入端的電壓幾乎完全相等,使用膜片鉗全細胞記錄技術觀察拮抗劑對煙堿受體激動劑量效曲線的影響,從而實現(xiàn)電壓鉗制。Rf為一數(shù)值可切換的反饋電阻,分別對應于不同的電流記錄范圍,其中高值反饋電阻具有極高的電阻和極低的雜散電容,是決定放大器單通道記錄性能的基本元件。膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:通過滲透很快改變胞漿成分并達到平衡,該手段在全細胞記錄中廣泛應用。金華藥理學膜片鉗全細胞記錄膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處...
膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規(guī)全細胞模式的胞質滲漏問題,有學者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經(jīng)微電極灌流到含有類甾醇的細胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導電性孔道,借此對全細胞膜電流進行記錄。由于此模式的胞質滲漏極為緩慢,局部串聯(lián)阻抗較常規(guī)全細胞模式高,所以鉗制速度很慢,也稱為緩慢全細胞模式。它適合于小細胞的電壓鉗位,對于直徑大于30μm的細胞很難實現(xiàn)鉗位。不足之處是由于電極與細胞間交換快,細胞內(nèi)環(huán)境很容易破壞,因此記錄所用的電極液應與胞漿主要成分相同,如高k+,低na+和ca2+及一定的緩沖成分和能量代謝所需的物質。...
industryTemplate用膜片鉗技術可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程。無錫藥理學實用膜片鉗膜片鉗實驗常見問題及解決方法:膜片鉗技術是電生理記錄的常用手段,目前在科學研究中使用越來越普遍。但在具體膜片鉗實驗操作的過程中,總會遇到各種各樣的問題,對實驗人員造成很多困擾。本次講座主要從實驗角度出發(fā),以簡單,實用的原則,著重講解實驗中遇到的各種問題,以及解決方法。從選擇實驗樣本開始,按照一般實驗進行的順序,逐步延伸,一直到如何搭建自己個性化的膜片鉗系統(tǒng),使大家對膜片鉗的基礎知識以及膜片鉗實驗中遇到的各種典型問題及解決辦法有系統(tǒng)的了解。南京神經(jīng)生物學腦片膜片鉗服務為了測量在不同藥物對...
膜片鉗使用操作流程及注意事項:1.實驗結束后必須關閉實驗室的水電,檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學必須履行實驗室相關要求,完成值日等相關工作(值日生按照實驗室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職)。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉制儀提前預熱(至少30min)。且用完及時關閉。電熱加熱線溫度很高,在使用時注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改,不得在本機電腦下載別的軟件,拷數(shù)據(jù)時需用實驗室配置的U盤。5.禁止私拉電線,如有實驗要求可與老師及時溝通。膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,...
膜片鉗記錄的幾種形式:全細胞記錄構型(whole-cell recording) 高阻封接形成后,繼續(xù)以負壓抽吸使電極管內(nèi)細胞膜破裂,電極胞內(nèi)液直接相通,而與浴槽液絕緣,這種形式稱為“全細胞”記錄。它既可記錄膜電位又可記錄膜電流。其中膜電位可在電流鉗情況下記錄,或將玻管連到標準高阻微電極放大器上記錄。在電壓鉗條件下記錄到的大細胞全細胞電流可達nA級,全細胞鉗的串聯(lián)電阻(玻管和細胞內(nèi)部之間的電阻)應當補償。任何流經(jīng)膜的電流均流經(jīng)這一電阻,所引起的電壓降將使玻管電壓不同于細胞內(nèi)的真正電位。電流愈大,愈需對串聯(lián)電阻進行補償。膜片鉗系統(tǒng)有如下應用局限性:胞體表面不規(guī)整,現(xiàn)有的自動膜片鉗系統(tǒng)難以派上用場...
膜片鉗實驗常見問題及解決方法:膜片鉗實驗難度大、技術要求高,要掌握有關技術和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實驗數(shù)據(jù)中,經(jīng)過處理和分析,得出有意義、有價值的結果和結論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接成功率,具體實驗過程中還需要考慮如何選取記錄模式,為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi)、外液,如何選擇阻斷劑、激動劑,如何進行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復雜的問題,還需在科研實踐中不斷地探索和解決。膜片破裂再將玻管慢慢地從細胞表面垂直地提起,斷端游離部分自行融合成脂質雙層。蕪湖細胞生物學腦片膜片鉗哪家好全細胞膜片鉗模式下有電壓鉗記錄和電流鉗記錄...