細(xì)胞離心下來(lái)的離心速率應(yīng)為多少? 細(xì)胞傳代或凍存時(shí)欲回收細(xì)胞,其離心速度一般為800-1000 rpm/min,室溫離心5-8分鐘,轉(zhuǎn)速過高,將造成細(xì)胞破裂死亡。 如何用臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞? 用無(wú)血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200~2000 ...
如何控制胰酶消化時(shí)間? 胰酶消化的程度是細(xì)胞培養(yǎng)中的一個(gè)關(guān)鍵步驟:消化過度細(xì)胞碎片增多,黑渣子增多,細(xì)胞會(huì)成片脫落,嚴(yán)重影響細(xì)胞活性,并有部分細(xì)胞漂浮,隨棄去的胰酶流失;消化不足則細(xì)胞難于從瓶壁上吹下,反復(fù)吹打同樣也會(huì)損傷細(xì)胞活性。不同細(xì)胞對(duì)消化液的...
細(xì)胞抱團(tuán)怎么處理? 一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)是正常現(xiàn)象,大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下,很可能會(huì)出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象,聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物,殃及周圍的懸浮細(xì)胞,因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán),可以通過細(xì)胞篩...
培養(yǎng)的細(xì)胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長(zhǎng)良好,所以要精細(xì)細(xì)胞計(jì)數(shù),在細(xì)胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞,總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比叫做細(xì)胞活力,用臺(tái)盼蘭染細(xì)胞,死細(xì)胞著色,活細(xì)胞不著色,從而可以區(qū)分死細(xì)胞與活細(xì)胞。所以在細(xì)胞生物學(xué)研究過程中,細(xì)...
實(shí)驗(yàn)中操作和分析軟件的合規(guī)性 合規(guī)性還是針對(duì)于質(zhì)控(QC)部門、GMP實(shí)驗(yàn)室和生產(chǎn)車間。因?yàn)樯a(chǎn)的藥物,各個(gè)國(guó)家對(duì)藥物生產(chǎn)都有嚴(yán)格的法規(guī)要求,包括GMP和FDA等,要求所測(cè)試的數(shù)據(jù)是可追蹤的,使用儀器的分析軟件有多級(jí)用戶權(quán)限管理和審計(jì)追蹤、電子簽名功...
黑點(diǎn)已經(jīng)產(chǎn)生了,如何進(jìn)行處理? 如果判定黑點(diǎn)是污染,請(qǐng)及時(shí)將細(xì)胞處理后丟棄。其他情況,可參照以下進(jìn)行:如果是懸浮細(xì)胞:收集細(xì)胞上清慢速離心(500-600 rpm/min,5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細(xì)胞:將細(xì)胞用PBS洗2-3遍,洗...
原代細(xì)胞培養(yǎng)后細(xì)胞會(huì)因生存空間不足或密度過大,營(yíng)養(yǎng)障礙,影響細(xì)胞生長(zhǎng)。細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細(xì)胞使得培養(yǎng)的細(xì)胞擴(kuò)增(形成細(xì)胞株),可以進(jìn)行細(xì)胞克隆,易于保存,但可能喪失一些特殊的細(xì)胞和分化特征。傳代細(xì)胞形成...
TANK CA008自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是臺(tái)式的自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,軟件采用直觀,友好的界面設(shè)計(jì),無(wú)需復(fù)雜的操作培訓(xùn),實(shí)驗(yàn)室人員就能很輕松的享受便捷的細(xì)胞計(jì)數(shù)分析試驗(yàn). 自動(dòng)化 TANKCA008自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是臺(tái)式的自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,軟件采用直觀,友...
購(gòu)買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳 研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。運(yùn)輸過程對(duì)細(xì)胞有嚴(yán)重影響。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)...
細(xì)胞活力鑒定——臺(tái)盼藍(lán)染色法 臺(tái)盼藍(lán)(Trypan Blue),也稱二胺藍(lán)(Diamine Blue)和加拉藍(lán)(Niagra Blue),是一種用于選擇性著色死細(xì)胞和即將死亡的細(xì)胞的重要染料。這種染料不能進(jìn)入細(xì)胞膜完整的細(xì)胞,而能在細(xì)胞膜受損的死細(xì)胞...
TANK-CA0008適用于直徑在5-40μm的細(xì)胞或微粒的計(jì)數(shù),如絕大部分細(xì)胞系、干細(xì)胞、原代細(xì)胞等。 通過參數(shù)設(shè)置中的圈門選項(xiàng),可以對(duì)細(xì)胞的圓度、亮度、直徑進(jìn)行圈選劃分,從而排除非目標(biāo)細(xì)胞干擾。 算法可有效識(shí)別聚團(tuán)細(xì)胞,提高計(jì)數(shù)準(zhǔn)確度。 ...
實(shí)驗(yàn)中操作和分析軟件的合規(guī)性 合規(guī)性還是針對(duì)于質(zhì)控(QC)部門、GMP實(shí)驗(yàn)室和生產(chǎn)車間。因?yàn)樯a(chǎn)的藥物,各個(gè)國(guó)家對(duì)藥物生產(chǎn)都有嚴(yán)格的法規(guī)要求,包括GMP和FDA等,要求所測(cè)試的數(shù)據(jù)是可追蹤的,使用儀器的分析軟件有多級(jí)用戶權(quán)限管理和審計(jì)追蹤、電子簽名功...
懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何傳代處理? 一般*需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細(xì)胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時(shí),將細(xì)胞懸液移入離心管中,1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清,細(xì)胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:4-1:8)...
原代培養(yǎng)及其操作步驟 從供體內(nèi)取出組織后,經(jīng)機(jī)械以及消化分離成單個(gè)細(xì)胞或單一型細(xì)胞群,使之在體外模擬人體生理環(huán)境,在無(wú)菌、適當(dāng)溫度和一定的營(yíng)養(yǎng)條件下,生存、生長(zhǎng)和繁殖。原代培養(yǎng)細(xì)胞常有不同的細(xì)胞成分,生長(zhǎng)緩慢,但是更能說明所來(lái)源的組織細(xì)胞類型和表達(dá)組...
培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點(diǎn),是污染嗎? 首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁,如果變渾濁,基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁:在顯微鏡下觀察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則,是否運(yùn)動(dòng),是做布朗運(yùn)動(dòng)還是呈直線型快速移動(dòng)。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則,做布朗運(yùn)動(dòng),黑點(diǎn)可能是...
細(xì)胞接種密度多少合適? 依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)的一個(gè)重要原因。按照我們的經(jīng)驗(yàn):一般倍增時(shí)間24 h內(nèi)的細(xì)胞,傳代比率1:6-1:12為宜,倍增時(shí)間24-48 h的細(xì)胞,傳代比...
細(xì)胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總 一般拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么? 收到細(xì)胞先不開蓋,用酒精將整個(gè)細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察...
二價(jià)離子抑制胰蛋白酶活性嗎? 二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性。 使用胰蛋白酶加入EDTA是為什么? EDTA用來(lái)螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前,用EDTA清洗細(xì)胞,以消除來(lái)自培養(yǎng)基中所有的二價(jià)離...
全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析 我們國(guó)家近十幾年在生物制藥行業(yè)的蓬勃發(fā)展,對(duì)于以上這種計(jì)數(shù)和活率分析方法,已無(wú)法滿足生物制藥研發(fā)和生產(chǎn)發(fā)展的需要,因此正在逐漸被自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀所替代。 自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀首先解決的是對(duì)細(xì)胞做死活標(biāo)記...
原代細(xì)胞培養(yǎng)后細(xì)胞會(huì)因生存空間不足或密度過大,營(yíng)養(yǎng)障礙,影響細(xì)胞生長(zhǎng)。細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細(xì)胞使得培養(yǎng)的細(xì)胞擴(kuò)增(形成細(xì)胞株),可以進(jìn)行細(xì)胞克隆,易于保存,但可能喪失一些特殊的細(xì)胞和分化特征。傳代細(xì)胞形成...
購(gòu)買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳 研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。運(yùn)輸過程對(duì)細(xì)胞有嚴(yán)重影響。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)...
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室之凈化工作臺(tái) 凈化工作臺(tái):操作簡(jiǎn)單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。一般細(xì)菌培養(yǎng)室使用的凈化工作臺(tái)主要有兩種:a)側(cè)流式或稱垂直式b)外流式或稱水平層流式。 凈化工作臺(tái)工作原理(大致相同)——通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過濾器初濾,由...
單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)的第一步是單細(xì)胞懸液的制備,而懸液制備中細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性直接影響單細(xì)胞測(cè)序的數(shù)據(jù)質(zhì)量,但是關(guān)于細(xì)胞計(jì)數(shù)您真的了解嗎? 目前細(xì)胞計(jì)數(shù)主要使用臺(tái)盼藍(lán)染色法和雙熒光AO/PI染色法。 1)臺(tái)盼藍(lán)染色原理:臺(tái)盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的...
臺(tái)盼藍(lán)染液是細(xì)胞活性染料,常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性。細(xì)胞損傷或死亡時(shí),臺(tái)盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜,與解體的DNA結(jié)合,使其著色。而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。故可以檢測(cè)細(xì)胞是否存活。 臺(tái)盼藍(lán)染色法的原理正常的活細(xì)胞,胞膜結(jié)構(gòu)完整,能夠排斥臺(tái)盼藍(lán),使之不...
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室之無(wú)菌操作區(qū) 無(wú)菌操作室:無(wú)菌操作區(qū)只限于細(xì)胞培養(yǎng)及其他無(wú)菌操作的區(qū)域,比較好能與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。理想的無(wú)菌操作室應(yīng)劃為三部分: a)更衣室—供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。 b)緩沖間—位于更衣間與操作間...
貼壁細(xì)胞傳代如何使用胰酶? 一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液濃度過高時(shí),易造成培養(yǎng)基中細(xì)胞碎片增多,黑渣子增多,常規(guī)...
實(shí)驗(yàn)中操作和分析軟件的合規(guī)性 合規(guī)性還是針對(duì)于質(zhì)控(QC)部門、GMP實(shí)驗(yàn)室和生產(chǎn)車間。因?yàn)樯a(chǎn)的藥物,各個(gè)國(guó)家對(duì)藥物生產(chǎn)都有嚴(yán)格的法規(guī)要求,包括GMP和FDA等,要求所測(cè)試的數(shù)據(jù)是可追蹤的,使用儀器的分析軟件有多級(jí)用戶權(quán)限管理和審計(jì)追蹤、電子簽名功...
細(xì)胞計(jì)數(shù)有多重要?這個(gè)答案想必不用回答,大家都心里有數(shù)。畢竟我們都曾經(jīng)歷過,花了一整天的時(shí)間制備細(xì)胞、染色、分選,進(jìn)行一個(gè)精密計(jì)劃的實(shí)驗(yàn),結(jié)果卻因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)細(xì)胞量卻不夠而被迫結(jié)束。如今圈子里常用的細(xì)胞計(jì)數(shù)方法是顯微鏡+血球計(jì)數(shù)板,然而隔壁實(shí)驗(yàn)室的小明都在用自動(dòng)的細(xì)...
單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)的第一步是單細(xì)胞懸液的制備,而懸液制備中細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性直接影響單細(xì)胞測(cè)序的數(shù)據(jù)質(zhì)量,但是關(guān)于細(xì)胞計(jì)數(shù)您真的了解嗎? 目前細(xì)胞計(jì)數(shù)主要使用臺(tái)盼藍(lán)染色法和雙熒光AO/PI染色法。 1)臺(tái)盼藍(lán)染色原理:臺(tái)盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的...
自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀就可以替代傳統(tǒng)的手動(dòng)計(jì)數(shù)法,滿足藥物研發(fā)和生產(chǎn)質(zhì)控的需求。但對(duì)于這些自動(dòng)化的細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀,目前門類也很繁多,如何從中找到適合自己所需的那款呢, 準(zhǔn)確性無(wú)疑是重要的,我們購(gòu)買的任何分析儀器,如果不能保證準(zhǔn)確性,那就無(wú)法...