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主要有兩方面的原因：一方面，高拷貝數(shù)時(shí)外源基因的表達(dá)量不再由質(zhì)粒的拷貝數(shù)決定，可能是由轉(zhuǎn)錄和翻譯水平?jīng)Q定的；另一方面，高拷貝數(shù)的質(zhì)粒往往很不穩(wěn)定。由于質(zhì)?？截悢?shù)的變化直接與基因目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)率有關(guān)，因此對(duì)于重組蛋白的生產(chǎn)來說，質(zhì)粒的拷貝數(shù)是一個(gè)非常重要的參數(shù)。同...

CAR或TCR修飾的免疫細(xì)胞對(duì)于嵌合抗原受體（Chimericantigenreceptor，CAR）或T細(xì)胞受體（Tcellreceptor，TCR）修飾的免疫細(xì)胞，應(yīng)盡可能采用多種方法評(píng)估其靶點(diǎn)相關(guān)毒性和脫靶毒性風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于靶點(diǎn)相關(guān)毒性，應(yīng)采用體外方法深入分...

致瘤性的風(fēng)險(xiǎn):考慮產(chǎn)品特征，所使用整合性載體(如逆與產(chǎn)品的儲(chǔ)存、運(yùn)輸和分配有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)（如保存、冷凍和解凍過程）、冷鏈或其他類型受控溫度條件被突破的風(fēng)險(xiǎn)、與產(chǎn)品穩(wěn)定性有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)，這可能會(huì)影響CAR-T細(xì)胞的生物學(xué)活性進(jìn)而導(dǎo)致治療失敗。與產(chǎn)品活性相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)與產(chǎn)品活...

在基因工程中，質(zhì)粒的拷貝數(shù)應(yīng)該怎么理解?為什么構(gòu)建載體時(shí)要選擇高拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體?把細(xì)胞當(dāng)做工廠，質(zhì)粒就是廠房里的流水線，拷貝數(shù)就流水線的數(shù)量在理想狀態(tài)下，選擇盡量多的流水線，這樣能得到的產(chǎn)品多，這是很自然的選擇實(shí)際上，高拷貝也有它的問題，當(dāng)流水線多到一定程度...

免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)水平與多種因素有關(guān)，如細(xì)胞來源和類型、體內(nèi)活性和存活時(shí)間、是否有外源基因表達(dá)、基因表達(dá)使用的載體類型以及是否存在基因組整合等。針對(duì)不同風(fēng)險(xiǎn)水平的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，隨訪持續(xù)時(shí)間的建議如下：?對(duì)于沒有外源基因表達(dá)、且體外操...

長(zhǎng)期隨訪觀察的考慮要素:遲發(fā)性不良反應(yīng)相關(guān)的潛在風(fēng)險(xiǎn)因素.在評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)因素時(shí)，申請(qǐng)人應(yīng)考慮基因zhiliao產(chǎn)品的特性，同時(shí)參考該產(chǎn)品的非臨床和臨床數(shù)據(jù)以及類似產(chǎn)品的已知數(shù)據(jù)?；騴hiliao產(chǎn)品的非臨床研究旨在為臨床研究提供支持性信息...

近幾年，細(xì)胞和基因zhiliao（cell & gene therapy，CGT）領(lǐng)域發(fā)展迅猛，在多個(gè)方向取得了重大突破，以anti-CD19和BCMA為代的多種CAR-T免疫細(xì)胞療法攻克了一部分血液瘤，多種AAV療法也給一些難以成藥的罕見病提供了有效的zhi...

長(zhǎng)期表達(dá)。與其他產(chǎn)品相比，部分基因zhiliao產(chǎn)品的明顯特征是可以在患者靶細(xì)胞或基因修飾細(xì)胞中持續(xù)存在并編碼表達(dá)作用因子（功能性蛋白或基因表達(dá)調(diào)節(jié)元件），并通過長(zhǎng)久或長(zhǎng)期改變靶細(xì)胞或組織的功能來達(dá)到zhiliao效果。同時(shí)，由于基因zhiliao編碼的作用因...

如果iPS細(xì)胞設(shè)計(jì)了機(jī)制以降低致瘤風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)在體內(nèi)試驗(yàn)中確認(rèn)/驗(yàn)證此類機(jī)制的功能重編程可能會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)改變，其后果尚不完全清楚。為評(píng)估iPS細(xì)胞衍生細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)改變所引起的潛在異常特征，應(yīng)采用體外和/或體內(nèi)非臨床研究來闡明細(xì)胞具有適當(dāng)?shù)男袨楹蜕砉?..

基因zhiliao產(chǎn)品特有的可能會(huì)引起遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)因素包括：基因組整合活性基因zhiliao產(chǎn)品可能會(huì)采用修飾宿主基因組的技術(shù)，并有可能在宿主細(xì)胞或組織中持續(xù)存在。很多基因zhiliao載體的基因整合不會(huì)指向基因組的特定位點(diǎn)，可能在整合位點(diǎn)處產(chǎn)生插入突...

CIRCLE-Seq，將gDNA打斷并環(huán)化，環(huán)化的DNA與CRISPR/RNP孵育，NGS測(cè)序檢測(cè)線性化的DNapian段，確定脫靶位點(diǎn)。PCR富集后測(cè)序，成本相對(duì)較低，能檢測(cè)低頻脫靶突變。安必奇sgRNA脫靶效應(yīng)評(píng)估，安必奇生物提供sgRNA脫靶效應(yīng)評(píng)估服務(wù)...

為促進(jìn)及早發(fā)現(xiàn)此類風(fēng)險(xiǎn)并提供有效地風(fēng)險(xiǎn)控制措施，本指導(dǎo)原則在借鑒ICHE2E藥物警戒計(jì)劃、《藥物警戒質(zhì)量管理規(guī)范》和國內(nèi)外風(fēng)險(xiǎn)管理計(jì)劃相關(guān)指導(dǎo)原則的基礎(chǔ)上，列舉了CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)，以及常規(guī)和本類產(chǎn)品特異的額外藥物警戒活動(dòng)和風(fēng)...

gRNA的長(zhǎng)度和錯(cuò)配： 17個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的gRNA顯示出更高的基因組編輯效率。相比之下，18-20 bp的長(zhǎng)度顯示出較低的基因組編輯效率。在人類細(xì)胞中減少潛在脫靶效應(yīng)的指導(dǎo)方針：1) 應(yīng)避免在PAM的7-10 bp范圍內(nèi)靶序列有超過3個(gè)錯(cuò)配；2) 在PAM的1...

為促進(jìn)及早發(fā)現(xiàn)此類風(fēng)險(xiǎn)并提供有效地風(fēng)險(xiǎn)控制措施，本指導(dǎo)原則在借鑒ICHE2E藥物警戒計(jì)劃、《藥物警戒質(zhì)量管理規(guī)范》和國內(nèi)外風(fēng)險(xiǎn)管理計(jì)劃相關(guān)指導(dǎo)原則的基礎(chǔ)上，列舉了CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)，以及常規(guī)和本類產(chǎn)品特異的額外藥物警戒活動(dòng)和風(fēng)...

CRISPR/Cas9的問題：和TALEN和ZFNS技術(shù)一樣，CRISPR/Cas9技術(shù)在應(yīng)用時(shí)也存在一定概率的脫靶問題——Cas9核酸酶在非目標(biāo)位點(diǎn)發(fā)生切割，引入非預(yù)期的基因突變。脫靶切割引入的突變可能會(huì)直接破壞細(xì)胞的基本功能，帶來不可預(yù)控的嚴(yán)重后果。如何減...

如果iPS細(xì)胞設(shè)計(jì)了機(jī)制以降低致瘤風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)在體內(nèi)試驗(yàn)中確認(rèn)/驗(yàn)證此類機(jī)制的功能重編程可能會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)改變，其后果尚不完全清楚。為評(píng)估iPS細(xì)胞衍生細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)改變所引起的潛在異常特征，應(yīng)采用體外和/或體內(nèi)非臨床研究來闡明細(xì)胞具有適當(dāng)?shù)男袨楹蜕砉?..

通常不需要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的遺傳毒性組合試驗(yàn)，但應(yīng)根據(jù)基因zhiliao產(chǎn)品的特點(diǎn)、產(chǎn)品的具體適應(yīng)癥、載體的已有信息、導(dǎo)入基因序列結(jié)構(gòu)等，評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品整合進(jìn)基因組的可能性，判斷是否需要開展另外的遺傳毒性研究，如研究基因組修飾的發(fā)生情況，并檢測(cè)隨后可能發(fā)生...

檢測(cè)方法的敏感度、特異性和可重復(fù)性應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證，并設(shè)計(jì)適當(dāng)?shù)年栃院完幮詫?duì)照；當(dāng)體內(nèi)靶細(xì)胞或替代細(xì)胞中載體序列陽性的比例超出預(yù)期范圍時(shí)，應(yīng)開展克隆性生長(zhǎng)的評(píng)估。如果存在優(yōu)勢(shì)克隆或單克隆生長(zhǎng)，應(yīng)在不超過3個(gè)月的時(shí)間內(nèi)再次檢測(cè)確認(rèn)，并盡快開展整合位點(diǎn)的分析。當(dāng)載體的整...

基因重排或重組。當(dāng)基因zhiliao產(chǎn)品所用載體及其攜帶的基因發(fā)生復(fù)制時(shí)，可能出現(xiàn)非zhiliao目的非預(yù)期的基因表達(dá)或改變，或者與相應(yīng)野生型或輔助病毒互補(bǔ)后產(chǎn)生回復(fù)突變或意外復(fù)制或形成6新的病毒。免疫原性。由于基因zhiliao產(chǎn)品在體內(nèi)的持續(xù)暴露或者需要多...

CIRCLE-Seq，將gDNA打斷并環(huán)化，環(huán)化的DNA與CRISPR/RNP孵育，NGS測(cè)序檢測(cè)線性化的DNapian段，確定脫靶位點(diǎn)。PCR富集后測(cè)序，成本相對(duì)較低，能檢測(cè)低頻脫靶突變。安必奇sgRNA脫靶效應(yīng)評(píng)估，安必奇生物提供sgRNA脫靶效應(yīng)評(píng)估服務(wù)...

相較于LM-PCR方法，重組細(xì)胞全基因組重測(cè)序需要較大數(shù)據(jù)量，比較適合用于經(jīng)過表型篩選的單克隆細(xì)胞的測(cè)序，比如用于抗體藥物生產(chǎn)重組CHO細(xì)胞的位點(diǎn)檢測(cè)，但全基因組測(cè)序可對(duì)宿主基因組自身的變異進(jìn)行檢測(cè)。應(yīng)用場(chǎng)景：CAR-T細(xì)胞安全性檢測(cè)（藥物申報(bào)）；基因zhil...

Southern blot 是一種常用的 DNA 定量的分子生物學(xué)方法。其原理是將待測(cè)的 DNA 樣品固定在固相載體（硝酸纖維膜或尼龍膜）上，與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，在與探針有同源序列的固相 DNA 的位置上顯示出雜交信號(hào)，通過檢測(cè)信號(hào)的有無、強(qiáng)弱可以對(duì)樣品...

拷貝數(shù)，是指某基因（可以是質(zhì)粒）在某一生物的基因組中的個(gè)數(shù)。單拷貝就是該基因在該生物基因組中只有一個(gè)，多拷貝則指有多個(gè)。在細(xì)菌細(xì)胞中，根據(jù)復(fù)制特性，質(zhì)粒分嚴(yán)緊型和松弛型兩類，前者在細(xì)胞中只含1?2個(gè)，而后者含10?15個(gè)以上。恒定的拷貝數(shù)與質(zhì)粒復(fù)制控制系統(tǒng)、宿...

通常不需要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的遺傳毒性組合試驗(yàn)，但應(yīng)根據(jù)基因zhiliao產(chǎn)品的特點(diǎn)、產(chǎn)品的具體適應(yīng)癥、載體的已有信息、導(dǎo)入基因序列結(jié)構(gòu)等，評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品整合進(jìn)基因組的可能性，判斷是否需要開展另外的遺傳毒性研究，如研究基因組修飾的發(fā)生情況，并檢測(cè)隨后可能發(fā)生...

但是由于CHIP-seq實(shí)驗(yàn)本身的難度較高，DISCOVER-seq這類方法的接受度并不高。3. 其他特殊方法CRISPR技術(shù)經(jīng)過這么多年的發(fā)展，其應(yīng)用已經(jīng)不局限于造成DNA雙鏈斷裂，一些不要切割DNA雙鏈的CRISPR衍生技術(shù)（如堿基編輯、先導(dǎo)編輯和CRIS...

慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一類，慢病毒整合到宿主細(xì)胞的染色體上可以長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)，并且與其他逆轉(zhuǎn)錄病毒（例如腺病毒）相比，慢病毒不但能ganran分裂期細(xì)胞，而且還能ganran非分裂期的細(xì)胞?；谝陨蟽?yōu)點(diǎn)，慢病毒載體（lentiviral vector）作為外源基因...

通常不需要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的遺傳毒性組合試驗(yàn)，但應(yīng)根據(jù)基因zhiliao產(chǎn)品的特點(diǎn)、產(chǎn)品的具體適應(yīng)癥、載體的已有信息、導(dǎo)入基因序列結(jié)構(gòu)等，評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品整合進(jìn)基因組的可能性，判斷是否需要開展另外的遺傳毒性研究，如研究基因組修飾的發(fā)生情況，并檢測(cè)隨后可能發(fā)生...

使用CRISPR/Cas9、ZFNs和TALENs等設(shè)計(jì)核酸酶進(jìn)行基因組編輯，可以將遺傳物質(zhì)定向?qū)氩溉閯?dòng)物基因組的特定位點(diǎn)。然而，可能會(huì)出現(xiàn)非預(yù)期的靶上和靶外基因組修飾，這可能導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，并破壞正?；虻墓δ埽瑥亩赡軐?dǎo)致臨床前和臨床研究中的安全問題。...

DDW2020年，全球細(xì)胞和基因zhiliao（CGT）市場(chǎng)達(dá)到約40億美元，預(yù)計(jì)到2030年將增長(zhǎng)到約340億美元。隨著較近幾項(xiàng)CGT的批準(zhǔn)、不斷擴(kuò)充的渠道以及CGT公司的大量資金，這些療法的商業(yè)化步伐正在繼續(xù)加快。據(jù)估計(jì)，到2025年，F(xiàn)DA將每年批準(zhǔn)10...

CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)根據(jù)產(chǎn)品從生產(chǎn)、運(yùn)輸、處理、給藥、隨訪等流程的時(shí)間順序，將關(guān)于CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)列舉如下。所列舉的風(fēng)險(xiǎn)并非全部，在撰寫CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理計(jì)劃時(shí)，應(yīng)結(jié)合產(chǎn)...