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全基因組測(cè)序是對(duì)重組細(xì)胞的基因組DNA進(jìn)行深度測(cè)序，技術(shù)成熟簡單這里不做介紹了，我們分享一下LM-PCR結(jié)合二代測(cè)序的檢測(cè)方法。LM-PCR全稱連接介導(dǎo)的PCR。將含有慢病毒插入的基因組進(jìn)行隨機(jī)打斷并連接接頭，然后通過兩輪PCR富集含有慢病毒LTR-宿主區(qū)域的嵌合序列。此擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行二代測(cè)序即可以分析確定載體在宿主基因組上的整合位點(diǎn)。LM-PCR與高通量測(cè)序技術(shù)相結(jié)合后，有了更為豐富的應(yīng)用場(chǎng)景。比如，識(shí)別整合載體（慢病毒載體，轉(zhuǎn)座子）的整合位點(diǎn)。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于基因zhiliao研究基因修飾細(xì)胞的克隆組成，或者通過研究整合事件評(píng)估新載體系統(tǒng)的生物安全性。插入位點(diǎn)整合位點(diǎn)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力...

2018年CTL019的一項(xiàng)臨床試驗(yàn)中，一名B-ALL病人在接受CAR-CD19zhiliao28天后即達(dá)到CR，卻在6個(gè)月后復(fù)發(fā)，PCR檢測(cè)沒有發(fā)現(xiàn)任何的RCL，結(jié)合持續(xù)性慢病毒插入位點(diǎn)的克隆豐度分析，研究者較終發(fā)現(xiàn)一個(gè)攜帶CAR插入位點(diǎn)的CAR-B細(xì)胞克隆。進(jìn)而發(fā)現(xiàn)這個(gè)B細(xì)胞是CAR-T生產(chǎn)過程中的一個(gè)CAR-B副產(chǎn)物，而CAR在該B細(xì)胞上的順式插入表達(dá)導(dǎo)致CAR靶標(biāo)表位屏蔽，導(dǎo)致該B細(xì)胞克隆的耐藥。這個(gè)案例也提示除去CAR-Tzhiliao方法本身的潛在風(fēng)險(xiǎn)外，CAR-T在生產(chǎn)工藝也會(huì)產(chǎn)生二次成瘤的風(fēng)險(xiǎn)。從細(xì)胞游離DNA中檢測(cè)載體整合位點(diǎn)。嘉興慢病毒載體整合位點(diǎn)從基礎(chǔ)設(shè)施的角度來看，必須...

?如果受試者體內(nèi)出現(xiàn)載體陽性細(xì)胞的克隆性生長，或檢測(cè)發(fā)現(xiàn)基因整合位點(diǎn)在基因或相關(guān)基因附近，應(yīng)縮短檢測(cè)間隔至不超過3個(gè)月并密切監(jiān)測(cè)惡性liu征兆，直至檢測(cè)不到基因zhiliao載體。?對(duì)基于慢病毒/逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的基因zhiliao產(chǎn)品，如出現(xiàn)與可復(fù)制xingbing毒可能相關(guān)的不良事件，還應(yīng)開展可復(fù)制xingbing毒（replicablecompetentlentivirus/retrovirus，RCL/RCR）的檢測(cè)。關(guān)于基因編輯產(chǎn)品的特殊考慮基因編輯產(chǎn)品除了適用基因zhiliao產(chǎn)品的一般考慮以及整合性載體的特殊考慮外，長期隨訪中還應(yīng)額外關(guān)注脫靶風(fēng)險(xiǎn)，量化評(píng)估脫靶活性和在靶活性之間的相...

病人在6個(gè)月后達(dá)到MRD陰性，CAR-T細(xì)胞在4.2年后仍然可以在外周血檢測(cè)到，并且骨髓中檢測(cè)不到B細(xì)胞liu克隆。二代測(cè)序整合位點(diǎn)分析顯示這是因?yàn)槟承〤AR-T細(xì)胞的融合位置位于TET2基因9號(hào)到10號(hào)外顯子之間可變剪切區(qū)域，導(dǎo)致TET2基因跳讀和功能障礙，從而產(chǎn)生短壽命記憶細(xì)胞擴(kuò)增和長壽命記憶細(xì)胞。使得藥物可以持久作用于病人。研究者繼而進(jìn)行插入位點(diǎn)和CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增及持續(xù)作用時(shí)間的相關(guān)研究，利用慢病毒插入位點(diǎn)信息（INSPIIRED）和LASSO logistic 回歸模型進(jìn)行插入位置和藥效學(xué)分析，初步建立預(yù)測(cè)模型。研究者還建議在CAR-T產(chǎn)品回輸前進(jìn)行類似的多變量預(yù)測(cè)可以對(duì)產(chǎn)品的安全性...

不同基因zhiliao產(chǎn)品的特殊考慮1.關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產(chǎn)品，例如轉(zhuǎn)座子元件、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒及其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉(zhuǎn)座子的載體在體外修飾的細(xì)胞，長期隨訪中需格外關(guān)注基因zhiliao產(chǎn)品的基因組整合風(fēng)險(xiǎn)，建議申辦方分析基因zhiliao載體在靶細(xì)胞或相關(guān)替代細(xì)胞的基因組中整合的影響（例如是否存在克隆性生長、是否存在優(yōu)勢(shì)克隆、克隆性生長是否導(dǎo)致惡性liu等）。如果基因組整合相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)的分析可行。AAV整合位點(diǎn)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。南通慢病毒整合位點(diǎn)CRO基因編輯產(chǎn)品建議觀察15年...

確證性臨床試驗(yàn)。與其它藥物一樣，免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品的確證性研究（或關(guān)鍵研究）的目的是確認(rèn)探索性研究中初步提示的療效和安全性，為注冊(cè)提供關(guān)鍵的獲益/風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估證據(jù)。確證性研究的目標(biāo)人群、主要和次要終點(diǎn)的選擇、研究持續(xù)時(shí)間、樣本量估計(jì)和統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)等應(yīng)符合具體zhiliao領(lǐng)域的一般指南要求。對(duì)照和設(shè)盲，良好的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)（randomizedcontrolledtrial,RCT）是確證性研究中優(yōu)先推薦的設(shè)計(jì)方法，該研究方法可以消除受試者的基線差異、減少偏倚，有利于客觀評(píng)價(jià)試驗(yàn)產(chǎn)品的zhiliao效果。對(duì)于某些適應(yīng)癥，可能缺少合適的對(duì)照藥物，或倫理上不宜采用安慰劑作為對(duì)照藥，可考慮與比較好支...

基因zhiliao的前景是巨大的。有超過 7,000 種遺傳病有可能通過基因療法zhiyu。制藥和生物技術(shù)公司清楚地認(rèn)識(shí)到 CGT 的潛力，全球TOP 20（按收入計(jì)）的生物制藥公司中有 16 家將 CGT 業(yè)務(wù)添加到其產(chǎn)品組合中。然而，雖然期望、興趣和投資熱情一直很高，但制造和分析基因zhiliao產(chǎn)品的技術(shù)仍在不斷發(fā)展。這就是為什么像細(xì)胞和基因zhiliao這樣的醫(yī)學(xué)zhiliaogeming需要強(qiáng)大的合作伙伴和技術(shù)，以便在這些療法走向批準(zhǔn)時(shí)帶來嚴(yán)謹(jǐn)性和可重復(fù)性。實(shí)施可擴(kuò)展的標(biāo)準(zhǔn)化操作程序，并支持臨床試驗(yàn)和CGT制造的冷鏈物流，對(duì)成功至關(guān)重要。整合位點(diǎn)相比γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒更安全但成本更高。無...

應(yīng)用場(chǎng)景：單克隆抗體藥物輔助篩選；致xingbing毒整合位點(diǎn)檢測(cè)與整合偏好性分析等；WGS不適用于轉(zhuǎn)染之后未經(jīng)過傳代培養(yǎng)和表型篩選的細(xì)胞系。豐富的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)?zāi)壳?，唯可已與國內(nèi)外多家免疫zhiliao研究前沿企業(yè)開展合作，采用該方法對(duì)高度異質(zhì)性的CAR-T細(xì)胞進(jìn)行整合位點(diǎn)檢測(cè)與細(xì)胞安全性評(píng)估，具有較為豐富的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)。一般HBV插入到基因組中形成下圖結(jié)構(gòu)。使用三代測(cè)序，靶向插入?yún)^(qū)域的測(cè)序reads可分為Readsgroup1（HBV插入?yún)^(qū)域測(cè)通）和Readsgroup2（reads部分比對(duì)染色體，部分比對(duì)HBV插入?yún)^(qū)域）?；谌鷶?shù)據(jù)比對(duì)后bam文件的IGV圖，判斷變異類型，推斷斷點(diǎn)類型和插入序列...

2020年9月發(fā)布的《細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品申請(qǐng)臨床試驗(yàn)藥學(xué)研究和申報(bào)資料的考慮要點(diǎn)》“生產(chǎn)工藝開發(fā)的技術(shù)要求”及“質(zhì)量研究和質(zhì)量控制中的安全性研究”部分要求提供目的基因在染色體中的整合情況及提供細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化（成瘤性和致瘤性）進(jìn)行安全性研究和評(píng)估內(nèi)容。2020年2月發(fā)布的《免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中規(guī)定：探索性臨床試驗(yàn)的安全性和耐受性要考慮"外源基因隨機(jī)整合到細(xì)胞基因組形成插入突變，導(dǎo)致成瘤性和惡性轉(zhuǎn)化等"。整合位點(diǎn)分析,基因和細(xì)胞的安全指南。深圳病毒載體整合位點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室迎細(xì)胞基因zhiliao浪潮，整合位點(diǎn)分析方法來助力生物制藥的研發(fā)成為焦點(diǎn)。在創(chuàng)新藥領(lǐng)域，細(xì)胞...

全基因組測(cè)序是對(duì)重組細(xì)胞的基因組DNA進(jìn)行深度測(cè)序，技術(shù)成熟簡單這里不做介紹了，我們分享一下LM-PCR結(jié)合二代測(cè)序的檢測(cè)方法。LM-PCR全稱連接介導(dǎo)的PCR。將含有慢病毒插入的基因組進(jìn)行隨機(jī)打斷并連接接頭，然后通過兩輪PCR富集含有慢病毒LTR-宿主區(qū)域的嵌合序列。此擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行二代測(cè)序即可以分析確定載體在宿主基因組上的整合位點(diǎn)。LM-PCR與高通量測(cè)序技術(shù)相結(jié)合后，有了更為豐富的應(yīng)用場(chǎng)景。比如，識(shí)別整合載體（慢病毒載體，轉(zhuǎn)座子）的整合位點(diǎn)。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于基因zhiliao研究基因修飾細(xì)胞的克隆組成，或者通過研究整合事件評(píng)估新載體系統(tǒng)的生物安全性。AAV整合位點(diǎn)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)...

插入突變風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估一些整合性載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、轉(zhuǎn)座子）可將外源基因插入整合到細(xì)胞基因組中，這可能會(huì)導(dǎo)致關(guān)鍵基因突變或jihuo原基因，從而導(dǎo)致惡性liu風(fēng)險(xiǎn)增加。影響插入突變的關(guān)鍵風(fēng)險(xiǎn)因素包括：（1）載體的整合特征，如插入位點(diǎn)的偏好性；（2）載體的設(shè)計(jì)，如增強(qiáng)子、啟動(dòng)子等構(gòu)建元件的活性，影響鄰近基因的潛力；產(chǎn)生剪接突變體的潛在剪接位點(diǎn)或多聚腺苷酸信號(hào)等；（3）細(xì)胞載體拷貝數(shù)；4）轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物的功能活性（如與細(xì)胞生長調(diào)控相關(guān)）和表達(dá)水平；5）靶細(xì)胞群的轉(zhuǎn)化可能性，這可能與細(xì)胞的分化狀態(tài)、增殖潛力、體外培養(yǎng)條件和體內(nèi)植入環(huán)境等有關(guān)。整合位點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)...

給藥間隔，對(duì)于shou次在人體中開展臨床試驗(yàn)（firstinhuman,FIH）的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，采用受試者間隔給藥的方式，可以避免多個(gè)受試者同時(shí)暴露而出現(xiàn)預(yù)期外的安全性風(fēng)險(xiǎn)。在FIH試驗(yàn)中，對(duì)首例患者應(yīng)加強(qiáng)不良事件監(jiān)測(cè)，還要考慮遲發(fā)性不良事件。向同一劑量組內(nèi)下一例受試者或下一個(gè)劑量組受試者給藥前，應(yīng)規(guī)定一定的隨訪間隔，以觀察急性和亞急性不良事件。間隔期的選擇一般基于非臨床研究中急性或亞急性毒性的發(fā)生情況，細(xì)胞在體內(nèi)的活性持續(xù)時(shí)間和/或既往類似產(chǎn)品在人體中的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)。整合位點(diǎn)鑒定一般用什么方法？？嘉興插入位點(diǎn)整合位點(diǎn)評(píng)估全基因組測(cè)序是對(duì)重組細(xì)胞的基因組DNA進(jìn)行深度測(cè)序，技術(shù)成熟簡...

耐受劑量（maximumtolerancedose,MTD）通常通過劑量遞增設(shè)計(jì)實(shí)現(xiàn)。細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可接受的毒性或不良反應(yīng)的嚴(yán)重程度，會(huì)基于疾病的嚴(yán)重性和獲益風(fēng)險(xiǎn)預(yù)期進(jìn)行判斷，申請(qǐng)人應(yīng)在研究方案中明確探索方法。對(duì)于免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，可以通過劑量探索確定其生物學(xué)活性范圍或比較好有效劑量，如果在較低劑量水平可以觀察到穩(wěn)定的生物學(xué)活性或臨床獲益，申請(qǐng)人可能不必要確定MTD。此外，很多免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品受制備及運(yùn)輸?shù)葘?shí)際情況的限制，只能達(dá)到特定的暴露量范圍，臨床試驗(yàn)中可能只能觀察部分劑量水平的安全性特征，而無法確定MTD。但須認(rèn)識(shí)到，早期研究往往難以準(zhǔn)確估計(jì)產(chǎn)品的有效推薦劑量...

應(yīng)用場(chǎng)景：單克隆抗體藥物輔助篩選；致xingbing毒整合位點(diǎn)檢測(cè)與整合偏好性分析等；WGS不適用于轉(zhuǎn)染之后未經(jīng)過傳代培養(yǎng)和表型篩選的細(xì)胞系。豐富的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)?zāi)壳?，唯可已與國內(nèi)外多家免疫zhiliao研究前沿企業(yè)開展合作，采用該方法對(duì)高度異質(zhì)性的CAR-T細(xì)胞進(jìn)行整合位點(diǎn)檢測(cè)與細(xì)胞安全性評(píng)估，具有較為豐富的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)。一般HBV插入到基因組中形成下圖結(jié)構(gòu)。使用三代測(cè)序，靶向插入?yún)^(qū)域的測(cè)序reads可分為Readsgroup1（HBV插入?yún)^(qū)域測(cè)通）和Readsgroup2（reads部分比對(duì)染色體，部分比對(duì)HBV插入?yún)^(qū)域）?；谌鷶?shù)據(jù)比對(duì)后bam文件的IGV圖，判斷變異類型，推斷斷點(diǎn)類型和插入序列...

通常不需要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的遺傳毒性組合試驗(yàn)，但應(yīng)根據(jù)基因zhiliao產(chǎn)品的特點(diǎn)、產(chǎn)品的具體適應(yīng)癥、載體的已有信息、導(dǎo)入基因序列結(jié)構(gòu)等，評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品整合進(jìn)基因組的可能性，判斷是否需要開展另外的遺傳毒性研究，如研究基因組修飾的發(fā)生情況，并檢測(cè)隨后可能發(fā)生的異常細(xì)胞行為；評(píng)估插入突變（插入位點(diǎn)、插入拷貝數(shù)等）引起的遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)基因zhiliao產(chǎn)品采用基因編輯或轉(zhuǎn)座子技術(shù)時(shí)，需要關(guān)注脫靶編輯、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座印跡引起的遺傳毒性問題；鑒定/表征基因組整合位點(diǎn)。ISA整合位點(diǎn)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。江蘇CAR-T整合位點(diǎn)服務(wù)迎細(xì)胞基因zhiliao浪潮，整...

細(xì)胞和基因療法可進(jìn)一步分為體內(nèi)zhiliao和體外zhiliao，體外zhiliao是將患者的體細(xì)胞從體內(nèi)分離，在體外進(jìn)行培養(yǎng)并使用攜帶有正?；蚱蔚妮d體修復(fù)突變基因，通過注射的方法將改良后的細(xì)胞回輸入患者體內(nèi)以進(jìn)行疾病的zhiliao。體內(nèi)zhiliao是利用較為直接的方法對(duì)局部或全身注射含有修復(fù)基因片段的病毒或非病毒載體，常用AAV等非整合型載體。利用慢病毒載體導(dǎo)入外源序列時(shí)其插入位置具有隨機(jī)性，可能會(huì)引起正?；蚴Щ睿绻迦肽承┛刂萍?xì)胞分裂的基因中會(huì)導(dǎo)致變。所以檢測(cè)重組細(xì)胞的整合位點(diǎn)來評(píng)價(jià)細(xì)胞的安全性就顯得尤為重要。CAR-T整合位點(diǎn)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，...

如果免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品擬與其他藥物或zhiliao方法聯(lián)合zhiliao，有必要通過探索性試驗(yàn)觀察聯(lián)合zhiliao的安全和耐受性，以及其他藥物或zhiliao方法對(duì)免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品體內(nèi)活性、增殖或存活、給藥頻率等的影響。如果免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品擬與其他藥物或zhiliao方法聯(lián)合zhiliao，有必要通過探索性試驗(yàn)觀察聯(lián)合zhiliao的安全和耐受性，以及其他藥物或zhiliao方法對(duì)免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品體內(nèi)活性、增殖或存活、給藥頻率等的影響。體內(nèi)活性評(píng)估。探索性試驗(yàn)的一個(gè)常見次要目的是對(duì)產(chǎn)品活性進(jìn)行初步評(píng)估，例如，細(xì)胞在體內(nèi)的增殖存活和生物分布（如藥代動(dòng)力學(xué)）...

全基因組測(cè)序是對(duì)重組細(xì)胞的基因組DNA進(jìn)行深度測(cè)序，技術(shù)成熟簡單這里不做介紹了，我們分享一下LM-PCR結(jié)合二代測(cè)序的檢測(cè)方法。LM-PCR全稱連接介導(dǎo)的PCR。將含有慢病毒插入的基因組進(jìn)行隨機(jī)打斷并連接接頭，然后通過兩輪PCR富集含有慢病毒LTR-宿主區(qū)域的嵌合序列。此擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行二代測(cè)序即可以分析確定載體在宿主基因組上的整合位點(diǎn)。LM-PCR與高通量測(cè)序技術(shù)相結(jié)合后，有了更為豐富的應(yīng)用場(chǎng)景。比如，識(shí)別整合載體（慢病毒載體，轉(zhuǎn)座子）的整合位點(diǎn)。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于基因zhiliao研究基因修飾細(xì)胞的克隆組成，或者通過研究整合事件評(píng)估新載體系統(tǒng)的生物安全性。整合位點(diǎn)政策，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，...

在開展除惡性liu外其他適應(yīng)癥的臨床研究時(shí)，每一劑量水平的受試者數(shù)量還應(yīng)考慮不同適應(yīng)癥人群對(duì)風(fēng)險(xiǎn)的可接受程度，或者安全性的評(píng)價(jià)要求，可能需要通過更大的樣本量提供更充分的安全性信息。此外，其他研究目的，如耐受性、制備可行性和藥理學(xué)活性評(píng)估，也可能影響樣本量或劑量增幅的選擇。免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可能在受試者體內(nèi)長期存活，在對(duì)產(chǎn)品毒性和活性持續(xù)時(shí)間有初步了解之前，可能較難預(yù)測(cè)重復(fù)給藥的風(fēng)險(xiǎn)。因此，很多shou次用于人體的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品采用單次給yaofang案。但是，對(duì)于某些產(chǎn)品如zhiliao性細(xì)胞疫苗，當(dāng)已有研究證據(jù)提示安全性風(fēng)險(xiǎn)較低且多次給藥可能增加活性時(shí)，在早期試驗(yàn)中有可能...

在國家藥典委員會(huì)公布的《人用基因制品總論》（草案）的3.1條款中，特別指出：“應(yīng)檢測(cè)重組載體基因組或質(zhì)粒的完整性和均一性，載體和zhiliao序列的遺傳穩(wěn)定性”；“對(duì)于病毒載體，適當(dāng)情況下應(yīng)測(cè)定插入位點(diǎn)，并充分評(píng)估插入突變的可能性和相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)”。對(duì)此，可分別采用宿主細(xì)胞全基因組重測(cè)序方法和LM-PCR結(jié)合二代測(cè)序方法為研究人員提供整合位點(diǎn)檢測(cè)服務(wù)。通過測(cè)序分析可對(duì)整合位點(diǎn)相關(guān)基因進(jìn)行功能分析，對(duì)整合位點(diǎn)偏好性畫像，從而評(píng)估病毒載體的安全性。整合位點(diǎn)方法，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。溫州ISA整合位點(diǎn)報(bào)告遺傳物質(zhì)整合到宿主基因組中、患者長期處于免疫抑制狀態(tài)誘發(fā)（惡...

慢病毒整合事件要素及檢測(cè)方法要求：對(duì)于食藥監(jiān)局指導(dǎo)性文件和既往研究內(nèi)容，我們不難發(fā)現(xiàn)對(duì)于慢病毒整合檢測(cè)所謂整合事件至少包含三個(gè)要素：整合位置；整合方向；特定整合位置和整合方向的juedui克隆數(shù)目；因此檢測(cè)在定性和定量性能方面都有要求，檢測(cè)方法需要結(jié)合臨床樣本進(jìn)行分析性能進(jìn)行系統(tǒng)驗(yàn)證。慢病毒整合位點(diǎn)檢測(cè)方法，目前檢測(cè)慢病毒整合位點(diǎn)的主要平臺(tái)為高深度測(cè)序（NGS)。而目前較為成熟已經(jīng)應(yīng)用于工業(yè)產(chǎn)品檢測(cè)及臨床研究的整合位點(diǎn)富集建庫方法為機(jī)械片段化及依賴于接頭的擴(kuò)增子建庫(LM-PCR,如INSPIIRED),已經(jīng)應(yīng)用于多個(gè)CART19臨床項(xiàng)目的安全性評(píng)估及與CAR-T細(xì)胞增值相關(guān)的回顧yao效學(xué)分...

f如果RCT設(shè)計(jì)不可行，申請(qǐng)人可能在確證性臨床試驗(yàn)中采用單臂試驗(yàn)（singlearmtrial,SAT）。在這種情況下，申請(qǐng)人應(yīng)解釋無法開展RCT試驗(yàn)的理由并提供相應(yīng)研究證據(jù)，并有必要利用回顧性數(shù)據(jù)、前瞻性真實(shí)世界研究、薈萃分析或流行病學(xué)調(diào)查等數(shù)據(jù)及探索性研究結(jié)果，對(duì)受試人群、主要終點(diǎn)和預(yù)期臨床療效等研究要素進(jìn)行合理說明。RCT確證性試驗(yàn)應(yīng)在可行的情況下盡量保持盲法。對(duì)于很多免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，由于研究者或醫(yī)務(wù)人員參與細(xì)胞的采集并配合操作給藥過程，可能難以對(duì)研究者設(shè)盲，這種情況下有必要采用其它方法降低試驗(yàn)的偏倚，例如對(duì)受試者設(shè)盲。如果盲法不可行，如SAT，應(yīng)設(shè)立不受研究者影響的單獨(dú)審評(píng)...

靶細(xì)胞群的轉(zhuǎn)化可能性，這可能與細(xì)胞的分化狀態(tài)、增殖潛力、體外培養(yǎng)條件和體內(nèi)植入環(huán)境等有關(guān)。基于已有科學(xué)經(jīng)驗(yàn)和既往非臨床/臨床研究結(jié)果，如果認(rèn)為基因修飾細(xì)胞所采用的載體系統(tǒng)可將外源基因整合到細(xì)胞基因組中并可在體內(nèi)長期存續(xù)，需綜合分析以上風(fēng)險(xiǎn)因素，評(píng)估潛在的插入突變、致瘤/致性風(fēng)險(xiǎn)。非臨床研究，應(yīng)采用具有代表性的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)行基因整合位點(diǎn)分析，分析細(xì)胞的克隆組成以及在關(guān)注基因（如liu相關(guān)調(diào)控基因）附近有無優(yōu)先整合跡象，含有關(guān)注整合位點(diǎn)的細(xì)胞有無優(yōu)先異常增殖。crispr/cas9整合位點(diǎn)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高?；蚓庉嬚衔稽c(diǎn)技術(shù)應(yīng)用場(chǎng)景：單克隆抗體藥物...

不同基因zhiliao產(chǎn)品的特殊考慮1.關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產(chǎn)品，例如轉(zhuǎn)座子元件、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒及其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉(zhuǎn)座子的載體在體外修飾的細(xì)胞，長期隨訪中需格外關(guān)注基因zhiliao產(chǎn)品的基因組整合風(fēng)險(xiǎn)，建議申辦方分析基因zhiliao載體在靶細(xì)胞或相關(guān)替代細(xì)胞的基因組中整合的影響（例如是否存在克隆性生長、是否存在優(yōu)勢(shì)克隆、克隆性生長是否導(dǎo)致惡性liu等）。如果基因組整合相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)的分析可行。整合位點(diǎn)CRO，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。深圳整合位點(diǎn)政策給藥間隔，對(duì)于shou次在人體中開...

給藥間隔，對(duì)于shou次在人體中開展臨床試驗(yàn)（firstinhuman,FIH）的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，采用受試者間隔給藥的方式，可以避免多個(gè)受試者同時(shí)暴露而出現(xiàn)預(yù)期外的安全性風(fēng)險(xiǎn)。在FIH試驗(yàn)中，對(duì)首例患者應(yīng)加強(qiáng)不良事件監(jiān)測(cè)，還要考慮遲發(fā)性不良事件。向同一劑量組內(nèi)下一例受試者或下一個(gè)劑量組受試者給藥前，應(yīng)規(guī)定一定的隨訪間隔，以觀察急性和亞急性不良事件。間隔期的選擇一般基于非臨床研究中急性或亞急性毒性的發(fā)生情況，細(xì)胞在體內(nèi)的活性持續(xù)時(shí)間和/或既往類似產(chǎn)品在人體中的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)。MAPS:基因整合位點(diǎn)高通量測(cè)序分析的新方法。嘉興基因編輯整合位點(diǎn)服務(wù)申請(qǐng)人可以基于總體臨床研究規(guī)劃考慮早期探索性研...

確證性臨床試驗(yàn)。與其它藥物一樣，免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品的確證性研究（或關(guān)鍵研究）的目的是確認(rèn)探索性研究中初步提示的療效和安全性，為注冊(cè)提供關(guān)鍵的獲益/風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估證據(jù)。確證性研究的目標(biāo)人群、主要和次要終點(diǎn)的選擇、研究持續(xù)時(shí)間、樣本量估計(jì)和統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)等應(yīng)符合具體zhiliao領(lǐng)域的一般指南要求。對(duì)照和設(shè)盲，良好的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)（randomizedcontrolledtrial,RCT）是確證性研究中優(yōu)先推薦的設(shè)計(jì)方法，該研究方法可以消除受試者的基線差異、減少偏倚，有利于客觀評(píng)價(jià)試驗(yàn)產(chǎn)品的zhiliao效果。對(duì)于某些適應(yīng)癥，可能缺少合適的對(duì)照藥物，或倫理上不宜采用安慰劑作為對(duì)照藥，可考慮與比較好支...

CAR-T慢病毒載體整合的潛在安全性隱患包括CAR-Tzhiliao在內(nèi)的基因編輯性細(xì)胞zhiliao方法，采用慢病毒整合性載體將外源基因插入整合到細(xì)胞基因組中，某些插入位置可能會(huì)導(dǎo)致關(guān)鍵基因突變或jihuo原基因，從而導(dǎo)致惡性liu風(fēng)險(xiǎn)增加。因載體整合導(dǎo)致致瘤性基因變異及新發(fā)細(xì)胞變稱為二次成瘤。在持續(xù)性細(xì)胞zhiliao過程中，這種潛在的成瘤性不良反應(yīng)的發(fā)生時(shí)間往往會(huì)有明顯的滯后性且很難預(yù)測(cè)。因此CAR-Tzhiliao需要評(píng)估潛在的插入突變風(fēng)險(xiǎn)和致性風(fēng)險(xiǎn)。整合位點(diǎn)評(píng)估，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。蘇州LV整合位點(diǎn)安全性評(píng)價(jià)在國家藥典委員會(huì)公布的《人用基因制...

?如果受試者體內(nèi)出現(xiàn)載體陽性細(xì)胞的克隆性生長，或檢測(cè)發(fā)現(xiàn)基因整合位點(diǎn)在基因或相關(guān)基因附近，應(yīng)縮短檢測(cè)間隔至不超過3個(gè)月并密切監(jiān)測(cè)惡性liu征兆，直至檢測(cè)不到基因zhiliao載體。?對(duì)基于慢病毒/逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的基因zhiliao產(chǎn)品，如出現(xiàn)與可復(fù)制xingbing毒可能相關(guān)的不良事件，還應(yīng)開展可復(fù)制xingbing毒（replicablecompetentlentivirus/retrovirus，RCL/RCR）的檢測(cè)。關(guān)于基因編輯產(chǎn)品的特殊考慮基因編輯產(chǎn)品除了適用基因zhiliao產(chǎn)品的一般考慮以及整合性載體的特殊考慮外，長期隨訪中還應(yīng)額外關(guān)注脫靶風(fēng)險(xiǎn)，量化評(píng)估脫靶活性和在靶活性之間的相...

免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)水平與多種因素有關(guān)，如細(xì)胞來源和類型、體內(nèi)活性和存活時(shí)間、是否有外源基因表達(dá)、基因表達(dá)使用的載體類型以及是否存在基因組整合等。針對(duì)不同風(fēng)險(xiǎn)水平的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，隨訪持續(xù)時(shí)間的建議如下：?對(duì)于沒有外源基因表達(dá)、且體外操作不改變細(xì)胞存活時(shí)間及分化潛能的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，長期隨訪的持續(xù)時(shí)間不應(yīng)短于細(xì)胞在體內(nèi)的自然存活時(shí)間，建議對(duì)受試者進(jìn)行1年或以上的隨訪。對(duì)于有外源基因表達(dá)、但不存在基因整合或基因重組風(fēng)險(xiǎn)，或載體的基因整合或重組風(fēng)險(xiǎn)較低的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，建議對(duì)受試者進(jìn)行不少于5年的隨訪。?對(duì)于有外源基因表達(dá)、而且表達(dá)載體存在基因整合或...

當(dāng)載體或基因zhiliao產(chǎn)品原有的風(fēng)險(xiǎn)特征增加時(shí)，例如經(jīng)過修飾以攜帶基因組編輯成分的質(zhì)?；蚋淖兘oyaofang式以提高整合能力等，需要提高對(duì)長期隨訪觀察的要求；反之，也可以對(duì)目前認(rèn)為存在遲發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的基因zhiliao載體進(jìn)行修飾，以降低這些風(fēng)險(xiǎn)。長期表達(dá)，與其他產(chǎn)品相比，部分基因zhiliao產(chǎn)品的明顯特征是可以在患者靶細(xì)胞或基因修飾細(xì)胞中持續(xù)存在并編碼表達(dá)作用因子（功能性蛋白或基因表達(dá)調(diào)節(jié)元件），并通過長久或長期改變靶細(xì)胞或組織的功能來達(dá)到zhiliao效果。同時(shí)，由于基因zhiliao編碼的作用因子在體內(nèi)的長期暴露或表達(dá)異常，可能產(chǎn)生與其功能相關(guān)的長期安全性風(fēng)險(xiǎn)，如細(xì)胞生長失控和惡性liu...