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二代測(cè)序——轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的實(shí)驗(yàn)流程（下） 測(cè)序 根據(jù)研究需求和預(yù)算選擇合適的測(cè)序平臺(tái)，如 Illumina 測(cè)序平臺(tái)。它的測(cè)序原理主要是邊合成邊測(cè)序（SBS）。在測(cè)序過(guò)程中，dNTP（脫氧核糖核苷三磷酸）帶有不同顏色的熒光標(biāo)記，當(dāng)新的 dNTP ...

②二代測(cè)序一般多久出結(jié)果？ 2、測(cè)序平臺(tái)和通量 不同的二代測(cè)序平臺(tái)有不同的通量（一次能測(cè)序的樣本數(shù)量和數(shù)據(jù)量）和測(cè)序速度。一些高通量的測(cè)序平臺(tái)，如IlluminaNovaSeq系列，能夠在較短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量的數(shù)據(jù)。但如果使用的是通量較低的小型測(cè)...

關(guān)于二代測(cè)序的簡(jiǎn)介： 二代測(cè)序技術(shù)(Next-Generation Seguencing,NGS)也稱(chēng)為高通量測(cè)序技術(shù)，是一種能夠同時(shí)對(duì)數(shù)百萬(wàn)甚至數(shù)十億個(gè) DNA片段進(jìn)行測(cè)序的方法。與傳統(tǒng)的桑格測(cè)序相比二代測(cè)序技術(shù)具有高通量、高準(zhǔn)確性、高靈敏度和低成...

二代測(cè)序——實(shí)驗(yàn)流程類(lèi)問(wèn)題 二代測(cè)序的實(shí)驗(yàn)流程包括哪些步驟：首先是樣本準(zhǔn)備，提取高質(zhì)量的DNA或RNA，并進(jìn)行片段化處理；然后進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建，在片段兩端連接特定接頭；接著進(jìn)行文庫(kù)質(zhì)量檢測(cè)和定量，合格的文庫(kù)上機(jī)測(cè)序；***對(duì)測(cè)序得到的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息...

二代測(cè)序技術(shù)在不同人群中的準(zhǔn)確性有何差異③ 孕婦及胎兒 優(yōu)勢(shì)：無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查（NIPT）是二代測(cè)序技術(shù)用于孕期胎兒常見(jiàn)染色體非整倍體篩查的應(yīng)用，對(duì)于唐氏綜合征、18-三體綜合征、13-三體綜合征等染色體異常疾病的檢測(cè)準(zhǔn)確率分別能達(dá)到95%、85%...

②二代測(cè)序一般多久出結(jié)果？ 2、測(cè)序平臺(tái)和通量 不同的二代測(cè)序平臺(tái)有不同的通量（一次能測(cè)序的樣本數(shù)量和數(shù)據(jù)量）和測(cè)序速度。一些高通量的測(cè)序平臺(tái)，如IlluminaNovaSeq系列，能夠在較短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量的數(shù)據(jù)。但如果使用的是通量較低的小型測(cè)...

③二代測(cè)序一般多久出結(jié)果？ 3、測(cè)序深度和覆蓋度要求 測(cè)序深度是指每個(gè)堿基被測(cè)序的平均次數(shù)，覆蓋度是指測(cè)序獲得的堿基占整個(gè)基因組（或目標(biāo)區(qū)域）的比例。如果要求高測(cè)序深度和高覆蓋度，比如進(jìn)行**全基因組的深度測(cè)序（測(cè)序深度可能達(dá)到100X甚至更高...

二代測(cè)序技術(shù)的一些***研究進(jìn)展③ 技術(shù)優(yōu)化與創(chuàng)新領(lǐng)域 測(cè)序準(zhǔn)確性提高：通過(guò)改進(jìn)測(cè)序試劑、優(yōu)化測(cè)序反應(yīng)條件以及開(kāi)發(fā)更先進(jìn)的數(shù)據(jù)分析算法，二代測(cè)序技術(shù)的準(zhǔn)確性不斷提升，能夠更可靠地檢測(cè)到低頻變異和復(fù)雜結(jié)構(gòu)變異等。 成本進(jìn)一步降低：隨著技術(shù)的...

②二代測(cè)序一般多久出結(jié)果？ 2、測(cè)序平臺(tái)和通量 不同的二代測(cè)序平臺(tái)有不同的通量（一次能測(cè)序的樣本數(shù)量和數(shù)據(jù)量）和測(cè)序速度。一些高通量的測(cè)序平臺(tái)，如IlluminaNovaSeq系列，能夠在較短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量的數(shù)據(jù)。但如果使用的是通量較低的小型測(cè)...

二代測(cè)序——數(shù)據(jù)分析類(lèi)問(wèn)題 二代測(cè)序數(shù)據(jù)分析的主要內(nèi)容和挑戰(zhàn)是什么：主要內(nèi)容包括數(shù)據(jù)的質(zhì)量控制、序列比對(duì)、變異檢測(cè)、基因表達(dá)定量、功能注釋等。挑戰(zhàn)在于數(shù)據(jù)量巨大，需要高效的計(jì)算資源和復(fù)雜的生物信息學(xué)算法來(lái)處理；數(shù)據(jù)質(zhì)量參差不齊，需要嚴(yán)格的質(zhì)量控制和過(guò)...

二代測(cè)序——基因組測(cè)序該測(cè)幾個(gè)G？ 1、人類(lèi)全基因組測(cè)序 常規(guī)全基因組測(cè)序：一般建議測(cè)序深度為30X-50X，人類(lèi)基因組大小約為3G，因此數(shù)據(jù)量通常在90G-150G左右。這樣的測(cè)序深度可以較為***地檢測(cè)到基因組中的各種變異，包括單核苷酸多態(tài)...

二代測(cè)序——實(shí)驗(yàn)流程類(lèi)問(wèn)題 二代測(cè)序的實(shí)驗(yàn)流程包括哪些步驟：首先是樣本準(zhǔn)備，提取高質(zhì)量的DNA或RNA，并進(jìn)行片段化處理；然后進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建，在片段兩端連接特定接頭；接著進(jìn)行文庫(kù)質(zhì)量檢測(cè)和定量，合格的文庫(kù)上機(jī)測(cè)序；***對(duì)測(cè)序得到的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息...

二代測(cè)序——轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的實(shí)驗(yàn)流程（下） 測(cè)序 根據(jù)研究需求和預(yù)算選擇合適的測(cè)序平臺(tái)，如 Illumina 測(cè)序平臺(tái)。它的測(cè)序原理主要是邊合成邊測(cè)序（SBS）。在測(cè)序過(guò)程中，dNTP（脫氧核糖核苷三磷酸）帶有不同顏色的熒光標(biāo)記，當(dāng)新的 dNTP ...

③二代測(cè)序一般多久出結(jié)果？ 3、測(cè)序深度和覆蓋度要求 測(cè)序深度是指每個(gè)堿基被測(cè)序的平均次數(shù)，覆蓋度是指測(cè)序獲得的堿基占整個(gè)基因組（或目標(biāo)區(qū)域）的比例。如果要求高測(cè)序深度和高覆蓋度，比如進(jìn)行**全基因組的深度測(cè)序（測(cè)序深度可能達(dá)到100X甚至更高...

什么樣本可以做二代測(cè)序？③ 細(xì)胞樣本 培養(yǎng)細(xì)胞：包括各種原代培養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞系。在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中，對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行測(cè)序可以了解細(xì)胞的基因特征和功能變化。例如，在研究細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路時(shí)，對(duì)經(jīng)過(guò)特定刺激處理的培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，以分析基因表達(dá)的上...

二代測(cè)序的建庫(kù)步驟② 二、片段化處理 物理方法：超聲破碎是常用的物理片段化方法。它通過(guò)超聲波的高頻振動(dòng)將核酸分子打斷成合適大小的片段。例如，在一些文庫(kù)構(gòu)建中，將DNA樣本置于超聲破碎儀中，通過(guò)調(diào)整超聲功率和時(shí)間，可以將DNA片段化到幾百堿基對(duì)（...

二代測(cè)序——蛋白質(zhì)甲基化 概念及位置：蛋白質(zhì)甲基化是指在蛋白質(zhì)的氨基酸殘基上添加甲基基團(tuán)。常見(jiàn)的甲基化修飾位點(diǎn)包括精氨酸（Arg）和賴(lài)氨酸（Lys）殘基。 作用 1、調(diào)節(jié)蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用：例如，組蛋白（染色體的組成成分）的甲基化...

二代測(cè)序的建庫(kù)步驟① 一、樣本準(zhǔn)備 樣本采集：根據(jù)研究目的采**適的樣本，如血液、組織、細(xì)胞等。例如，在**研究中，可能會(huì)采集**組織和對(duì)應(yīng)的正常組織。對(duì)于血液樣本，一般采用靜脈穿刺采集外周血，收集在含有抗凝劑（如EDTA）的**管中，以防止血...

一代、二代、三代測(cè)序的技術(shù)原理和技術(shù)特點(diǎn)分別是什么？ 技術(shù)原理： 一代—雙脫氧終止法 二代—橋式PCR+4色熒光可逆終止+激光掃描成像 三代—PacBio SMRT測(cè)序技術(shù) 技術(shù)特點(diǎn)： 一代—只能檢測(cè)序列一致的PCR產(chǎn)物...

什么樣本可以做二代測(cè)序？② 組織樣本 新鮮組織：如手術(shù)切除的**組織、活檢組織等。新鮮組織樣本中的細(xì)胞完整性較好，能夠提供高質(zhì)量的DNA和RNA。在**研究中，對(duì)新鮮**組織進(jìn)行全基因組測(cè)序、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等，可以深入了解**的基因突變、基因表達(dá)變...

什么樣本可以做二代測(cè)序？① 1、血液樣本 全血：這是最常見(jiàn)的樣本類(lèi)型之一。血液中含有白細(xì)胞，其細(xì)胞核內(nèi)有完整的基因組DNA。通過(guò)提取白細(xì)胞中的DNA，可以進(jìn)行全基因組測(cè)序、全外顯子組測(cè)序等。例如，在遺傳病的基因診斷中，抽取患者的全血，提取DNA...

二代測(cè)序的建庫(kù)步驟① 一、樣本準(zhǔn)備 樣本采集：根據(jù)研究目的采**適的樣本，如血液、組織、細(xì)胞等。例如，在**研究中，可能會(huì)采集**組織和對(duì)應(yīng)的正常組織。對(duì)于血液樣本，一般采用靜脈穿刺采集外周血，收集在含有抗凝劑（如EDTA）的**管中，以防止血...

二代測(cè)序——技術(shù)原理類(lèi)問(wèn)題 二代測(cè)序與一代測(cè)序的區(qū)別是什么：一代測(cè)序技術(shù)如Sanger測(cè)序，一次只能讀取一條DNA序列，通量低、速度慢、成本高，但準(zhǔn)確性高，適用于對(duì)少量基因片段的精確測(cè)序。而二代測(cè)序技術(shù)具有高通量、速度快、成本低等優(yōu)點(diǎn)，可以同時(shí)對(duì)大量...

二代測(cè)序——基因組測(cè)序該測(cè)幾個(gè)G？② 人類(lèi)全外顯子組測(cè)序 人類(lèi)全外顯子組*占基因組的1%-2%，大小約為30M-60M左右，但通常需要較高的測(cè)序深度來(lái)確保外顯子區(qū)域的變異檢測(cè)準(zhǔn)確性，一般測(cè)序深度在100X-200X之間，數(shù)據(jù)量大約在3G-12G...

二代測(cè)序技術(shù)在不同人群中的準(zhǔn)確性有何差異① **患者 優(yōu)勢(shì)：對(duì)于**患者，二代測(cè)序技術(shù)準(zhǔn)確性相對(duì)較高，在**的診斷、***及監(jiān)測(cè)等方面應(yīng)用***。比如肺*患者，通過(guò)檢測(cè)**組織或血液中的基因突變，可準(zhǔn)確找到如EGFR、ALK等驅(qū)動(dòng)基因突變，為靶...

什么樣本可以做二代測(cè)序？① 1、血液樣本 全血：這是最常見(jiàn)的樣本類(lèi)型之一。血液中含有白細(xì)胞，其細(xì)胞核內(nèi)有完整的基因組DNA。通過(guò)提取白細(xì)胞中的DNA，可以進(jìn)行全基因組測(cè)序、全外顯子組測(cè)序等。例如，在遺傳病的基因診斷中，抽取患者的全血，提取DNA...

二代測(cè)序——轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的背景和基本原理 1、背景：在基因表達(dá)過(guò)程中，DNA 轉(zhuǎn)錄為 RNA，轉(zhuǎn)錄后的 RNA 會(huì)經(jīng)過(guò)一系列加工，包括剪接等過(guò)程形成成熟的 mRNA，然后進(jìn)行翻譯產(chǎn)生蛋白質(zhì)。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序可以讓我們?cè)谌蚪M范圍內(nèi)研究基因的表達(dá)情況，相比于...

不同二代測(cè)序技術(shù)平臺(tái)的速度 Illumina 測(cè)序平臺(tái)：這是目前市場(chǎng)上應(yīng)用較為***的二代測(cè)序平臺(tái)之一，其測(cè)序速度較快。例如 Illumina NovaSeq 系列，一次運(yùn)行可以在 1-3 天內(nèi)產(chǎn)生大量的數(shù)據(jù)，通量可達(dá)數(shù)億甚至數(shù)十億條讀長(zhǎng)，能夠滿(mǎn)足大...

④二代測(cè)序一般多久出結(jié)果？ 4、數(shù)據(jù)分析的復(fù)雜程度 數(shù)據(jù)分析是二代測(cè)序的重要環(huán)節(jié)。簡(jiǎn)單的分析，如檢測(cè)已知的單核苷酸多態(tài)性（SNP），可以通過(guò)與參考基因組比對(duì)后利用一些成熟的軟件快速完成。但如果是進(jìn)行復(fù)雜的分析，如尋找新的基因融合事件、復(fù)雜結(jié)構(gòu)變...

二代測(cè)序——RNA甲基化的概念、作用和檢測(cè)方法 RNA 甲基化概念及位置：RNA 甲基化是在 RNA 分子上添加甲基基團(tuán)，其中 N6 - 甲基腺苷（m6A）是最常見(jiàn)的一種 RNA 甲基化修飾形式，它主要發(fā)生在 mRNA（信使 RNA）的腺嘌呤（A）殘...