PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時,它可以與質粒DNA結合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn),配體在PLL上的共價附著可通過受體介導的途徑***增強內吞作用。例如,涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體,在肝細胞上表達...
在7種轉染試劑(DAC-30、DC-30、Lipofectin、LipofectAMINEPLUS、Effectene、FuGene 6和superect)中,F(xiàn)uGene 6轉染HASMCs和α-10 SMCs的效率比較高。在這兩種細胞系中,superect...
轉染試劑的凍融被認為是另一個可能影響轉染效率的潛在因素。Lipofectamine2000試劑與非冷凍對照相比,至少經歷一次凍融循環(huán)后,HEK293、Neuro2α、C2C12成肌細胞和肌管、hTERTMSC、SMA和HepG2細胞系的轉染效率更高,且細胞活力...
肌內注射脂質體不能引起強烈的毒性反應,這與肺內或靜脈注射途徑的情況不同。幾項體內研究表明,pDNA載體的肺內遞送是促炎th1樣細胞因子的產生和隨后浸潤細胞涌入肺區(qū)域的原因。在任何情況下,陽離子脂質本身不會引起免疫反應,而且這種效果不是由于pDNA制備中存在內*...
納米顆粒,由于其在DNA轉運到細胞中的保護能力,在不久的將來可以用作轉基因的非病毒載體。通過將納米粒子與許多不同的配體和化合物連接來修飾納米粒子,有助于改善它們在細胞內的運輸。將納米顆粒靶向到細胞內的特定位置,配子和胚胎,可以通過磁轉染來實現(xiàn)。盡管與市售的用于...
質子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉移的物理測量來評估,也可以通過化學測量來評估,在化學測量中,表達的蛋白質與另一種蛋白質之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當?shù)膱蟾嫦到y(tǒng)來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉移(BRET)...
***個靶向微泡心臟成像研究是在急性缺血再灌注損傷模型中進行的,該模型在狗身上注射了涂有磷脂酰絲氨酸的白細胞靶向微泡,磷脂酰絲氨酸是顆粒吞噬攝取的標記物。這些微泡針對的是在血管中積累且尚未外滲的白細胞:在再灌注后1小時觀察到**靶向的造影劑在梗死區(qū)積累。在心肌...
deae-葡聚糖是一種化學修飾的葡聚糖類似物。通過用二乙基氨基乙基修飾,右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質子化,這使得它可以自組裝成帶負電荷核酸的納米顆粒。deae -葡聚糖是***個用于核酸轉染的陽離子聚合物。早在20世紀50年代,它就極大地增強了脊髓灰質炎病毒和...
在腺病毒載體或脂質體的全身遞送后,轉基因表達相對短暫。靜脈注射脂叢的肺表達比給藥后第1天和第2天觀察到的比較大表達量每周減少約1log。造成這種現(xiàn)象的機制可能有以下幾種:(a)產生針對外源基因產物的新***抗體,(b)細胞因子介導的啟動子關閉,(c)通過凋亡、...
質子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉移的物理測量來評估,也可以通過化學測量來評估,在化學測量中,表達的蛋白質與另一種蛋白質之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當?shù)膱蟾嫦到y(tǒng)來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉移(BRET)...
隨著寡核苷酸生物合成產業(yè)的發(fā)展,不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場,以提高小RNA寡核苷酸轉染的效率。其中一種是通過化學修飾來提高其與靶標和阻斷外切酶活性的結合親和力的agomirs和antagomirs。agomir是一種人工修飾的雙鏈miRNA模擬物,旨在...
超聲照射聯(lián)合納米微泡的生物學效應。超聲給藥技術是基于細胞穿孔的生物物理過程,超聲結合納米微泡和這個過程被稱為超聲穿孔。與其他納米粒子相比,納米微泡在超聲能量照射下具有“塌縮”的特殊性質,導致納米微泡內爆,改變細胞膜的通透性。當超聲能量充分增加時,就會發(fā)生“超聲...
化學轉染的效率在很大程度上取決于幾個因素,如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質,以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸,并將其靶標傳遞給非分裂細胞和分裂細胞,因此在基因***中非常有用。有幾個因素已被證明可能影響病毒轉導的效率,...
共轉染是將一種以上類型的核酸引入真核細胞的過程。組合的一些例子包括多個質粒DNA ,siRNA和質粒DNA ,以及多個miRNAs進入同一個細胞。通常,多質粒DNA共轉染的目的是將一種以上的外源基因導入宿主細胞。其應用之一是生產由幾種質粒DNA成分組成的合成病...
超聲聯(lián)合納米微泡進行核酸輸送超聲聯(lián)合納米微泡進行DNA傳遞。不考慮超聲穿孔現(xiàn)象,建議采用US與帶核酸的微泡相互作用來提高傳輸效率。這種策略也可能有助于遺傳物質的位點特異性釋放,從而減少非共振組織轉染。通過納米微泡轉移基因已經采用了幾種技術,從基因的并發(fā)管理到納...
攜帶要轉染的特定核酸的載體構建可以進一步分為病毒載體或質粒載體。病毒和質粒通過存在合適的真核啟動子促進外源轉基因的表達。病毒載體可能在宿主細胞中觸發(fā)免疫原性反應,而非病毒載體的免疫原性相對較低。需要一種傳遞機制來促進靶向核酸或載體結構轉移到宿主細胞中。其中一些...
核酸與轉染試劑的比例對轉染效率也有影響。在一項涉及原代人成肌細胞的研究中,使用不同的核酸比例來比較轉染效率的影響,轉染試劑包括FuGENE6、Effectene和ExGen500(一種基于pei的試劑)。該研究的一個***發(fā)現(xiàn)是,轉染效率可能不一定與所用試劑的...
轉染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。在過去的30年里,轉染因其廣泛應用于研究疾病的細胞過程和分子機制而越來越受歡迎。了解疾病的分子途徑,可以發(fā)現(xiàn)可能用于疾病診斷和預后的特定生物標志物。此外,轉染可以作為基因***中的策略之一,用于*...
基因***是陽離子聚合物作為轉染劑的主要應用。通過攜帶質粒DNA、mRNA和siRNA,陽離子聚合物實現(xiàn)了與***相關的功能,如基因增強、基因抑制和基因組編輯?;?****直接、或許也是**簡單的策略是添加新的蛋白質編碼基因。在當前**背景下,mRNA疫苗的...
微泡空化時細胞膜和血管通透性的變化。電子顯微鏡已經證明,在細胞膜內產生的小孔與微泡的崩潰和射流的產生有關。根據(jù)超聲參數(shù),細胞膜內產生的孔隙可能是短暫的,導致細胞死亡或成功地將外源物質引入細胞質。除了改變細胞膜通透性外,將超聲應用于含有微泡的小血管還能改變血管壁...
除了mRNA疫苗,DNA疫苗也是不錯的選擇。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下,研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。他們改進了PG和PAMAM G4復合物的大小、運動性和表面電荷,然后在...
化學轉染的效率在很大程度上取決于幾個因素,如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質,以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸,并將其靶標傳遞給非分裂細胞和分裂細胞,因此在基因***中非常有用。有幾個因素已被證明可能影響病毒轉導的效率,...
納米微泡的直徑通常在150-500納米之間,是***藥物分布的誘人場景,并且與微泡相比,已證明可以改善**聚集和保留。近年來,納米微泡表現(xiàn)出優(yōu)異的穩(wěn)定性,這增加了它們在各種生物醫(yī)學應用中的應用。納米微泡提供超聲影像的對比度增強,因此具有***的診斷應用潛力。此...
內皮素(CD105)是轉化生長因子的受體,是一種增殖相關的低氧誘導蛋白,在血管生成內皮細胞上高度表達。使用99mTc-labeled單克隆抗體靶向內啡肽的免疫掃描顯示,**中大量攝取內啡肽。**近,已經描述了一種將內啡肽特異性單克隆抗體偶聯(lián)到微泡的新方法。通過...
微泡表面選擇合適的偶聯(lián)化學和修飾順序取決于配體的類型。一個重要的考慮因素是配體的大小及其對生物利用度的影響。小的親水分子,如代謝物和肽,可以直接偶聯(lián)到聚合物間隔物上,而不會***影響聚合物動力學。相比之下,大的蛋白質配體,如抗體,由于剪切應力和涉及微泡分散的有...
微泡空化時細胞膜和血管通透性的變化。電子顯微鏡已經證明,在細胞膜內產生的小孔與微泡的崩潰和射流的產生有關。根據(jù)超聲參數(shù),細胞膜內產生的孔隙可能是短暫的,導致細胞死亡或成功地將外源物質引入細胞質。除了改變細胞膜通透性外,將超聲應用于含有微泡的小血管還能改變血管壁...
熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后,能把短波長的光轉變?yōu)椴ㄩL較長的可見光波而反射出來,呈閃亮的鮮艷色彩。例如,酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用,也可以組合成復合熒光染...
為什么要使用熒光染料?雖然不同的染色技術(即考馬斯染色、銀染色、熒光染色)可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質,但使用熒光染料具有其獨特的優(yōu)勢。他們提供:高靈敏度:對于大多數(shù)分析物,熒光測量的靈敏度比吸光度測量高1000倍,即使在使用小樣本時也可以令人滿意地達到p...
DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料,可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當與細胞膜結合后其熒光強度**增強,這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細胞染色,這類染料在整個細胞膜上擴散,比較好濃度時可以使整個細胞膜染色。它...
SuperFluor活化酯(與Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同)SuperFlour系列熒光探針,具有更強的熒光強度,更廣的pH應用范圍(pH4~10),更好的抗淬滅性。在生物熒光領域已逐漸替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy...