支原體預(yù)防的實(shí)驗(yàn)步驟主要包括以下幾個方面: 1. 無菌操作技術(shù):在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程,包括穿戴適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)服、手套,使用無菌工具和耗材。 2. 環(huán)境控制:保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境清潔,定期消毒工作臺和實(shí)驗(yàn)室表面,使用層流罩或生物安全柜進(jìn)行細(xì)胞操作。 3. 細(xì)胞培養(yǎng)基和試劑的無菌過濾:所有加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中的試劑和補(bǔ)充物,如血清、抗*素等,都應(yīng)通過無菌過濾以去除支原體。 4. 細(xì)胞培養(yǎng)基和試劑的檢測:在添加到細(xì)胞培養(yǎng)物之前,對新的細(xì)胞培養(yǎng)基和試劑進(jìn)行支原體檢測,以確保它們沒有被污染。 5. 定期檢測:即使采取了預(yù)防措施,也應(yīng)定期對細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行支...
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體檢測出現(xiàn)假陽性結(jié)果可能由以下原因引起: 1. 擴(kuò)增產(chǎn)物污染:PCR擴(kuò)增產(chǎn)生的大量DNA拷貝若未妥善處理,極微量的污染就可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。 2. 引物設(shè)計(jì)不當(dāng):引物設(shè)計(jì)不夠特異性,可能會與非目標(biāo)序列發(fā)生反應(yīng),導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。 3. 試劑質(zhì)量問題:使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等試劑質(zhì)量不佳,可能引起非特異性擴(kuò)增或假陽性結(jié)果。 4. 操作技術(shù)問題:實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范,如混合樣本、標(biāo)簽錯誤或樣本標(biāo)識不清等,可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。 5. PCR反應(yīng)條件設(shè)置不當(dāng):不恰當(dāng)?shù)腜CR反應(yīng)條件,如溫度和時間選擇不當(dāng),可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。 6. DNA...
支原體的預(yù)防可通過以下方式: 1. 控制污染源:通過定期檢測和去除細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染,確保細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)無支原體存在,從而獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 2. 改善無菌操作技術(shù):通過提高實(shí)驗(yàn)人員的操作技術(shù)和意識,避免在細(xì)胞培養(yǎng)過程中引入支原體污染。 3. 使用無菌設(shè)備和耗材:使用無菌的細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材,如無菌培養(yǎng)基、血清等,減少支原體污染的風(fēng)險。 4. 定期消毒和清潔:對實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行定期的消毒和清潔,包括工作臺、培養(yǎng)箱等,以減少支原體的潛在污染。 5. 使用預(yù)防性試劑:使用專門針對支原體的預(yù)防性試劑,如加入細(xì)胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預(yù)防和細(xì)胞培...
支原體是一類細(xì)菌,由于缺乏細(xì)胞壁,具有靈活的膜結(jié)構(gòu)。這使得支原體的形態(tài)多變,很難在高倍顯微鏡下識別。并且能夠抵抗壓力、溫度、滲透壓和脫水,對許多針對細(xì)胞壁合成的常見抗*素具有抗性。它們的體積非常小,直徑通常在0.15~0.3μm,因此能夠輕易地穿過過濾系統(tǒng)。支原體能在哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)中可以高濃度生長,而不引起明顯的混濁或其他可見的污染跡象。 支原體通過特殊的前端細(xì)胞器與宿主細(xì)胞結(jié)合。支原體前端細(xì)胞器富含粘附素,可以附著在真核細(xì)胞上并穿透宿主細(xì)胞。支原體缺乏剛性細(xì)胞壁,可能有助于其與宿主細(xì)胞膜融合,并交換其膜和細(xì)胞質(zhì)成分。支原體的對細(xì)胞的毒性包括支原體侵襲性、分泌的致病酶和一些膜成分...
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體檢測出現(xiàn)假陰性結(jié)果可能由以下原因引起: 1. 樣本質(zhì)量問題:如果采集的樣本中含有抑制劑或者樣本在處理、存儲過程中出現(xiàn)問題,可能會影響PCR反應(yīng),導(dǎo)致假陰性。 2. 技術(shù)或操作問題:實(shí)驗(yàn)操作中的誤差,如樣本處理不當(dāng)、試劑配制錯誤、儀器設(shè)備問題等,都可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。 3. 檢測方法的局限性:某些檢測方法可能存在靈敏度或特異性不足的問題,導(dǎo)致無法準(zhǔn)確檢測到病原體。 4. 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的影響:培養(yǎng)法的靈敏度容易受到培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的影響,如果培養(yǎng)條件不適宜,可能導(dǎo)致支原體無法生長或生長緩慢,從而檢測不到。 5. 支原體種類問題:不是所有的支原體...
支原體檢測的應(yīng)用場景非常廣*,以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域: 1. 細(xì)胞培養(yǎng):在實(shí)驗(yàn)室和生物制品工廠中,細(xì)胞培養(yǎng)過程容易受到支原體污染。支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞功能改變,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果和生物制品的質(zhì)量。因此,支原體檢測在細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量控制中至關(guān)重要??蒲兄谐S玫葴財U(kuò)增的方法簡單便捷。 2. 生物制品生產(chǎn):在生物制品的生產(chǎn)過程中,如疫苗、生物藥物等,需要確保產(chǎn)品無支原體污染,以保證其安全性和有效性。監(jiān)管機(jī)構(gòu)要求在生產(chǎn)的關(guān)鍵階段進(jìn)行支原體檢測。通常采用qPCR的方式進(jìn)行。 支原體污染源和主要類型?上海細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測如何取樣 細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的檢測方法有多種,以下是一些常用的檢測...
細(xì)胞培養(yǎng)中建議使用支原體檢測的原因主要有以下幾點(diǎn): 1. 支原體污染率高:常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染率保守估計(jì)在15-35%之間。 2. 影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果:支原體污染會嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度,影響培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)和生理特征。 3. 難以用光學(xué)顯微鏡檢測:支原體是極小的細(xì)菌,其細(xì)胞膜周圍沒有細(xì)胞壁,無法用光學(xué)顯微鏡檢測到。 4. 難以消滅:支原體能夠迅速滲透整個實(shí)驗(yàn)室,一旦污染很難徹底消滅。 5. 影響產(chǎn)品質(zhì)量:支原體污染會影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量,監(jiān)管機(jī)構(gòu)推薦檢測所有細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物中是否存在支原體。 6. 保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性:定期進(jìn)行支原體檢測和去除,確保無支原體存在...
對于同一個樣品,如果一步法恒溫試劑盒檢測結(jié)果為陽性,而PCR檢測為陰性,可能的原因包括: 1. 檢測的支原體種類不同:一步法恒溫試劑盒可能檢測的支原體種類更多,例如可以涵蓋27種支原體,而PCR檢測可能只針對常見的12種支原體進(jìn)行檢測。因此,如果樣品中污染的支原體種類不在PCR檢測的范圍內(nèi),就可能出現(xiàn)一步法檢測為陽性而PCR檢測為陰性的情況。 2. 靈敏度的差異:PCR方法的靈敏度可能高于一步法恒溫檢測法。PCR可以檢測到低至單個拷貝的支原體,而一步法恒溫檢測可能需要更高的支原體拷貝數(shù),例如10^3^個拷貝。如果樣品中支原體的數(shù)量低于一步法檢測的靈敏度閾值,PCR檢測可能無法檢...
支原體污染后的細(xì)胞是否應(yīng)該直接丟棄還是嘗試重新培養(yǎng),這取決于多種因素,包括細(xì)胞的重要性、污染的程度、以及是否有有效的方法來清*支原體。以下是一些處理支原體污染的常見方法: 1. 直接丟棄:對于非重要的細(xì)胞,如果培養(yǎng)中的細(xì)胞、WCB的細(xì)胞等,可以采取直接將培養(yǎng)物與用過的培養(yǎng)基滅活后丟棄的方式。 2. 使用支原體清除劑:支原體清除劑處理細(xì)胞,作用濃度為25μg/ml,兩周可以清*支原體。 3. 使用支原體清*培養(yǎng)基:每2~3天更換一次新鮮培養(yǎng)液,并用無菌的PBS洗滌細(xì)胞,處理15天后進(jìn)行支原體檢測,以確定支原體是否被完全去除。 4. 支原體去除試劑:這是一種混合...
目前有 210 +種不同種類的支原體分布于人類、動物、昆蟲和植物中,其中 20 +種在細(xì)胞培養(yǎng)中被發(fā)現(xiàn)為污染物。支原體在實(shí)驗(yàn)室中的傳播來源多種多樣,主要來源包括實(shí)驗(yàn)室人員、胎牛血清(FBS)或新生牛血清(NBS)、以及由豬來源的胰蛋白酶溶液。此外,來自其他實(shí)驗(yàn)室或商業(yè)供應(yīng)商的細(xì)胞培養(yǎng)物、培養(yǎng)基、污染的試劑;非無菌供應(yīng)品、培養(yǎng)基和溶液;實(shí)驗(yàn)室人員;培養(yǎng)箱;液氮;空氣顆粒和氣溶膠;抗*素的過度使用;細(xì)胞培養(yǎng)器皿的不正確密封;以及其他的支原體細(xì)胞培養(yǎng)物等都可能成為支原體的傳播途徑。支原體檢測方法qPCR法?上海細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測試劑價格 檢測新鮮培養(yǎng)基是否有支原體污染,可以采用以下五種方案: ...
對于同一個樣品,如果PCR檢測結(jié)果為陽性而一步法恒溫檢測試劑盒結(jié)果為陰性,可能的原因包括: 1. 靈敏度差異:PCR方法通常具有較高的靈敏度,可以檢測到單個拷貝的支原體DNA。相比之下,一步法恒溫檢測試劑盒可能需要更高的支原體拷貝數(shù)才能檢測出陽性結(jié)果,例如需要10^3個拷貝。如果樣品中的支原體數(shù)量低于一步法試劑盒的檢測閾值,就可能出現(xiàn)PCR陽性而一步法陰性的情況。 2. 檢測范圍:PCR檢測可以針對特定的支原體序列設(shè)計(jì)引物,如果樣品中的支原體種類或序列與一步法試劑盒的檢測范圍不完全匹配,可能導(dǎo)致一步法檢測不出。 3. 樣品處理和提?。阂徊椒ê銣貦z測試劑盒可能對樣...
細(xì)胞培養(yǎng)中如果污染了支原體,會有以下幾種影響: 1. 細(xì)胞生長受影響:支原體污染會導(dǎo)致細(xì)胞生長速度減慢,甚至停止生長。細(xì)胞可能會變圓,從培養(yǎng)瓶壁脫落。 2. 細(xì)胞形態(tài)變化:雖然某些細(xì)胞在支原體污染后形態(tài)變化不明顯,但有些細(xì)胞會出現(xiàn)體積增大,細(xì)胞碎片增多,培養(yǎng)瓶中細(xì)胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積等現(xiàn)象。 3. 代謝和功能改變:支原體污染會影響細(xì)胞的代謝和功能,例如培養(yǎng)液中的精氨酸被大量消耗,引起細(xì)胞蛋白質(zhì)、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙。支原體活動還可能引起培養(yǎng)液成分和pH值的變化。 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果受影響:使用被支原體污染的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)會嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果...
支原體去除試劑在清*支原體的過程中可能會對細(xì)胞的生長狀態(tài)產(chǎn)生一定的影響。支原體去除試劑是一種非抗*素類試劑,它通過與支原體膜特異性結(jié)合,改變支原體膜的通透性,從而導(dǎo)致支原體破裂死亡。盡管該產(chǎn)品在作用期間可能會對細(xì)胞的活力和形態(tài)有一定的影響,但由于它不能穿過真核細(xì)胞的細(xì)胞膜,因此不會改變細(xì)胞的任何特性。支原體被清*后,細(xì)胞在后續(xù)的傳代過程中能快速恢復(fù)其正常的生長和增殖狀態(tài),細(xì)胞后續(xù)的生長增殖幾乎無影響。 此外,該產(chǎn)品不含抗*素,不會使支原體發(fā)生耐藥反應(yīng),細(xì)胞毒性小。然而,需要注意的是,不同細(xì)胞對支原體去除試劑的耐受程度有所差異,可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果適當(dāng)調(diào)整細(xì)胞量和處理?xiàng)l件。在某些情況下,...
支原體檢測的樣本既可以是細(xì)胞,也可以是培養(yǎng)基。在細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體污染是常見的問題,因此需要對細(xì)胞和培養(yǎng)基進(jìn)行檢測。細(xì)胞庫、病毒種子批、對照細(xì)胞以及臨床用細(xì)胞等都需要進(jìn)行支原體檢查,這通常包括培養(yǎng)法和指示細(xì)胞培養(yǎng)法(DNA染色法)。同時,病毒類疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養(yǎng)法檢查支原體,必要時,也可以采用指示細(xì)胞培養(yǎng)法篩選培養(yǎng)基。 此外,支原體檢測的培養(yǎng)基推薦使用支原體肉湯培養(yǎng)基和精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等,這些培養(yǎng)基可用于檢測藥品和生物制品中的支原體。在進(jìn)行支原體檢測時,需要取培養(yǎng)物樣品接種到適宜支原體生長的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上。 因此,支原體檢測的樣本既可以是細(xì)胞,...
支原體去除的原理通常涉及以下幾個方面: 1. 抗*素作用:使用特定的抗*素制劑來抑制支原體的生長和繁殖。例如,含有喹諾酮類、四環(huán)素衍生物類和大環(huán)內(nèi)酯類抗*素的混合制劑,這些抗*素能夠抑制支原體的DNA和蛋白合成。 2. 破壞細(xì)胞膜:支原體去除劑中的抑菌肽(AMPs)成分通過破壞支原體細(xì)胞膜的完整性,導(dǎo)致支原體細(xì)胞死亡。 3. 抑制DNA復(fù)制:支原體去除劑通過抑制支原體DNA回旋酶活性,有效抑制支原體DNA的復(fù)制,從遺傳物質(zhì)著手徹底殺滅支原體。 4. 協(xié)同作用:某些支原體去除劑利用抑菌肽(AMPs)和穿膜肽(CPPs)的協(xié)同作用來除去支原體,穿膜肽能夠幫助抑菌...
預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)過程中的支原體污染至關(guān)重要,因?yàn)橐坏┌l(fā)生污染,可能會嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果和細(xì)胞的生長。以下是一些有效的預(yù)防措施: 1. 無菌操作:始終在無菌條件下進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)操作,包括使用無菌的移液器、手套和其他實(shí)驗(yàn)室器材。 2. 個人防護(hù):穿戴適當(dāng)?shù)膫€人防護(hù)裝備,如實(shí)驗(yàn)服、手套和口罩,以減少污染的風(fēng)險。 3. 細(xì)胞培養(yǎng)室的清潔:保持實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞培養(yǎng)室的清潔,定期進(jìn)行消毒處理。 4. 培養(yǎng)箱的維護(hù):定期清潔和消毒CO2培養(yǎng)箱,避免飛濺和溢出,并維持嚴(yán)格的清潔計(jì)劃。 5. 使用無支原體污染的試劑:使用經(jīng)過檢測確認(rèn)無支原體污染的培養(yǎng)基、血清和其他添加物。 ...
LAMP法,即環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法(Loop-mediated isothermal amplification),在支原體檢測中的應(yīng)用具有以下特點(diǎn)和應(yīng)用場景: 1. 日常監(jiān)測:由于LAMP法的快速和簡便性,它適用于生物實(shí)驗(yàn)室的日常監(jiān)測,可以及時檢測出支原體的存在,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。 2. 疾病診斷:LAMP法已被成功應(yīng)用于SARS、禽流感、HIV等疾病的檢測中,并在2009年甲型H1N1流感事件中發(fā)揮了重要作用。 3. 臨床應(yīng)用:LAMP法在臨床樣本的檢測中顯示出了快速、高靈敏度和穩(wěn)定性,可以用于檢測實(shí)驗(yàn)室樣本及臨床樣本中的支原體。 4. 多病原體檢...
支原體預(yù)防的主要成分通常是指用于預(yù)防支原體污染的抗*素或化學(xué)試劑。在細(xì)胞培養(yǎng)中,預(yù)防支原體污染的措施包括在培養(yǎng)基中添加抗*素,以及采取其他預(yù)防措施來保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的清潔和無菌操作。以下是一些用于預(yù)防支原體污染的主要成分: 1. 四環(huán)素類抗*素:這類抗*素對支原體具有抑制作用,常用于治*和預(yù)防支原體感*。 2. 大環(huán)內(nèi)酯類抗*素:例如羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素等,用于治*肺炎支原體感*。 3. 喹諾酮類藥物:如氧氟沙星、司帕沙星等,也用于治*肺炎支原體感*。 4. 其他抗*素:例如氨基糖苷類、氯霉素等,對支原體有較小的抑制作用。 細(xì)胞培養(yǎng)過程中支原體污染怎...
支原體預(yù)防的策略主要包括以下幾個方面: 1. 控制污染源:通過定期檢測和去除細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染,確保細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)無支原體存在,從而獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 2. 改善無菌操作技術(shù):通過提高實(shí)驗(yàn)人員的操作技術(shù)和意識,避免在細(xì)胞培養(yǎng)過程中引入支原體污染。 3.使用無菌設(shè)備和耗材:使用無菌的細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材,如無菌培養(yǎng)基、血清等,減少支原體污染的風(fēng)險。 4. 定期消毒和清潔:對實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行定期的消毒和清潔,包括工作臺、培養(yǎng)箱等,以減少支原體的潛在污染。 5. 使用預(yù)防性試劑:使用專門針對支原體的預(yù)防性試劑,如加入細(xì)胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預(yù)防...
巢式PCR法和一步法恒溫支原體檢測試劑盒各有優(yōu)缺點(diǎn),具體哪個更好要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和條件來決定。 1. 巢式PCR法通過兩輪PCR擴(kuò)增來提高檢測的特異性和靈敏度。它的優(yōu)點(diǎn)是: 2. 特異性強(qiáng),可以減少假陽性結(jié)果。 3. 靈敏度高,可以檢測到很低數(shù)量的支原體。 4. 通過設(shè)計(jì)多對引物,可以覆蓋多種支原體種類。 不過巢式PCR法也存在一些缺點(diǎn): 1. 操作復(fù)雜,需要兩輪PCR反應(yīng)。 2. 容易受到PCR抑制物的影響,產(chǎn)生假陰性結(jié)果。 3. 反應(yīng)后需要開蓋電泳檢測,增加了污染的風(fēng)險。 而一步法恒溫支原體檢測試劑盒采用等溫擴(kuò)增技術(shù),具有以下優(yōu)點(diǎn): ...
支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中普遍的問題之一,細(xì)胞庫中或正在使用的細(xì)胞中,支原體的污染率約為15%-35%。并對培養(yǎng)細(xì)胞的生理和代謝造成諸多影響: 01/ 爭奪營養(yǎng):支原體的污染會阻礙細(xì)胞生長和增殖 02/ 改變蛋白質(zhì)、RNA 或 DNA 合成的水平 03/ 改變基因表達(dá)、細(xì)胞信號傳導(dǎo)和形態(tài) 04/ 損害膜和細(xì)胞器 05/ 導(dǎo)致突變和染色體變化 06/ 時間、金錢和有價值的細(xì)胞丟失:支原體的污染會導(dǎo)致嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失以及研究時間損失 07/ 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不可靠性 08/ 生物安全問題 細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的后果?杭州細(xì)胞支原...
LAMP法,即環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法(Loop-mediated isothermal amplification),在支原體檢測中的應(yīng)用具有以下特點(diǎn)和應(yīng)用場景: 1. 日常監(jiān)測:由于LAMP法的快速和簡便性,它適用于生物實(shí)驗(yàn)室的日常監(jiān)測,可以及時檢測出支原體的存在,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。 2. 疾病診斷:LAMP法已被成功應(yīng)用于SARS、禽流感、HIV等疾病的檢測中,并在2009年甲型H1N1流感事件中發(fā)揮了重要作用。 3. 臨床應(yīng)用:LAMP法在臨床樣本的檢測中顯示出了快速、高靈敏度和穩(wěn)定性,可以用于檢測實(shí)驗(yàn)室樣本及臨床樣本中的支原體。 4. 多病原體檢...
支原體污染一旦發(fā)生,不僅對細(xì)胞培養(yǎng)造成嚴(yán)重影響,甚至可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果失真。而且支原體污染在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中相當(dāng)常見。因此,預(yù)防措施是確保細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性的重要手段。 01/ 良好的無菌技術(shù)及實(shí)驗(yàn)操作,保證操作不會引入新的污染 02/ 保持實(shí)驗(yàn)空間的清潔 03/ 確保從可靠的來源獲取細(xì)胞,減少不同細(xì)胞之間的交叉?zhèn)魅? 04/ 防止交叉污染 05/ 減少氣溶膠生成 06/ 謹(jǐn)慎使用抗*素 07/ 定期支原體篩查 08/ 丟棄或處理受到支原體污染的細(xì)胞 09/ 保持良好的記錄 支原體檢測方法LAMP法?廣州細(xì)胞培養(yǎng)...
支原體的預(yù)防可通過以下方式: 1. 控制污染源:通過定期檢測和去除細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染,確保細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)無支原體存在,從而獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 2. 改善無菌操作技術(shù):通過提高實(shí)驗(yàn)人員的操作技術(shù)和意識,避免在細(xì)胞培養(yǎng)過程中引入支原體污染。 3. 使用無菌設(shè)備和耗材:使用無菌的細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材,如無菌培養(yǎng)基、血清等,減少支原體污染的風(fēng)險。 4. 定期消毒和清潔:對實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行定期的消毒和清潔,包括工作臺、培養(yǎng)箱等,以減少支原體的潛在污染。 5. 使用預(yù)防性試劑:使用專門針對支原體的預(yù)防性試劑,如加入細(xì)胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預(yù)防和細(xì)胞培...
一步法支原體檢測試劑盒的防污染版本通常采用等溫擴(kuò)增技術(shù),如LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification)原理,通過支原體特異性引物在恒溫條件下對樣本進(jìn)行檢測,終通過顏色變化確定樣品中是否含有支原體污染。這種方法的優(yōu)勢在于: 1. 快速檢測:可以在較短的時間內(nèi)完成檢測,通常在60分鐘以內(nèi)。 2. 高靈敏度和特異性:等溫擴(kuò)增技術(shù)可以檢測到非常低濃度的支原體DNA。 3. 操作簡便:不需要復(fù)雜的設(shè)備,如PCR儀或電泳設(shè)備,只需水浴鍋即可完成擴(kuò)增反應(yīng)。 4. 減少污染風(fēng)險:由于無需開蓋電泳,可以減少因氣溶膠造成的交叉污染。 ...
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體難以徹底消滅的原因主要包括以下幾點(diǎn): 1. 無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu):支原體是沒有細(xì)胞壁的微生物,這使得許多作用于細(xì)胞壁的抗*素對支原體無效。 2. 微小體積:支原體體積小,能夠穿過常規(guī)的除菌濾膜,例如0.20微米甚至0.10微米的濾膜。 3. 隱匿性:支原體污染初期很難被察覺,它們在普通光學(xué)顯微鏡下幾乎不可見,因此細(xì)胞被支原體污染后,前期很難被發(fā)現(xiàn)。 4. 傳播途徑多樣:支原體可以通過細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)胞懸液、細(xì)胞培養(yǎng)用具等途徑迅速傳播。 5. 污染源 :支原體污染源包括細(xì)胞間的交叉污染、操作人員的口腔、皮膚,以及細(xì)胞培養(yǎng)用的組分如血清、培養(yǎng)液等。...
支原體預(yù)防的主要成分通常是指用于預(yù)防支原體污染的抗*素或化學(xué)試劑。在細(xì)胞培養(yǎng)中,預(yù)防支原體污染的措施包括在培養(yǎng)基中添加抗*素,以及采取其他預(yù)防措施來保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的清潔和無菌操作。以下是一些用于預(yù)防支原體污染的主要成分: 1. 四環(huán)素類抗*素:這類抗*素對支原體具有抑制作用,常用于治*和預(yù)防支原體感*。 2. 大環(huán)內(nèi)酯類抗*素:例如羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素等,用于治*肺炎支原體感*。 3. 喹諾酮類藥物:如氧氟沙星、司帕沙星等,也用于治*肺炎支原體感*。 4. 其他抗*素:例如氨基糖苷類、氯霉素等,對支原體有較小的抑制作用。 細(xì)胞培養(yǎng)為什么建議使用支原...
支原體檢測的應(yīng)用場景非常廣*,以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域: 1. 細(xì)胞培養(yǎng):在實(shí)驗(yàn)室和生物制品工廠中,細(xì)胞培養(yǎng)過程容易受到支原體污染。支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞功能改變,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果和生物制品的質(zhì)量。因此,支原體檢測在細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量控制中至關(guān)重要??蒲兄谐S玫葴財U(kuò)增的方法簡單便捷。 2. 生物制品生產(chǎn):在生物制品的生產(chǎn)過程中,如疫苗、生物藥物等,需要確保產(chǎn)品無支原體污染,以保證其安全性和有效性。監(jiān)管機(jī)構(gòu)要求在生產(chǎn)的關(guān)鍵階段進(jìn)行支原體檢測。通常采用qPCR的方式進(jìn)行。 細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的后果?杭州支原體去除多少錢 支原體預(yù)防的主要成分通常是指用于預(yù)防支原體污染的抗*素或化學(xué)試劑...
支原體預(yù)防的實(shí)驗(yàn)步驟主要包括以下幾個方面: 1. 無菌操作技術(shù):在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程,包括穿戴適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)服、手套,使用無菌工具和耗材。 2. 環(huán)境控制:保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境清潔,定期消毒工作臺和實(shí)驗(yàn)室表面,使用層流罩或生物安全柜進(jìn)行細(xì)胞操作。 3. 細(xì)胞培養(yǎng)基和試劑的無菌過濾:所有加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中的試劑和補(bǔ)充物,如血清、抗*素等,都應(yīng)通過無菌過濾以去除支原體。 4. 細(xì)胞培養(yǎng)基和試劑的檢測:在添加到細(xì)胞培養(yǎng)物之前,對新的細(xì)胞培養(yǎng)基和試劑進(jìn)行支原體檢測,以確保它們沒有被污染。 5. 定期檢測:即使采取了預(yù)防措施,也應(yīng)定期對細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行支...
支原體污染和黑膠蟲污染是兩種不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)污染,它們具有各自的特點(diǎn)和區(qū)別: 支原體污染:在相差顯微鏡下,支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。 黑膠蟲污染:在高倍鏡下,被黑膠蟲污染的細(xì)胞膜會變得模糊不清,邊界不清晰,有粗糙感。 污染的影響: 支原體污染:可能導(dǎo)致細(xì)胞增殖緩慢,甚至從培養(yǎng)器皿脫落,影響細(xì)胞的DNA、RNA及蛋白表達(dá)。 黑膠蟲污染:與細(xì)胞競爭性生長,開始時對細(xì)胞沒有什么影響,但當(dāng)數(shù)量多時,細(xì)胞生長會受到影響直至死亡。 污染的來源: 支原體污染:可能來源于工作環(huán)境的污染、操作者本身、培養(yǎng)基的...