支原體去除的實(shí)驗(yàn)步驟通常包括以下幾個(gè)階段:
1. 支原體檢測(cè):在進(jìn)行去除之前,首先要確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)物是否受到支原體污染。這可以通過(guò)多種方法實(shí)現(xiàn),如PCR法、LAMP法或支原體培養(yǎng)法。
2. 選擇合適的去除試劑:一旦確認(rèn)存在支原體污染,需要選擇一種有效的去除試劑。
3. 去除試劑的添加:根據(jù)去除試劑的說(shuō)明書,將試劑添加到受污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中。通常,這涉及到將一定比例的去除試劑加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中。
4. 孵育:添加去除試劑后,將細(xì)胞培養(yǎng)物放回培養(yǎng)箱中孵育。孵育時(shí)間和條件(如溫度、CO2濃度)應(yīng)根據(jù)試劑的推薦進(jìn)行調(diào)整。
5. 監(jiān)測(cè)去除效果:在孵育過(guò)程中,定期監(jiān)測(cè)細(xì)胞的狀態(tài)和去除效果。這可能包括觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)速率的變化,以及通過(guò)顯微鏡檢查是否有支原體存在的跡象。
6. 后續(xù)檢測(cè):去除過(guò)程完成后,再次使用支原體檢測(cè)方法確認(rèn)污染是否已被成功。
一步法快速支原體檢測(cè)的原理?蘇州支原體預(yù)防試劑價(jià)格
支原體檢測(cè)的應(yīng)用場(chǎng)景非常廣*,以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域:
1. 細(xì)胞培養(yǎng):在實(shí)驗(yàn)室和生物制品工廠中,細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程容易受到支原體污染。支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞功能改變,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果和生物制品的質(zhì)量。因此,支原體檢測(cè)在細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量控制中至關(guān)重要??蒲兄谐S玫葴?cái)U(kuò)增的方法簡(jiǎn)單便捷。
2. 生物制品生產(chǎn):在生物制品的生產(chǎn)過(guò)程中,如疫苗、生物藥物等,需要確保產(chǎn)品無(wú)支原體污染,以保證其安全性和有效性。監(jiān)管機(jī)構(gòu)要求在生產(chǎn)的關(guān)鍵階段進(jìn)行支原體檢測(cè)。通常采用qPCR的方式進(jìn)行。
深圳細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)方法恒溫?cái)U(kuò)增支原體檢測(cè)方法qPCR法?
qPCR法,即定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(QuantitativePolymeraseChainReaction)法,在支原體檢測(cè)中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:
1. 快速定性檢測(cè):qPCR法可以快速檢測(cè)生產(chǎn)原料、細(xì)胞庫(kù)、病毒種子、病毒或細(xì)胞收獲液、治*用細(xì)胞中潛在的支原體污染。
2. 臨床樣本檢測(cè):qPCR法可用于檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室樣本及臨床樣本中的支原體,具有快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。
3. 監(jiān)管要求:基于TaqMan的qPCR測(cè)定專門針對(duì)檢測(cè)細(xì)胞治*和復(fù)雜生物生產(chǎn)樣本中的支原體而開發(fā),其性能滿足或超出監(jiān)管要求,如10CFU/mL。
4. 藥物質(zhì)量控制:qPCR法提供早期檢測(cè)支原體污染的方法,適用于藥物質(zhì)量控制,具有快速、高度特異性、靈敏性,并符合國(guó)際準(zhǔn)則。
細(xì)胞培養(yǎng)中如果污染了支原體,會(huì)有以下幾種影響:
1. 細(xì)胞生長(zhǎng)受影響:支原體污染會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢,甚至停止生長(zhǎng)。細(xì)胞可能會(huì)變圓,從培養(yǎng)瓶壁脫落。
2. 細(xì)胞形態(tài)變化:雖然某些細(xì)胞在支原體污染后形態(tài)變化不明顯,但有些細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)體積增大,細(xì)胞碎片增多,培養(yǎng)瓶中細(xì)胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積等現(xiàn)象。
3. 代謝和功能改變:支原體污染會(huì)影響細(xì)胞的代謝和功能,例如培養(yǎng)液中的精氨酸被大量消耗,引起細(xì)胞蛋白質(zhì)、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙。支原體活動(dòng)還可能引起培養(yǎng)液成分和pH值的變化。
4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果受影響:使用被支原體污染的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,因?yàn)橹гw會(huì)抑制細(xì)胞生長(zhǎng),導(dǎo)致染色體畸變,細(xì)胞膜抗原性改變,細(xì)胞復(fù)蘇后存活率降低等。
5. 細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的污染:一株污染的細(xì)胞可能成為實(shí)驗(yàn)室的污染源,對(duì)工作區(qū)域以及培養(yǎng)箱和液氮罐造成污染,進(jìn)而污染其他細(xì)胞,導(dǎo)致其他細(xì)胞繼發(fā)性污染。
6. 科研結(jié)果的重復(fù)性問(wèn)題:由于支原體污染,某些實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能能在支原體陽(yáng)性的細(xì)胞中得到,導(dǎo)致科研結(jié)果的重復(fù)性受到影響
什么樣的客戶需要定期檢測(cè)支原體污染?
細(xì)胞被支原體污染后可能會(huì)出現(xiàn)以下幾種情況:
1. 生長(zhǎng)速度變慢:支原體污染的細(xì)胞生長(zhǎng)速度可能會(huì)減慢,甚至停止生長(zhǎng)。
2. 形態(tài)改變:部分細(xì)胞可能會(huì)變圓,從培養(yǎng)瓶壁脫落。有些細(xì)胞在支原體污染后,形態(tài)變化可能不明顯,但有些細(xì)胞可能會(huì)出現(xiàn)體積增大、細(xì)胞碎片增多等現(xiàn)象。
3. 培養(yǎng)液pH變化:支原體污染的細(xì)胞可能導(dǎo)致培養(yǎng)液pH值變化明顯,更換培養(yǎng)液后幾小時(shí)內(nèi)變酸(顏色變黃)。
4. 細(xì)胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積:在某些情況下,細(xì)胞與細(xì)胞間隙可能出現(xiàn)膜狀沉積,影響細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和傳代。
5. 細(xì)胞功能受損:支原體污染可能會(huì)影響細(xì)胞的代謝和功能,如影響細(xì)胞蛋白質(zhì)、DNA、RNA的合成。
6. 染色體畸變:支原體污染可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞染色體斷裂、數(shù)目減少,出現(xiàn)雙著絲點(diǎn)染色體、環(huán)狀染色體等異常。
7. 免疫細(xì)胞產(chǎn)量受影響:對(duì)于巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞的培養(yǎng),支原體污染可能會(huì)抑制干擾素的合成和降低其活性。
8. 細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的污染:污染的細(xì)胞可能成為實(shí)驗(yàn)室的污染源,影響工作區(qū)域、培養(yǎng)箱和液氮罐等。
9. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不確定性:使用被支原體污染的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)可能會(huì)得到不準(zhǔn)確的結(jié)果,影響科研的可靠性。
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細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中支原體污染怎么預(yù)防?蘇州支原體預(yù)防試劑價(jià)格
細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體檢測(cè)的重要性體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:
1. 高污染發(fā)生率:支原體對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率非常高,據(jù)估計(jì)平均發(fā)生率在60%左右。
3. 隱匿性強(qiáng):支原體污染具有很高的隱匿性,早期不容易被發(fā)現(xiàn),除非使用特異性和靈敏度都非常高的專業(yè)檢測(cè)試劑盒。
3. 影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果:支原體污染會(huì)改變細(xì)胞的生理性質(zhì),影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。細(xì)胞培養(yǎng)物一旦被支原體污染,會(huì)改變細(xì)胞DNA、RNA及蛋白表達(dá),導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確、不穩(wěn)定。
4. 難以通過(guò)肉眼或常規(guī)方法發(fā)現(xiàn):支原體污染無(wú)法通過(guò)肉眼檢查細(xì)胞來(lái)發(fā)現(xiàn),也不能通過(guò)向培養(yǎng)基中加入抗*素控制。
5. 對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)可靠性的影響:支原體污染會(huì)降低細(xì)胞系的有效性,使得細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)失去可靠性,無(wú)法為生命科學(xué)研究提供有意義的數(shù)據(jù)。
6. 預(yù)防和控制污染的必要性:定期進(jìn)行支原體檢測(cè)是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行自我質(zhì)量監(jiān)控的必要組成部分,有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)并控制污染,保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。
7. 避免細(xì)胞株受損:支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞株受損,影響細(xì)胞株的質(zhì)量和研究?jī)r(jià)值。及時(shí)檢測(cè)和清*支原體污染有助于保護(hù)珍貴的細(xì)胞資源
蘇州支原體預(yù)防試劑價(jià)格
世途科生物簡(jiǎn)介:
上海世途科生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售于一體的,為全球用戶提供生物試劑的生命科學(xué)企業(yè)。世途科生物(CYTOCH)匯集了一支由海內(nèi)外KOL組成的研發(fā)團(tuán)隊(duì),他們?cè)谏锖突瘜W(xué)領(lǐng)域擁有相當(dāng)豐富的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),通過(guò)將化學(xué)與生物技術(shù)相結(jié)合,致力于現(xiàn)有技術(shù)難點(diǎn)突破、新技術(shù)研究,為相關(guān)科學(xué)研究者提供思路和解決辦法。
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