支原體去除和支原體預(yù)防是兩種不同的策略,它們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)和生物制品生產(chǎn)中都非常重要。
支原體去除是指在細(xì)胞已經(jīng)被支原體污染后采取的措施。這通常涉及到使用特定的抗*素或化學(xué)試劑來(lái)消滅或抑制支原體的生長(zhǎng)。例如,根據(jù)的描述,支原體去除試劑是一種混合抗*素制劑,它含有三種對(duì)支原體具有抑菌作用的組分,可以取得良好的支原體清*效果。使用這種方法時(shí),細(xì)胞需要在含有去除試劑的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間,然后更換培養(yǎng)基并檢測(cè)支原體是否已被清*。
支原體預(yù)防則是指在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中采取的預(yù)防措施,以避免支原體污染的發(fā)生。這包括保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的清潔、使用無(wú)菌技術(shù)、對(duì)所有培養(yǎng)基和器材進(jìn)行適當(dāng)?shù)南咎幚淼?。根?jù)的背景介紹,預(yù)防措施還包括對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)層流柜保持整潔,避免在無(wú)蓋器皿上方舞動(dòng)手掌和手臂,以及立即清理溢出物等。這些措施有助于減少支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。
支原體檢測(cè)方法qPCR法?廣州細(xì)胞培養(yǎng)支原體去除現(xiàn)貨
支原體污染和黑膠蟲污染是兩種不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)污染,它們具有各自的特點(diǎn)和區(qū)別:
支原體污染:在相差顯微鏡下,支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。
黑膠蟲污染:在高倍鏡下,被黑膠蟲污染的細(xì)胞膜會(huì)變得模糊不清,邊界不清晰,有粗糙感。
污染的影響:
支原體污染:可能導(dǎo)致細(xì)胞增殖緩慢,甚至從培養(yǎng)器皿脫落,影響細(xì)胞的DNA、RNA及蛋白表達(dá)。
黑膠蟲污染:與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng),開始時(shí)對(duì)細(xì)胞沒(méi)有什么影響,但當(dāng)數(shù)量多時(shí),細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)受到影響直至死亡。
污染的來(lái)源:
支原體污染:可能來(lái)源于工作環(huán)境的污染、操作者本身、培養(yǎng)基的污染、交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染以及用來(lái)制備細(xì)胞的原始組織或部位的污染。
黑膠蟲污染:可能來(lái)源于細(xì)胞本身的污染或從動(dòng)物取材時(shí)的污染,也可能通過(guò)培養(yǎng)箱空氣進(jìn)行污染。
杭州細(xì)胞支原體檢測(cè)試劑支原體去除的原理是什么?
目前有 210 +種不同種類的支原體分布于人類、動(dòng)物、昆蟲和植物中,其中 20 +種在細(xì)胞培養(yǎng)中被發(fā)現(xiàn)為污染物。支原體在實(shí)驗(yàn)室中的傳播來(lái)源多種多樣,主要來(lái)源包括實(shí)驗(yàn)室人員、胎牛血清(FBS)或新生牛血清(NBS)、以及由豬來(lái)源的胰蛋白酶溶液。此外,來(lái)自其他實(shí)驗(yàn)室或商業(yè)供應(yīng)商的細(xì)胞培養(yǎng)物、培養(yǎng)基、污染的試劑;非無(wú)菌供應(yīng)品、培養(yǎng)基和溶液;實(shí)驗(yàn)室人員;培養(yǎng)箱;液氮;空氣顆粒和氣溶膠;抗*素的過(guò)度使用;細(xì)胞培養(yǎng)器皿的不正確密封;以及其他的支原體細(xì)胞培養(yǎng)物等都可能成為支原體的傳播途徑。
檢測(cè)新鮮培養(yǎng)基是否有支原體污染,可以采用以下五種方案:
1. 培養(yǎng)法:這是一種傳統(tǒng)且可靠的方法,通過(guò)將培養(yǎng)基接種到適宜支原體生長(zhǎng)的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上,觀察是否有支原體生長(zhǎng)。這種方法較為耗時(shí),但成本較低。
2. 熒光染色法:使用特定的熒光染料(如Hoechst 33258)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色,然后在熒光顯微鏡下觀察。如果存在支原體污染,可以看到細(xì)胞表面或細(xì)胞間隙中支原體DNA的熒光染色。
3. PCR法:通過(guò)設(shè)計(jì)針對(duì)支原體特定序列的引物,利用PCR技術(shù)特異性擴(kuò)增目標(biāo)DNA。PCR產(chǎn)物通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè),如果出現(xiàn)條帶則表明存在支原體污染。
4. 電鏡觀察法:使用電子顯微鏡直接觀察培養(yǎng)細(xì)胞中的支原體污染情況。這種方法可以提供直觀的支原體形態(tài)信息,但設(shè)備要求較高。
5. 一步法恒溫支原體檢測(cè):使用特定的試劑盒,如Yeasen一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑,采用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),通過(guò)顏色變化(由藍(lán)紫色變?yōu)樘焖{(lán)色)進(jìn)行快速檢測(cè)。
支原體去除之后對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染有無(wú)影響?
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生多方面的影響,具體包括:
1. 細(xì)胞生長(zhǎng)受影響:支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢,甚至停滯。
2. 細(xì)胞形態(tài)改變:支原體感*的細(xì)胞可能會(huì)出現(xiàn)形態(tài)的改變,如細(xì)胞體積增大、形態(tài)不規(guī)則等。
3. 細(xì)胞功能改變:支原體污染會(huì)影響細(xì)胞的代謝、增殖、分化等生理功能。
4. 細(xì)胞產(chǎn)物改變:支原體感*可能影響細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子等生物活性物質(zhì)的表達(dá)和分泌。
5. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確:支原體污染會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不可靠。
6. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差:支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)批次間差異大,影響實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。
7. 影響后續(xù)實(shí)驗(yàn):支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),如轉(zhuǎn)染、基因編輯等,可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)效果。
8. 影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量:支原體污染會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量,如疫苗、生物制品等。
9. 增加研究成本:支原體污染需要花費(fèi)額外的時(shí)間和成本進(jìn)行檢測(cè)、處理和重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
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細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的后果?廣州細(xì)胞培養(yǎng)支原體去除現(xiàn)貨
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的檢測(cè)方法有多種,以下是一些常用的檢測(cè)手段:
1. 顯微鏡檢測(cè):通過(guò)相差顯微鏡觀察細(xì)胞,支原體在細(xì)胞表面和細(xì)胞之間會(huì)呈現(xiàn)為暗色微小顆粒。
2. 熒光染色法:使用熒光染料Hoechst 33258與DNA特異性結(jié)合,使支原體的DNA著色,然后在熒光顯微鏡下觀察。染色后的支原體會(huì)在細(xì)胞周圍或附于細(xì)胞膜表面顯示為亮綠色小點(diǎn)。
3. 電鏡檢查:使用掃描電鏡或透射電鏡觀察,這是一種簡(jiǎn)便快速的方法。
4. 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR):使用特定的引物對(duì)支原體DNA進(jìn)行擴(kuò)增,是一種高靈敏度的檢測(cè)方法。
5. 等溫?cái)U(kuò)增法:基于LAMP技術(shù),室溫反應(yīng)后觀察顏色變化確認(rèn)是否有支原體污染。
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