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蘇州RIP免疫沉淀技術(shù)服務(wù)

來源： 發(fā)布時(shí)間：2024-06-29

RIP實(shí)驗(yàn)步驟通常包括：
1. 細(xì)胞收集與交聯(lián)：培養(yǎng)細(xì)胞至適當(dāng)密度。使用交聯(lián)劑（如甲醛）進(jìn)行交聯(lián)，以固定蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。
2. 細(xì)胞裂解：收集細(xì)胞并進(jìn)行裂解，釋放RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物。在裂解過程中添加蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)降解。
3. 超聲處理：使用超聲波破壞細(xì)胞，獲得更小的染色質(zhì)片段，這有助于后續(xù)步驟中抗體的接觸。
4. 除去細(xì)胞碎片：通過離心去除細(xì)胞碎片和未裂解的細(xì)胞，收集含RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物的上清液。
5. 免疫沉淀：將針對特定RNA結(jié)合蛋白（RBP）的抗體加入到上清液中。孵育一段時(shí)間，使抗體與目標(biāo)蛋白充分結(jié)合。
6. 捕獲免疫復(fù)合物：添加蛋白A或蛋白G結(jié)合的磁珠或瓊脂糖珠。孵育使抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物與珠子結(jié)合。
7. 洗滌：多次洗滌珠子以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和RNA。
8. 洗脫與逆轉(zhuǎn)交聯(lián)：使用適當(dāng)?shù)木彌_液洗脫免疫復(fù)合物。使用蛋白酶K處理樣品以逆轉(zhuǎn)交聯(lián)，釋放RNA。
9. RNA提取與純化：從免疫沉淀樣品中提取RNA，并進(jìn)行純化。
10. RNA分析：使用qPCR、Northern blot、RNA-Seq等方法分析沉淀的RNA，以確定與目標(biāo)蛋白相互作用的RNA種類。
免疫沉淀ChIP技術(shù)選瓊脂糖珠還是磁珠？蘇州RIP免疫沉淀技術(shù)服務(wù)

蘇州RIP免疫沉淀技術(shù)服務(wù),免疫沉淀

    免疫沉淀（immunoprecipitation）是指利用抗體可與抗原特異性結(jié)合的特性，將抗原（常為靶蛋白）從混合體系沉淀下來，初步分離靶蛋白的一種方法。免疫共沉淀（coimmunoprecipitation）是一種在體外探測兩個(gè)蛋白分子間是否存在特異性相互作用的一種方法。其原理非常簡單，如果兩個(gè)蛋白在體外體系能夠發(fā)生特異性相互作用的話，那么當(dāng)用一種蛋白的抗體進(jìn)行免疫沉淀時(shí)，另一個(gè)蛋白也會(huì)被同時(shí)沉淀下來。與酵母雙雜交技術(shù)不同，免疫共沉淀技術(shù)所利用的是抗原和抗體間的免疫反應(yīng)，是一種基于體外非細(xì)胞的環(huán)境中研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用的方法。 南京Protein AG免疫沉淀磁珠原理免疫沉淀技術(shù)RIP的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

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Co-IP（免疫共沉淀）技術(shù)主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用，其應(yīng)用場景如下：
1. 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的鑒定：Co-IP可用于構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的結(jié)合伙伴。
2. 信號傳導(dǎo)途徑的研究：通過Co-IP技術(shù)，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)了許多關(guān)鍵的細(xì)胞信號通路，如MAPK和PI3K/Akt通路等，為深入理解這些通路的功能和調(diào)控機(jī)制提供了重要線索。
3. 藥物靶點(diǎn)篩選：利用Co-IP技術(shù)，研究人員可以篩選潛在的藥物靶點(diǎn)。
疾病機(jī)制研究：通過分析疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的相互作用，Co-IP有助于揭示疾病的分子機(jī)制。
4. 抗體藥物開發(fā)：Co-IP可用于研究抗體藥物與其靶標(biāo)蛋白的結(jié)合特性，評估抗體藥物的親和力和特異性。
5. 轉(zhuǎn)錄因子研究：Co-IP技術(shù)可以用于研究轉(zhuǎn)錄因子與蛋白質(zhì)的相互作用，進(jìn)而揭示基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。

免疫沉淀技術(shù)RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）是一種用于研究細(xì)胞內(nèi)RNA與蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)。RIP技術(shù)可以幫助我們了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的動(dòng)態(tài)過程，并發(fā)現(xiàn)miRNA等非編碼RNA的調(diào)節(jié)靶點(diǎn)。
RIP技術(shù)的原理是利用針對特定RNA結(jié)合蛋白的抗體，將細(xì)胞內(nèi)的RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物沉淀下來。然后，可以通過分離純化，對這些復(fù)合物中的RNA進(jìn)行檢測，如qPCR驗(yàn)證或測序分析。
表觀遺傳學(xué)和RNA生物學(xué)領(lǐng)域?qū)Σ煌琑NA作用和功能的關(guān)注增加。RNA-蛋白質(zhì)相互作用能夠調(diào)控mRNA和非編碼RNA的功能。對RNA潛能的這一新認(rèn)識(shí)帶動(dòng)了新方法的發(fā)展，使研究人員能夠定位 RNA-蛋白質(zhì)相互作用。
免疫沉淀技術(shù)ChIP的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

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免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用和蛋白質(zhì)特性的重要方法。它具有一些明顯的優(yōu)點(diǎn)，但也存在一些局限性。
優(yōu)點(diǎn):
1. 特異性強(qiáng)：IP技術(shù)利用特異性抗體對目標(biāo)蛋白進(jìn)行捕獲，因此具有很高的特異性。
2. 富集低豐度蛋白：可以從小量樣本中富集低豐度的目標(biāo)蛋白，有助于研究稀有蛋白。
3. 研究蛋白質(zhì)相互作用：通過Co-IP等變體技術(shù)，可以研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。
4. 操作簡便：IP實(shí)驗(yàn)步驟相對簡單，容易在實(shí)驗(yàn)室中實(shí)施。

缺點(diǎn):
1. 對抗體質(zhì)量依賴性高：需要高質(zhì)量的特異性抗體，否則可能導(dǎo)致假陽性或?qū)嶒?yàn)失敗。
2. 存在非特異性結(jié)合：樣本中的其他蛋白質(zhì)可能非特異性地結(jié)合到抗體或固相載體上。
3. 可能破壞蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象：裂解和洗滌步驟可能破壞蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)，影響其功能。
4. 可能存在背景噪聲：非特異性結(jié)合可能導(dǎo)致背景噪聲，影響結(jié)果的清晰度和解釋。

免疫沉淀技術(shù)Co-IP的實(shí)驗(yàn)方法。蘇州RIP免疫沉淀技術(shù)服務(wù)

免疫沉淀技術(shù)是什么？蘇州RIP免疫沉淀技術(shù)服務(wù)

免疫沉淀ChIP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu)  (直徑 50-150 μm)  可以結(jié)合抗體  (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。
簡而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng)，而磁珠在得率，可重復(fù)性以及自動(dòng)化方面有明顯的優(yōu)勢。
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標(biāo)簽： 支原體 免疫沉淀