免疫沉淀技術(shù)RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)的實驗方法基于以下幾個關(guān)鍵步驟:
1. 細(xì)胞裂解:首先,細(xì)胞或組織樣本被裂解,以釋放細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和RNA復(fù)合物。
2.抗體特異性結(jié)合:裂解后的樣本中加入針對特定RNA結(jié)合蛋白的抗體。這些抗體能夠特異性地識別并結(jié)合到目標(biāo)蛋白。
3. 免疫復(fù)合物形成:抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合后,形成抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。
4. 親和介質(zhì)捕獲:使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子(如瓊脂糖或磁性珠子)來捕獲這些抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結(jié)合,從而拉下與之結(jié)合的復(fù)合物。
5. 洗滌:捕獲的復(fù)合物被洗滌以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和RNA。
6. RNA分離和分析:從珠子上洗脫或消化復(fù)合物,分離出RNA,并進行進一步的分析,如qPCR、Northern blot或高通量測序(RNA-Seq)。
免疫沉淀技術(shù)ChIP的優(yōu)缺點是什么?上海RIP免疫沉淀磁珠多少錢
免疫沉淀實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ,它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體,而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu),這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸,具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同,磁珠是固體,抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ,盡管磁珠沒有多孔中心增加結(jié)合能力,但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多,使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。
簡而言之,瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強,而磁珠在得率,可重復(fù)性以及自動化方面有明顯的優(yōu)勢。
北京ChIP免疫沉淀磁珠哪個公司好用免疫沉淀技術(shù)RIP的應(yīng)用有哪些?
免疫沉淀(Co-IP)實驗中抗體的選擇非常關(guān)鍵,因為抗體的特異性和親和力直接影響到實驗的成功與否。
1. 特異性:抗體應(yīng)當(dāng)對目標(biāo)蛋白具有高度的特異性,以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合,導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
2. 親和力:抗體對目標(biāo)蛋白的親和力要足夠高,以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標(biāo)蛋白。
3. 抗體類型:單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于IP實驗。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性,而多克隆抗體可能提供更強的結(jié)合能力和更廣的表位覆蓋。
4. 應(yīng)用驗證:選擇已經(jīng)過免疫沉淀(Co-IP)或相關(guān)應(yīng)用(如Western blot, IHC)驗證的抗體,這增加了實驗成功的可能性。
5. 供應(yīng)商信息:選擇信譽良好的抗體供應(yīng)商,并查看供應(yīng)商提供的技術(shù)數(shù)據(jù)和客戶評價,以幫助做出決策。
免疫沉淀RIP實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ,它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體,而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu),這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸,具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同,磁珠是固體,抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ,盡管磁珠沒有多孔中心增加結(jié)合能力,但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多,使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。
簡而言之,瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強,而磁珠在得率,可重復(fù)性以及自動化方面有明顯的優(yōu)勢。
免疫沉淀技術(shù)IP是什么?
免疫沉淀(RIP)實驗中抗體的選擇非常關(guān)鍵,因為抗體的特異性和親和力直接影響到實驗的成功與否。
1. 特異性:抗體應(yīng)當(dāng)對目標(biāo)蛋白具有高度的特異性,以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合,導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
2. 親和力:抗體對目標(biāo)蛋白的親和力要足夠高,以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標(biāo)蛋白。
3. 抗體類型:單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于IP實驗。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性,而多克隆抗體可能提供更強的結(jié)合能力和更廣的表位覆蓋。
4. 應(yīng)用驗證:選擇已經(jīng)過免疫沉淀(RIP)或相關(guān)應(yīng)用(如Western blot, IHC)驗證的抗體,這增加了實驗成功的可能性。
5. 供應(yīng)商信息:選擇信譽良好的抗體供應(yīng)商,并查看供應(yīng)商提供的技術(shù)數(shù)據(jù)和客戶評價,以幫助做出決策。
免疫沉淀和免疫共沉淀的區(qū)別?廣州RIP免疫沉淀實驗視頻
免疫沉淀技術(shù)的實驗方法。上海RIP免疫沉淀磁珠多少錢
免疫沉淀Co-IP實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ,它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體,而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu),這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸,具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同,磁珠是固體,抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ,盡管磁珠沒有多孔中心增加結(jié)合能力,但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多,使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。
簡而言之,瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強,而磁珠在得率,可重復(fù)性以及自動化方面有明顯的優(yōu)勢。
上海RIP免疫沉淀磁珠多少錢