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北京細胞培養(yǎng)支原體檢測說明書

來源： 發(fā)布時間：2024-07-16

細胞培養(yǎng)中支原體污染會對實驗結(jié)果產(chǎn)生多方面的影響，具體包括：
1. 細胞生長受影響：支原體污染可能導致細胞生長速度減慢，甚至停滯。
2. 細胞形態(tài)改變：支原體感*的細胞可能會出現(xiàn)形態(tài)的改變，如細胞體積增大、形態(tài)不規(guī)則等。
3. 細胞功能改變：支原體污染會影響細胞的代謝、增殖、分化等生理功能。
4. 細胞產(chǎn)物改變：支原體感*可能影響細胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)、細胞因子等生物活性物質(zhì)的表達和分泌。
5. 實驗結(jié)果不準確：支原體污染會干擾實驗結(jié)果的準確性，導致實驗數(shù)據(jù)不可靠。
6. 實驗重復性差：支原體污染的細胞培養(yǎng)批次間差異大，影響實驗的重復性。
7. 影響后續(xù)實驗：支原體污染的細胞培養(yǎng)產(chǎn)物用于后續(xù)實驗，如轉(zhuǎn)染、基因編輯等，可能會影響實驗效果。
8. 影響細胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量：支原體污染會影響細胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量，如疫苗、生物制品等。
9. 增加研究成本：支原體污染需要花費額外的時間和成本進行檢測、處理和重復實驗。
細胞培養(yǎng)為什么建議使用支原體檢測？北京細胞培養(yǎng)支原體檢測說明書

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細胞培養(yǎng)過程中如果發(fā)現(xiàn)支原體污染，可以采取以下一些方法嘗試去除污染：

1. 抗*素治*：使用針對支原體有效的抗*素，如四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氟喹諾酮類等。根據(jù)搜索結(jié)果，可以加入高濃度抗*素進行沖擊治*，例如慶大霉素 200ug/ml，四環(huán)素10ug/ml，卡那霉素50ug/ml，并維持24-48小時后再換入常規(guī)培養(yǎng)液。
2. 加溫處理：支原體不耐熱，可以將細胞置于41°C中處理5-10小時以殺滅支原體。但需注意，高溫也可能對細胞造成傷害，因此需要預先確定對細胞影響較小的處理時間。
3. 使用支原體清除劑：市場上有專門的支原體清除劑，按照產(chǎn)品說明使用。
4. 使用支原體清*培養(yǎng)基：如Procell支原體清*培養(yǎng)基，這類產(chǎn)品含有清*支原體的特殊成分，可以抑制支原體生長并挽救珍貴細胞。
5. 物理方法：一些實驗室采用過濾的方法，使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾培養(yǎng)基和試劑，以阻止支原體的侵入。
6. 細胞傳代：在一些情況下，通過細胞傳代可能有助于減少支原體的污染程度。
北京細胞培養(yǎng)支原體檢測說明書支原體去除之后對細胞檢測有無影響？

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支原體檢測的應用場景非常廣*，以下是一些主要的應用領域：
1. 細胞培養(yǎng)：在實驗室和生物制品工廠中，細胞培養(yǎng)過程容易受到支原體污染。支原體污染可能導致細胞功能改變，影響實驗結(jié)果和生物制品的質(zhì)量。因此，支原體檢測在細胞培養(yǎng)的質(zhì)量控制中至關重要?？蒲兄谐Ｓ玫葴財U增的方法簡單便捷。
2. 生物制品生產(chǎn)：在生物制品的生產(chǎn)過程中，如疫苗、生物藥物等，需要確保產(chǎn)品無支原體污染，以保證其安全性和有效性。監(jiān)管機構(gòu)要求在生產(chǎn)的關鍵階段進行支原體檢測。通常采用qPCR的方式進行。

一步法支原體檢測試劑盒的防污染版本通常采用等溫擴增技術，如LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）原理，通過支原體特異性引物在恒溫條件下對樣本進行檢測，終通過顏色變化確定樣品中是否含有支原體污染。這種方法的優(yōu)勢在于：
1. 快速檢測：可以在較短的時間內(nèi)完成檢測，通常在60分鐘以內(nèi)。
2. 高靈敏度和特異性：等溫擴增技術可以檢測到非常低濃度的支原體DNA。
3. 操作簡便：不需要復雜的設備，如PCR儀或電泳設備，只需水浴鍋即可完成擴增反應。
4. 減少污染風險：由于無需開蓋電泳，可以減少因氣溶膠造成的交叉污染。
此外，試劑盒還包含UNG（Uracil-N-Glycosylase）酶，用于防止PCR過程中的污染，UNG酶可以消化反應液中可能存在的尿嘧啶，從而減少因污染導致的假陽性結(jié)果。
支原體污染之后是直接丟棄還是重新培養(yǎng)？

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細胞培養(yǎng)中支原體污染的檢測方法有多種，以下是一些常用的檢測手段：

1. 顯微鏡檢測：通過相差顯微鏡觀察細胞，支原體在細胞表面和細胞之間會呈現(xiàn)為暗色微小顆粒。
2. 熒光染色法：使用熒光染料Hoechst 33258與DNA特異性結(jié)合，使支原體的DNA著色，然后在熒光顯微鏡下觀察。染色后的支原體會在細胞周圍或附于細胞膜表面顯示為亮綠色小點。
3. 電鏡檢查：使用掃描電鏡或透射電鏡觀察，這是一種簡便快速的方法。
4. 聚合酶鏈反應（PCR）：使用特定的引物對支原體DNA進行擴增，是一種高靈敏度的檢測方法。
5. 等溫擴增法：基于LAMP技術，室溫反應后觀察顏色變化確認是否有支原體污染。
一步法快速支原體檢測的原理？杭州細胞培養(yǎng)支原體污染檢測試劑

支原體污染的來源有哪些？北京細胞培養(yǎng)支原體檢測說明書

支原體檢測的樣本既可以是細胞，也可以是培養(yǎng)基。在細胞培養(yǎng)中，支原體污染是常見的問題，因此需要對細胞和培養(yǎng)基進行檢測。細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床用細胞等都需要進行支原體檢查，這通常包括培養(yǎng)法和指示細胞培養(yǎng)法（DNA染色法）。同時，病毒類疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養(yǎng)法檢查支原體，必要時，也可以采用指示細胞培養(yǎng)法篩選培養(yǎng)基。
此外，支原體檢測的培養(yǎng)基推薦使用支原體肉湯培養(yǎng)基和精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等，這些培養(yǎng)基可用于檢測藥品和生物制品中的支原體。在進行支原體檢測時，需要取培養(yǎng)物樣品接種到適宜支原體生長的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上。
因此，支原體檢測的樣本既可以是細胞，也可以是培養(yǎng)基，具體取決于檢測的目的和方法。
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