支原體污染的來源主要包括以下幾個(gè)方面:
1. 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中可能存在支原體污染源,如空氣中的塵埃、其他培養(yǎng)物中的支原體污染等。
2. 實(shí)驗(yàn)操作人員的手部、衣物或皮膚表面可能攜帶支原體,造成細(xì)胞培養(yǎng)的污染。
3. 培養(yǎng)基、血清等培養(yǎng)材料如果受到支原體污染,也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)物受到污染。
4. 細(xì)胞交叉污染,即使用已受污染的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)時(shí),可能會(huì)污染其他細(xì)胞。
5. 實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染,如未徹底消毒滅菌的實(shí)驗(yàn)器材。
6. 人體是某些支原體的正常菌群,因此操作人員的疏失也可能成為污染源。
7. 細(xì)胞庫管理不善,造成實(shí)驗(yàn)室間的相互污染。
8. 細(xì)胞培養(yǎng)過程中的細(xì)菌、酵母或霉菌污染在光學(xué)顯微鏡下可見,但支原體污染在光學(xué)顯微鏡下通常不可見,必須通過特定的檢測方法進(jìn)行檢測
支原體預(yù)防主要是什么成分?深圳細(xì)胞培養(yǎng)支原體去除試劑
支原體去除試劑使用后,對支原體的檢測可能會(huì)有影響。一些支原體去除試劑通過特異性地與支原體膜結(jié)合、改變支原體膜的通透性來殺死支原體,而對真核細(xì)胞幾乎沒有影響。然而,某些情況下,去除試劑可能會(huì)對細(xì)胞的活力和形態(tài)產(chǎn)生一定的影響,尤其是在去除劑作用期間。此外,如果去除劑的效果不徹底,可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞再次被支原體污染。
需要注意的是,某些支原體去除試劑可能會(huì)在去除支原體的過程中導(dǎo)致支原體膜溶解,從而釋放出支原體的DNA,這可能會(huì)在隨后的支原體核酸檢測中引起假陽性結(jié)果。因此,在去除支原體后,建議在繼續(xù)正常傳代培養(yǎng)幾代細(xì)胞后再進(jìn)行支原體檢測,以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
杭州支原體檢測方法細(xì)胞被支原體污染了會(huì)有什么影響?
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體難以徹底消滅的原因主要包括以下幾點(diǎn):
1. 無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu):支原體是沒有細(xì)胞壁的微生物,這使得許多作用于細(xì)胞壁的抗*素對支原體無效。
2. 微小體積:支原體體積小,能夠穿過常規(guī)的除菌濾膜,例如0.20微米甚至0.10微米的濾膜。
3. 隱匿性:支原體污染初期很難被察覺,它們在普通光學(xué)顯微鏡下幾乎不可見,因此細(xì)胞被支原體污染后,前期很難被發(fā)現(xiàn)。
4. 傳播途徑多樣:支原體可以通過細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)胞懸液、細(xì)胞培養(yǎng)用具等途徑迅速傳播。
5. 污染源 :支原體污染源包括細(xì)胞間的交叉污染、操作人員的口腔、皮膚,以及細(xì)胞培養(yǎng)用的組分如血清、培養(yǎng)液等。
6. 環(huán)境因素:實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、試驗(yàn)臺(tái)、超凈臺(tái)、培養(yǎng)箱等可能被支原體污染,引起細(xì)胞的污染。
7. 抗*素耐藥性:支原體可能對某些抗*素產(chǎn)生耐藥性,使得治*效果變差。
8. 檢測和清理方法的局限性:一些傳統(tǒng)的支原體檢測和清理方法可能不夠靈敏或有效,導(dǎo)致難以徹底清理支原體
支原體是細(xì)胞外生存的 小微生物,是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物,大小一般在0.2~0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲形、分枝狀等多種態(tài)。
1、支原體存在于我們周圍,他可能就如塵埃一樣存在于我們的環(huán)境中
2、可透過一般的濾膜,所以不要寄希望于過濾可以清楚支原體污染的液體
支原體對培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率高,據(jù)估計(jì)平均發(fā)生率在60%左右。同時(shí)又非常隱秘,早期不容易被發(fā)現(xiàn),除非用特異性和靈敏度都非常高的檢測試劑盒。支原體因?yàn)閭€(gè)頭小,能穿過0.22微米濾器,并且在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)會(huì)潛在的擴(kuò)散。支原體污染使得用被污染的細(xì)胞樣本做的實(shí)驗(yàn)完全失去意義和價(jià)值。
對于同一個(gè)樣品,為什么PCR結(jié)果為陽性,而一步法恒溫檢測試劑盒結(jié)果為陰性?
需要定期檢測支原體污染的客戶主要包括以下幾類:
1. 生物醫(yī)藥企業(yè):生產(chǎn)涉及細(xì)胞培養(yǎng)的生物制品的公司,包括疫苗、生物藥物、基因產(chǎn)品等。
2. 細(xì)胞公司:進(jìn)行細(xì)胞產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)的企業(yè),需要確保所用細(xì)胞的安全性和有效性。
3. 科研機(jī)構(gòu):從事細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)等研究的學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu),需要保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4. 臨床單位:使用細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行的醫(yī)院或診所,需要確保用細(xì)胞的質(zhì)量。
5. 細(xì)胞庫:保存和供應(yīng)細(xì)胞株的細(xì)胞庫,需要對細(xì)胞資源進(jìn)行定期檢測以保證其無污染。
6. 生物技術(shù)公司:提供生物技術(shù)服務(wù)的公司,如細(xì)胞培養(yǎng)、基因編輯等,需要確保服務(wù)過程中細(xì)胞的質(zhì)量。
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支原體檢測實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)方法需要考慮以下幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn):
1. 選擇合適的檢測方法:根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件和需求,選擇適合的支原體檢測方法,如培養(yǎng)法、PCR法、ELISA法、DNA熒光染色法等。
2. 樣本的采集與處理:確保樣本的采集和處理過程符合無菌操作規(guī)范,避免交叉污染。
3. 實(shí)驗(yàn)操作的標(biāo)準(zhǔn)化:制定詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)操作流程,包括樣本接種、培養(yǎng)條件、觀察時(shí)間點(diǎn)等,以保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性。
4. 使用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基:根據(jù)支原體的特性選擇合適的培養(yǎng)基,如支原體肉湯培養(yǎng)基、精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等,并確保培養(yǎng)基的靈敏度和特異性。
5. 設(shè)置對照組:實(shí)驗(yàn)中應(yīng)包括陽性對照和陰性對照,以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法的有效性和排除假陽性或假陰性結(jié)果。
6. 結(jié)果的判定:根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法的不同,設(shè)定明確的標(biāo)準(zhǔn)來判定結(jié)果,如培養(yǎng)法中觀察“荷包蛋”狀菌落,PCR法中通過擴(kuò)增條帶的有無來判斷。
7. 避免抑制物質(zhì)的影響:在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中考慮可能存在的抑制物質(zhì),并采取適當(dāng)措施中和或抵消它們的作用。
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