支原體預(yù)防的策略主要包括以下幾個(gè)方面:
1. 控制污染源:通過(guò)定期檢測(cè)和去除細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染,確保細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)無(wú)支原體存在,從而獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
2. 改善無(wú)菌操作技術(shù):通過(guò)提高實(shí)驗(yàn)人員的操作技術(shù)和意識(shí),避免在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中引入支原體污染。
3.使用無(wú)菌設(shè)備和耗材:使用無(wú)菌的細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材,如無(wú)菌培養(yǎng)基、血清等,減少支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。
4. 定期消毒和清潔:對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行定期的消毒和清潔,包括工作臺(tái)、培養(yǎng)箱等,以減少支原體的潛在污染。
5. 使用預(yù)防性試劑:使用專門針對(duì)支原體的預(yù)防性試劑,如加入細(xì)胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑、超凈臺(tái)噴霧、水浴鍋預(yù)防和細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤預(yù)防等,以預(yù)防支原體污染。
支原體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的方法?廣州支原體預(yù)防價(jià)格
細(xì)胞培養(yǎng)中,需要去除支原體的污染:支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中 普遍的問(wèn)題之一,細(xì)胞庫(kù)中或正在使用的細(xì)胞中,支原體的污染率約為15%-35%。并對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的生理和代謝造成諸多影響:
01/ 爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng) – 阻礙細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖
02/ 改變蛋白質(zhì)、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改變基因表達(dá)、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和形態(tài)
04/ 損害膜和細(xì)胞器
05/ 導(dǎo)致突變和染色體變化
06/ 時(shí)間、金錢和有價(jià)值的細(xì)胞丟失,耽誤研究時(shí)間
07/ 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不可靠性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性 降低
08/ 生物安全問(wèn)題
上海支原體檢測(cè)要多久細(xì)胞庫(kù)支原體檢測(cè)的必要性?
qPCR法,即定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(QuantitativePolymeraseChainReaction)法,在支原體檢測(cè)中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:
1. 快速定性檢測(cè):qPCR法可以快速檢測(cè)生產(chǎn)原料、細(xì)胞庫(kù)、病毒種子、病毒或細(xì)胞收獲液、治*用細(xì)胞中潛在的支原體污染。
2. 臨床樣本檢測(cè):qPCR法可用于檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室樣本及臨床樣本中的支原體,具有快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。
3. 監(jiān)管要求:基于TaqMan的qPCR測(cè)定專門針對(duì)檢測(cè)細(xì)胞治*和復(fù)雜生物生產(chǎn)樣本中的支原體而開(kāi)發(fā),其性能滿足或超出監(jiān)管要求,如10CFU/mL。
4. 藥物質(zhì)量控制:qPCR法提供早期檢測(cè)支原體污染的方法,適用于藥物質(zhì)量控制,具有快速、高度特異性、靈敏性,并符合國(guó)際準(zhǔn)則。
支原體去除后對(duì)細(xì)胞檢測(cè)的影響主要取決于去除方法和去除后的處理。以下是一些可能的影響:
1. 去除方法的影響:不同的支原體去除方法可能對(duì)細(xì)胞檢測(cè)產(chǎn)生不同的影響。例如,一些去除方法可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的代謝和增殖產(chǎn)生暫時(shí)性的影響,這可能會(huì)影響某些類型的細(xì)胞檢測(cè)。
2. 去除后的處理:去除支原體后,細(xì)胞可能需要一段時(shí)間來(lái)恢復(fù)其正常的生理狀態(tài)。在這段時(shí)間內(nèi),細(xì)胞的某些特性可能與去除前不同,這可能會(huì)影響細(xì)胞檢測(cè)的結(jié)果。
3. 細(xì)胞恢復(fù)情況:如果細(xì)胞在去除支原體后能夠成功恢復(fù),那么它們?cè)跈z測(cè)中的表現(xiàn)可能會(huì)與未受污染的細(xì)胞相似。然而,如果細(xì)胞恢復(fù)不完全,可能會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4. 檢測(cè)類型的相關(guān)性:不同的細(xì)胞檢測(cè)方法對(duì)細(xì)胞狀態(tài)的敏感性不同。一些檢測(cè)可能對(duì)細(xì)胞的微小變化非常敏感,而其他檢測(cè)則可能較為寬容。
支原體去除之后對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染有無(wú)影響?
支原體預(yù)防的主要成分通常是指用于預(yù)防支原體污染的抗*素或化學(xué)試劑。在細(xì)胞培養(yǎng)中,預(yù)防支原體污染的措施包括在培養(yǎng)基中添加抗*素,以及采取其他預(yù)防措施來(lái)保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的清潔和無(wú)菌操作。以下是一些用于預(yù)防支原體污染的主要成分:
1. 四環(huán)素類抗*素:這類抗*素對(duì)支原體具有抑制作用,常用于治*和預(yù)防支原體感*。
2. 大環(huán)內(nèi)酯類抗*素:例如羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素等,用于治*肺炎支原體感*。
3. 喹諾酮類藥物:如氧氟沙星、司帕沙星等,也用于治*肺炎支原體感*。
4. 其他抗*素:例如氨基糖苷類、氯霉素等,對(duì)支原體有較小的抑制作用。
支原體去除和支原體預(yù)防有什么區(qū)別?支原體檢測(cè)方法恒溫?cái)U(kuò)增
支原體污染的來(lái)源有哪些?廣州支原體預(yù)防價(jià)格
支原體檢測(cè)中的PCR法和LAMP方法各有其優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì),以下是兩種方法的比較:
PCR法
優(yōu)勢(shì):
1.高靈敏度:PCR法可以擴(kuò)增支原體DNA,具有很高的靈敏度。
2.操作簡(jiǎn)便:PCR操作相對(duì)簡(jiǎn)單,結(jié)果準(zhǔn)確,速度快,通常3個(gè)小時(shí)左右即可得到結(jié)果。
3.可靠性:PCR法已成為日常細(xì)胞培養(yǎng)維護(hù)的可靠方法,是細(xì)胞樣本庫(kù)保護(hù)細(xì)胞的方法。
劣勢(shì):
1. 樣品量需求:相對(duì)于某些快速檢測(cè)方法,PCR可能需要較多的樣品量。
2. 檢測(cè)周期:盡管PCR法相對(duì)快速,但在某些情況下,檢測(cè)周期可能較長(zhǎng)。
LAMP法
優(yōu)勢(shì):
1. 設(shè)備簡(jiǎn)單:只需要一個(gè)穩(wěn)定的恒溫環(huán)境,如恒溫水浴或熱擬溫器,不需要復(fù)雜的溫度控制設(shè)備。
2. 高特異性:LAMP技術(shù)采用多個(gè)特異性引物,提供了較高的特異性。
3. 結(jié)果可視化:LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物可形成肉眼觀察的顏色產(chǎn)物,有助于直接觀察擴(kuò)增結(jié)果。
劣勢(shì):
1. 引物設(shè)計(jì)復(fù)雜:需要設(shè)計(jì)多個(gè)引物,包括外部引物、內(nèi)部引物和環(huán)引物,引物設(shè)計(jì)較為復(fù)雜。
2. 避免污染:由于沒(méi)有封閉系統(tǒng),避免污染造成的假陽(yáng)性是一個(gè)問(wèn)題。
廣州支原體預(yù)防價(jià)格