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來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-08-09

免疫沉淀是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法??贵w與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后,再與蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶聯(lián)的珠子(agarose或Sepharose)孵育,通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復(fù)合物,沉淀經(jīng)過洗滌后,重懸于電泳上樣緩沖液,煮沸5-10min,在高溫及還原劑的作用下,抗原與抗體解離,離心收集上清,上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。免疫沉淀是一種生物學(xué)技術(shù),它利用抗體的特異性結(jié)合特性來(lái)富集和分離混合物中的特定蛋白質(zhì)。這種技術(shù)是研究蛋白質(zhì)表達(dá)、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)修飾和蛋白質(zhì)功能的強(qiáng)大工具。免疫沉淀技術(shù)Co-IP的原理是什么?南京ChIP免疫沉淀磁珠多少錢

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胞內(nèi)的移動(dòng)軌跡,并分析與之相互作用的伴侶分子,從而揭示蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制和調(diào)控因素。對(duì)于膜蛋白的研究,免疫沉淀面臨著特殊的挑戰(zhàn),但也帶來(lái)了獨(dú)特的解決方案。膜蛋白由于其特殊的結(jié)構(gòu)和環(huán)境,難以直接進(jìn)行研究。然而,通過巧妙設(shè)計(jì)的免疫沉淀實(shí)驗(yàn),結(jié)合去垢劑處理和特殊的緩沖條件,可以有效地沉淀膜蛋白,并研究其與胞質(zhì)蛋白的相互作用,為理解膜蛋白的功能和信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制提供了有力手段。此外,免疫沉淀在研究蛋白質(zhì)的同源或異源多聚體形成方面具有重要價(jià)值。許多蛋白質(zhì)通過形成多聚體來(lái)發(fā)揮功能,通過免疫沉淀特定的單體蛋白,可以同時(shí)沉淀與其結(jié)合的其他同源或異源亞基,進(jìn)而解析多聚體的組成和結(jié)構(gòu),為深入理解蛋白質(zhì)的協(xié)同作用和功能調(diào)節(jié)提供直接證據(jù)。蘇州RIP免疫沉淀實(shí)驗(yàn)視頻免疫沉淀IP抗體的選擇?

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免疫沉淀實(shí)驗(yàn)步驟:
1. 樣品制備
a. 懸浮細(xì)胞樣品處理:離心收集細(xì)胞(4℃, 1000g, 5 min),用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液(裂解液應(yīng)在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑Cocktail,使蛋白酶抑制劑Cocktail的終濃度為1×)?;靹蚝笾糜诒咸幚?0 min;離心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上備用(或置于-20℃長(zhǎng)期保存)。
b. 貼壁細(xì)胞樣品處理:移去培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞兩遍;用細(xì)胞刮棒刮脫細(xì)胞,收集至1.5mL EP管內(nèi),按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液(裂解液應(yīng)在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑Cocktail,使蛋白酶抑制劑Cocktail的終濃度為1×)。吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。混勻后置于冰上處理10 min;離心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上備用(或置于-20℃長(zhǎng)期保存)。
4. 后續(xù):磁珠預(yù)處理——抗體吸附——抗原結(jié)合反應(yīng)——抗體洗脫

免疫沉淀技術(shù)作為現(xiàn)物學(xué)研究中的重要工具,為揭示細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜的生物分子相互作用提供了關(guān)鍵的方法。該技術(shù)的重點(diǎn)原理是基于抗原與抗體的特異性結(jié)合。通過使用特異性的抗體,能夠從細(xì)胞裂解液或復(fù)雜的生物樣本中捕獲目標(biāo)蛋白質(zhì)及其與之相互作用的分子復(fù)合物。這種特異性的捕獲使得我們能夠分離和研究那些在細(xì)胞內(nèi)原本難以捉摸的蛋白質(zhì)相互作用。在研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用方面,免疫沉淀技術(shù)發(fā)揮著不可替代的作用。它可以幫助確定在特定生理或病理?xiàng)l件下,哪些蛋白質(zhì)會(huì)形成復(fù)合物共同發(fā)揮功能。這對(duì)于理解細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、基因表達(dá)調(diào)控以及疾病的發(fā)生機(jī)制具有重要意義。此外,免疫沉淀技術(shù)還能夠用于研究蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,如磷酸化、甲基化等。通過特異性抗體識(shí)別修飾后的蛋白質(zhì),進(jìn)而分析其修飾狀態(tài)和相關(guān)的相互作用,為深入探究蛋白質(zhì)的功能調(diào)控提供了有力的支持。免疫沉淀技術(shù)Co-IP的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

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免疫沉淀技術(shù)在探索蛋白質(zhì)的功能方面猶如一把精密的鑰匙,為我們開啟了深入理解生命奧秘的大門。蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的主要執(zhí)行者,其功能的實(shí)現(xiàn)往往依賴于與其他分子的相互作用。免疫沉淀技術(shù)能夠特異性地捕獲目標(biāo)蛋白質(zhì)及其相關(guān)復(fù)合物,從而為研究蛋白質(zhì)的功能提供直接的證據(jù)。通過對(duì)免疫沉淀得到的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析,可以了解蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的定位、修飾狀態(tài)以及與其他蛋白質(zhì)或核酸的結(jié)合情況。例如,若要研究某一特定轉(zhuǎn)錄因子的功能,可以利用針對(duì)該轉(zhuǎn)錄因子的抗體進(jìn)行免疫沉淀,然后檢測(cè)與其結(jié)合的DNA片段,從而確定其調(diào)控的靶基因。此外,免疫沉淀技術(shù)還可用于研究蛋白質(zhì)在不同生理或病理?xiàng)l件下的變化。比較正常細(xì)胞和病變細(xì)胞中特定蛋白質(zhì)的免疫沉淀結(jié)果,能夠發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)相互作用的差異,進(jìn)而揭示疾病發(fā)生的分子機(jī)制。在藥物研發(fā)中,免疫沉淀技術(shù)也發(fā)揮著重要作用。它可以幫助篩選與藥物靶點(diǎn)相互作用的蛋白質(zhì),為藥物的設(shè)計(jì)和優(yōu)化提供有價(jià)值的信息。免疫沉淀技術(shù)IP的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。南京ChIP免疫沉淀磁珠多少錢

免疫沉淀技術(shù)的實(shí)驗(yàn)方法。南京ChIP免疫沉淀磁珠多少錢

免疫沉淀技術(shù)(Immunoprecipitation, IP)是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)復(fù)合物組成以及特定蛋白質(zhì)的表達(dá)和純化的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
基本原理
免疫沉淀技術(shù)基于抗體與特定蛋白質(zhì)(抗原)之間的特異性相互作用。通過使用針對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)的特異性抗體,可以從含有多種蛋白質(zhì)的復(fù)雜樣本中捕獲并富集目標(biāo)蛋白質(zhì)。
免疫沉淀技術(shù)有多種類型,包括:
1. 個(gè)別免疫沉淀法(Individual IP)
2. 免疫共沉淀法(Co-IP)
3. 染色質(zhì)免疫沉淀法(ChIP)
4. RNA免疫沉淀法(RIP)
近年來(lái),免疫沉淀技術(shù)在固相支持物的選擇上有了很大進(jìn)步。磁性微珠因其操作簡(jiǎn)便、快速和自動(dòng)化程度高而逐漸取代了傳統(tǒng)的瓊脂糖樹脂。
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標(biāo)簽: 支原體 免疫沉淀