支原體去除的原理通常涉及以下幾個(gè)方面:
1. 抗*素作用:使用特定的抗*素制劑來(lái)抑制支原體的生長(zhǎng)和繁殖。例如,含有喹諾酮類(lèi)、四環(huán)素衍生物類(lèi)和大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗*素的混合制劑,這些抗*素能夠抑制支原體的DNA和蛋白合成。
2. 破壞細(xì)胞膜:支原體去除劑中的抑菌肽(AMPs)成分通過(guò)破壞支原體細(xì)胞膜的完整性,導(dǎo)致支原體細(xì)胞死亡。
3. 抑制DNA復(fù)制:支原體去除劑通過(guò)抑制支原體DNA回旋酶活性,有效抑制支原體DNA的復(fù)制,從遺傳物質(zhì)著手徹底殺滅支原體。
4. 協(xié)同作用:某些支原體去除劑利用抑菌肽(AMPs)和穿膜肽(CPPs)的協(xié)同作用來(lái)除去支原體,穿膜肽能夠幫助抑菌肽更有效地穿透細(xì)胞膜,增強(qiáng)其殺滅支原體的能力。
支原體檢測(cè)PCR法和LAMP方法的優(yōu)劣勢(shì)比較。深圳細(xì)胞培養(yǎng)支原體預(yù)防試劑多少錢(qián)
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中如果發(fā)現(xiàn)支原體污染,可以采取以下一些方法嘗試去除污染:
1. 抗*素治*:使用針對(duì)支原體有效的抗*素,如四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)等。根據(jù)搜索結(jié)果,可以加入高濃度抗*素進(jìn)行沖擊治*,例如慶大霉素 200ug/ml,四環(huán)素10ug/ml,卡那霉素50ug/ml,并維持24-48小時(shí)后再換入常規(guī)培養(yǎng)液。
2. 加溫處理:支原體不耐熱,可以將細(xì)胞置于41°C中處理5-10小時(shí)以殺滅支原體。但需注意,高溫也可能對(duì)細(xì)胞造成傷害,因此需要預(yù)先確定對(duì)細(xì)胞影響較小的處理時(shí)間。
3. 使用支原體清除劑:市場(chǎng)上有專(zhuān)門(mén)的支原體清除劑,按照產(chǎn)品說(shuō)明使用。
4. 使用支原體清*培養(yǎng)基:如Procell支原體清*培養(yǎng)基,這類(lèi)產(chǎn)品含有清*支原體的特殊成分,可以抑制支原體生長(zhǎng)并挽救珍貴細(xì)胞。
5. 物理方法:一些實(shí)驗(yàn)室采用過(guò)濾的方法,使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過(guò)濾培養(yǎng)基和試劑,以阻止支原體的侵入。
6. 細(xì)胞傳代:在一些情況下,通過(guò)細(xì)胞傳代可能有助于減少支原體的污染程度。
北京細(xì)胞支原體檢測(cè)要多久細(xì)胞培養(yǎng)中污染了支原體會(huì)怎么樣?
支原體污染和黑膠蟲(chóng)污染是兩種不同類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)污染,它們具有各自的特點(diǎn)和區(qū)別:
支原體污染:在相差顯微鏡下,支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。
黑膠蟲(chóng)污染:在高倍鏡下,被黑膠蟲(chóng)污染的細(xì)胞膜會(huì)變得模糊不清,邊界不清晰,有粗糙感。
污染的影響:
支原體污染:可能導(dǎo)致細(xì)胞增殖緩慢,甚至從培養(yǎng)器皿脫落,影響細(xì)胞的DNA、RNA及蛋白表達(dá)。
黑膠蟲(chóng)污染:與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng),開(kāi)始時(shí)對(duì)細(xì)胞沒(méi)有什么影響,但當(dāng)數(shù)量多時(shí),細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)受到影響直至死亡。
污染的來(lái)源:
支原體污染:可能來(lái)源于工作環(huán)境的污染、操作者本身、培養(yǎng)基的污染、交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染以及用來(lái)制備細(xì)胞的原始組織或部位的污染。
黑膠蟲(chóng)污染:可能來(lái)源于細(xì)胞本身的污染或從動(dòng)物取材時(shí)的污染,也可能通過(guò)培養(yǎng)箱空氣進(jìn)行污染。
細(xì)胞庫(kù)支原體檢測(cè)的必要性主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:
1. 確保細(xì)胞庫(kù)的質(zhì)量與安全性:細(xì)胞庫(kù)的建立需要為生物制品的生產(chǎn)提供檢定合格、質(zhì)量相同、能持續(xù)穩(wěn)定傳代的細(xì)胞。支原體檢測(cè)是確保細(xì)胞庫(kù)中細(xì)胞質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。
2. 符合監(jiān)管要求:支原體檢測(cè)是生物制品安全性監(jiān)管的一部分,全球范圍內(nèi)的藥典、法規(guī)和指導(dǎo)文件中都有支原體檢測(cè)的相關(guān)說(shuō)明。
3. 避免對(duì)生物制品的影響:支原體污染可能會(huì)影響生物制品的安全性和有效性,因此需要通過(guò)檢測(cè)來(lái)避免這種風(fēng)險(xiǎn)。
4. 維護(hù)細(xì)胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性:支原體是真核細(xì)胞和干細(xì)胞培養(yǎng)中最常見(jiàn)的問(wèn)題之一,它們可以改變細(xì)胞的代謝、減緩增殖速度,甚至引起染色體畸變。
5. 預(yù)防交叉污染:由于支原體可以通過(guò)氣溶膠和微粒污染實(shí)驗(yàn)室其他區(qū)域,支原體檢測(cè)有助于預(yù)防交叉污染的發(fā)生。
6. 保障數(shù)據(jù)的可靠性:支原體污染可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,因此定期進(jìn)行支原體檢測(cè)有助于保障研究數(shù)據(jù)的可靠性。
7. 常規(guī)監(jiān)測(cè)的重要性:支原體應(yīng)成為細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目,以確保細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量和安全。
8. 遵守藥典規(guī)定:根據(jù)中國(guó)藥典的規(guī)定,每8~12代細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)進(jìn)行支原體檢查,以符合規(guī)定。
對(duì)于同一個(gè)樣品,為什么PCR結(jié)果為陽(yáng)性,而一步法恒溫檢測(cè)試劑盒結(jié)果為陰性?
支原體污染的來(lái)源主要包括以下幾個(gè)方面:
1. 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中可能存在支原體污染源,如空氣中的塵埃、其他培養(yǎng)物中的支原體污染等。
2. 實(shí)驗(yàn)操作人員的手部、衣物或皮膚表面可能攜帶支原體,造成細(xì)胞培養(yǎng)的污染。
3. 培養(yǎng)基、血清等培養(yǎng)材料如果受到支原體污染,也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)物受到污染。
4. 細(xì)胞交叉污染,即使用已受污染的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)時(shí),可能會(huì)污染其他細(xì)胞。
5. 實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染,如未徹底消毒滅菌的實(shí)驗(yàn)器材。
6. 人體是某些支原體的正常菌群,因此操作人員的疏失也可能成為污染源。
7. 細(xì)胞庫(kù)管理不善,造成實(shí)驗(yàn)室間的相互污染。
8. 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的細(xì)菌、酵母或霉菌污染在光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn),但支原體污染在光學(xué)顯微鏡下通常不可見(jiàn),必須通過(guò)特定的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)
支原體污染的來(lái)源有哪些?上海細(xì)胞培養(yǎng)支原體去除試劑多少錢(qián)
支原體去除試劑使用之后,對(duì)支原體的檢測(cè)是否有影響?深圳細(xì)胞培養(yǎng)支原體預(yù)防試劑多少錢(qián)
一步法支原體檢測(cè)試劑盒的防污染版本通常采用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),如LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification)原理,通過(guò)支原體特異性引物在恒溫條件下對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè),終通過(guò)顏色變化確定樣品中是否含有支原體污染。這種方法的優(yōu)勢(shì)在于:
1. 快速檢測(cè):可以在較短的時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè),通常在60分鐘以?xún)?nèi)。
2. 高靈敏度和特異性:等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)可以檢測(cè)到非常低濃度的支原體DNA。
3. 操作簡(jiǎn)便:不需要復(fù)雜的設(shè)備,如PCR儀或電泳設(shè)備,只需水浴鍋即可完成擴(kuò)增反應(yīng)。
4. 減少污染風(fēng)險(xiǎn):由于無(wú)需開(kāi)蓋電泳,可以減少因氣溶膠造成的交叉污染。
此外,試劑盒還包含UNG(Uracil-N-Glycosylase)酶,用于防止PCR過(guò)程中的污染,UNG酶可以消化反應(yīng)液中可能存在的尿嘧啶,從而減少因污染導(dǎo)致的假陽(yáng)性結(jié)果。
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