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深圳細胞支原體檢測方法

來源： 發(fā)布時間：2024-08-22

在人體中，支原體可以引起多種疾病。例如，支原體肺炎就是一種較為常見的由支原體引發(fā)的疾病?；颊呖赡軙霈F(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、乏力等癥狀，嚴重影響生活質量和身體健康。支原體的傳播途徑也較為多樣。它可以通過空氣飛沫傳播，在人群密集的場所，如學校、辦公室等容易造成小規(guī)模的流行。此外，接觸被支原體污染的物品也可能導致。然而，支原體并非只有負面作用。在一些特定的環(huán)境中，支原體也可能與其他生物形成共生關系，發(fā)揮著積極的作用。例如，在一些土壤環(huán)境中，支原體可能參與有機物的分解和轉化，對生態(tài)系統(tǒng)的平衡起著一定的調節(jié)作用。對于支原體，我們既不能輕視它的危害，也不能忽視它在生態(tài)系統(tǒng)中的潛在價值。隨著科學技術的不斷進步，我們對支原體的認識也在逐漸深入。相信在未來，我們將能夠更好地應對支原體帶來的挑戰(zhàn)，同時也能更加充分地利用支原體的有益特性，為人類的健康和生態(tài)環(huán)境的穩(wěn)定做出更大的貢獻。支原體檢測PCR法和LAMP方法的優(yōu)劣勢比較。深圳細胞支原體檢測方法

深圳細胞支原體檢測方法,支原體

細胞培養(yǎng)中支原體污染的檢測方法有多種，以下是一些常用的檢測手段：

1. 顯微鏡檢測：通過相差顯微鏡觀察細胞，支原體在細胞表面和細胞之間會呈現(xiàn)為暗色微小顆粒。
2. 熒光染色法：使用熒光染料Hoechst 33258與DNA特異性結合，使支原體的DNA著色，然后在熒光顯微鏡下觀察。染色后的支原體會在細胞周圍或附于細胞膜表面顯示為亮綠色小點。
3. 電鏡檢查：使用掃描電鏡或透射電鏡觀察，這是一種簡便快速的方法。
4. 聚合酶鏈反應（PCR）：使用特定的引物對支原體DNA進行擴增，是一種高靈敏度的檢測方法。
5. 等溫擴增法：基于LAMP技術，室溫反應后觀察顏色變化確認是否有支原體污染。
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支原體污染和黑膠蟲污染是兩種不同類型的細胞培養(yǎng)污染，它們具有各自的特點和區(qū)別：
支原體污染：在相差顯微鏡下，支原體呈暗色微小顆粒位于細胞表面和細胞之間。
黑膠蟲污染：在高倍鏡下，被黑膠蟲污染的細胞膜會變得模糊不清，邊界不清晰，有粗糙感。

污染的影響：
支原體污染：可能導致細胞增殖緩慢，甚至從培養(yǎng)器皿脫落，影響細胞的DNA、RNA及蛋白表達。
黑膠蟲污染：與細胞競爭性生長，開始時對細胞沒有什么影響，但當數(shù)量多時，細胞生長會受到影響直至死亡。

污染的來源：
支原體污染：可能來源于工作環(huán)境的污染、操作者本身、培養(yǎng)基的污染、交叉污染、實驗器材帶來的污染以及用來制備細胞的原始組織或部位的污染。
黑膠蟲污染：可能來源于細胞本身的污染或從動物取材時的污染，也可能通過培養(yǎng)箱空氣進行污染。

巢式PCR法和一步法恒溫支原體檢測試劑盒各有優(yōu)缺點，具體哪個更好要根據(jù)實驗需求和條件來決定。
1. 巢式PCR法通過兩輪PCR擴增來提高檢測的特異性和靈敏度。它的優(yōu)點是：
2. 特異性強，可以減少假陽性結果。
3. 靈敏度高，可以檢測到很低數(shù)量的支原體。
4. 通過設計多對引物，可以覆蓋多種支原體種類。
不過巢式PCR法也存在一些缺點：
1. 操作復雜，需要兩輪PCR反應。
2. 容易受到PCR抑制物的影響，產生假陰性結果。
3. 反應后需要開蓋電泳檢測，增加了污染的風險。
而一步法恒溫支原體檢測試劑盒采用等溫擴增技術，具有以下優(yōu)點：
1. 操作簡便，只需一次反應即可完成檢測。
2. 靈敏度和特異性也很高，可檢出10個拷貝以上的支原體污染。
3. 反應后無需開蓋，減少了污染的風險。
但一步法試劑盒的缺點是：
1. 靈敏度雖高，但可能略低于巢式PCR法。
2. 價格可能比巢式PCR試劑盒要高。
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深圳細胞支原體檢測方法,支原體

方法

靈敏度

優(yōu)勢

劣勢

培養(yǎng)法

☆☆☆

ü 便捷

ü 便宜

ü 金標準

ü 費勞力

ü 耗時長

ü 需要特定的培養(yǎng)基

ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基

DNA染色

(DAPI or Hoescht)

☆

ü 迅速

ü 便捷

ü 便宜

ü 可能難以判讀結果

ü 無法鑒別支原體種屬

ü 可能假陽性可能性

間接染色

☆☆☆

ü 迅速

ü 便宜

ü 易檢測

ü 費時

ü 需要細胞系指示

ELISA

☆☆

ü 迅速

ü 客觀，易判讀結果

ü 可以鑒別支原體種屬

ü 受抗體限制

ü 價格高

免疫染色

☆☆

ü 迅速

ü 可檢測支原體種屬

ü 價格略高

ü 可檢測的支原體種屬有限

放射自顯影

☆☆

ü 迅速

ü 難以判讀結果

ü 無法鑒別支原體種屬

ü 費勞力

生物發(fā)光

☆☆

ü 迅速

ü 便捷

ü 便宜

ü 難以判讀結果

ü 無法鑒別支原體種屬

PCR

☆☆☆

ü 便宜

ü 迅速

ü 具有特異性

ü 可能假陽性可能性

ü 檢測特異性依賴引物特異性

ü 需要提取DNA

Real-Time PCR

☆☆☆

ü 便捷

ü 迅速

ü 具有特異性

ü 結果可靠

ü 高通量

ü 可能假陽性可能性

ü 檢測特異性依賴引物特異性

ü 需要提取DNA

LAMP

☆☆

ü 便捷

ü 無需DNA提取

ü *需10min左右的實驗操作時間

ü 具有特異性

ü 高通量

ü 可能假陽性可能性

ü 檢測特異性依賴引物特異性 細胞被支原體污染了會有什么影響？杭州支原體去除試劑價格

支原體檢測假陰性的原因？深圳細胞支原體檢測方法

其次，支原體可以改變細胞的代謝過程，影響細胞的功能表達。例如，它們可能干擾細胞的基因表達、蛋白質合成等重要生命活動，使實驗數(shù)據(jù)失去真實性。支原體污染細胞培養(yǎng)的途徑多種多樣?？赡苁怯捎趯嶒灢僮鞑划?，如使用了被污染的試劑、培養(yǎng)基或儀器設備；也可能是由于實驗室環(huán)境不潔凈，空氣中的支原體進入培養(yǎng)體系。此外，細胞株本身也可能攜帶支原體，在傳代培養(yǎng)過程中逐漸擴散。為了防止支原體污染細胞培養(yǎng)，科學家們采取了一系列嚴格的措施。深圳細胞支原體檢測方法