2018年CTL019的一項臨床試驗中，一名B-ALL病人在接受CAR-CD19zhiliao28天后即達(dá)到CR，卻在6個月后復(fù)發(fā)，PCR檢測沒有發(fā)現(xiàn)任何的RCL，結(jié)合持續(xù)性慢病毒插入位點的克隆豐度分析，研究者較終發(fā)現(xiàn)一個攜帶CAR插入位點的CAR-B細(xì)胞克隆。進(jìn)而發(fā)現(xiàn)這個B細(xì)胞是CAR-T生產(chǎn)過程中的一個CAR-B副產(chǎn)物，而CAR在該B細(xì)胞上的順式插入表達(dá)導(dǎo)致CAR靶標(biāo)表位屏蔽，導(dǎo)致該B細(xì)胞克隆的耐藥。這個案例也提示除去CAR-Tzhiliao方法本身的潛在風(fēng)險外，CAR-T在生產(chǎn)工藝也會產(chǎn)生二次成瘤的風(fēng)險。含有完整的外源DNA全部整合結(jié)構(gòu)、插入位點旁側(cè)序列和受體基因組在整合位點附近重排結(jié)構(gòu)的CCS reads。江蘇基因編輯整合位點報告

對確證性臨床試驗的療效和安全性要求:“繼續(xù)監(jiān)測安全性風(fēng)險，分析重要的已知和潛在的風(fēng)險信息，包括遲發(fā)性不良事件(如致瘤性)的發(fā)生率、 嚴(yán)重性和危險因素等，并有必要采取措施使風(fēng)險較小化。" 2021年2月發(fā)布的《基因修飾細(xì)胞zhiliao 產(chǎn)品非臨床研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》則明確將"插入突變風(fēng)險評估"作為非臨床安全性研究的內(nèi)容，并詳細(xì)規(guī)定關(guān)鍵風(fēng)險因素的評估要點?？梢娐《据d體整合位點檢測已經(jīng)成為細(xì)胞zhiliao 產(chǎn)品IND評審及臨床試驗安全性評估的必檢內(nèi)容。蘇州AAV整合位點報告通過分選CAR-T 細(xì)胞,對T細(xì)胞受體(TCR)β鏈庫進(jìn)行深度測序(TCR-seq)以及慢病毒載體整合位點(LVIS)分析。

不同基因zhiliao產(chǎn)品的特殊考慮1.關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產(chǎn)品，例如轉(zhuǎn)座子元件、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒及其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉(zhuǎn)座子的載體在體外修飾的細(xì)胞，長期隨訪中需格外關(guān)注基因zhiliao產(chǎn)品的基因組整合風(fēng)險，建議申辦方分析基因zhiliao載體在靶細(xì)胞或相關(guān)替代細(xì)胞的基因組中整合的影響（例如是否存在克隆性生長、是否存在優(yōu)勢克隆、克隆性生長是否導(dǎo)致惡性liu等）。如果基因組整合相關(guān)風(fēng)險的分析可行。

基因編輯產(chǎn)品建議觀察15年或至數(shù)據(jù)表明不再存在任何風(fēng)險。?腺相關(guān)病毒載體建議觀察5年或至數(shù)據(jù)表明不再存在任何風(fēng)險。以上長期隨訪時間的建議主要基于基因zhiliao的產(chǎn)品類型，具體產(chǎn)品的隨訪時間取決于產(chǎn)品的特性和體內(nèi)存在時間、轉(zhuǎn)基因表達(dá)時間、遲發(fā)性不良反應(yīng)的預(yù)期時間及發(fā)生率、受試者適應(yīng)癥和預(yù)期生存期、給藥途徑、以及長期隨訪的其他觀察目的。隨著隨訪數(shù)據(jù)的積累，研究者和研究申辦方可能會根據(jù)產(chǎn)品的存在情況、轉(zhuǎn)基因表達(dá)和臨床表現(xiàn)的持續(xù)評估情況，延長或縮短長期隨訪的持續(xù)時間。如果研究申辦方認(rèn)為其基因zhiliao產(chǎn)品安全性風(fēng)險較低、無需開展長期隨訪臨床研究，或者希望變更隨訪時間，應(yīng)合理說明依據(jù)或變更理由并與藥品監(jiān)督管理部門進(jìn)行溝通。迎細(xì)胞基因浪潮,整合位點分析方法來助力。

給藥間隔，對于shou次在人體中開展臨床試驗（firstinhuman,FIH）的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，采用受試者間隔給藥的方式，可以避免多個受試者同時暴露而出現(xiàn)預(yù)期外的安全性風(fēng)險。在FIH試驗中，對首例患者應(yīng)加強(qiáng)不良事件監(jiān)測，還要考慮遲發(fā)性不良事件。向同一劑量組內(nèi)下一例受試者或下一個劑量組受試者給藥前，應(yīng)規(guī)定一定的隨訪間隔，以觀察急性和亞急性不良事件。間隔期的選擇一般基于非臨床研究中急性或亞急性毒性的發(fā)生情況，細(xì)胞在體內(nèi)的活性持續(xù)時間和/或既往類似產(chǎn)品在人體中的應(yīng)用經(jīng)驗。非病毒定點整合CAR-T技術(shù)的開發(fā)和應(yīng)用。江蘇基因編輯整合位點報告

整合位點技術(shù)，推薦唯可生物，實驗實力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。江蘇基因編輯整合位點報告

細(xì)胞和基因療法通常儲存在低溫至chaodi溫的溫度下。這些溫度使產(chǎn)品有更長的保質(zhì)期，同時保持比較大效力。管理這些敏感材料（包括存儲、運輸和跟蹤）需要強(qiáng)大且適應(yīng)性強(qiáng)的系統(tǒng)，以確保機(jī)構(gòu)審查所需的安全性、完整性和法規(guī)遵從性。在存儲和處理臨床階段樣品和材料時，它們的脆弱性怎么強(qiáng)調(diào)都不為過。從液氮冷凍箱中手動取出材料，會使目標(biāo)和非目標(biāo)材料迅速升溫，從而產(chǎn)生意想不到的后果。隨著時間的推移，反復(fù)暴露也會產(chǎn)生復(fù)合效應(yīng)。例如，如果將一盒樣品從 -180 ?C 移至環(huán)境條件，大約有90秒的時間，盒子中材料開始跨越玻璃轉(zhuǎn)化溫度，即到達(dá)發(fā)生降解的點。一些自動化低溫存儲設(shè)備被設(shè)計成在整個檢索過程中保持生物材料遠(yuǎn)低于其臨界溫度，降低了降解的風(fēng)險。江蘇基因編輯整合位點報告