通常不需要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的遺傳毒性組合試驗(yàn)，但應(yīng)根據(jù)基因zhiliao產(chǎn)品的特點(diǎn)、產(chǎn)品的具體適應(yīng)癥、載體的已有信息、導(dǎo)入基因序列結(jié)構(gòu)等，評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品整合進(jìn)基因組的可能性，判斷是否需要開展另外的遺傳毒性研究，如研究基因組修飾的發(fā)生情況，并檢測(cè)隨后可能發(fā)生的異常細(xì)胞行為；評(píng)估插入突變（插入位點(diǎn)、插入拷貝數(shù)等）引起的遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)基因zhiliao產(chǎn)品采用基因編輯或轉(zhuǎn)座子技術(shù)時(shí)，需要關(guān)注脫靶編輯、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座印跡引起的遺傳毒性問題；鑒定/表征基因組整合位點(diǎn)。如何檢測(cè)是否發(fā)生脫靶？北京種子基因脫靶檢測(cè)安全性評(píng)價(jià)

不同基因zhiliao產(chǎn)品的特殊考慮。關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產(chǎn)品，例如轉(zhuǎn)座子元件、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒及其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉(zhuǎn)座子的載體在體外修飾的細(xì)胞，長(zhǎng)期隨訪中需格外關(guān)注基因zhiliao產(chǎn)品的基因組整合風(fēng)險(xiǎn)，建議申辦方分析基因zhiliao載體在靶細(xì)胞或相關(guān)替代細(xì)胞的基因組中整合的影響（例如是否存在克隆性生長(zhǎng)、是否存在優(yōu)勢(shì)克隆、克隆性生長(zhǎng)是否導(dǎo)致惡性liu等）。如果基因組整合相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)的分析可行，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：?在接受基因zhiliao產(chǎn)品的較初5年內(nèi)，兩次檢測(cè)間的采樣間隔建議不超過6個(gè)月。此后每年至少檢測(cè)一次，直至檢測(cè)數(shù)據(jù)表明不再存在任何安全性風(fēng)險(xiǎn)。北京種子基因脫靶檢測(cè)安全性評(píng)價(jià)通過對(duì)DSB的標(biāo)記實(shí)現(xiàn)了全基因組無偏脫靶檢測(cè)，如IDLVs、BLESS、GUIDE-seq技術(shù)等。

對(duì)于CAR修飾的免疫細(xì)胞，應(yīng)采用多種體外方法評(píng)估其胞外抗原識(shí)別區(qū)的脫靶風(fēng)險(xiǎn)。TCR修飾免疫細(xì)胞的脫靶毒性可通過評(píng)估TCR與人體自身抗原肽的交叉識(shí)別能力來評(píng)估。首先，應(yīng)采用體外試驗(yàn)測(cè)定TCR修飾的免疫細(xì)胞與人自身抗原肽-HLA（與遞呈靶抗原肽的HLA等位基因相同）復(fù)合物的親和力，并說明抗原肽的選擇依據(jù)及選擇范圍。此外，還應(yīng)研究其他相關(guān)或不相關(guān)的蛋白中是否含有靶抗原肽序列。如果TCR與人自身抗原肽有交叉反應(yīng)可能，應(yīng)確定靶抗原肽的較小識(shí)別基序（motif），并采用計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)分析評(píng)估交叉反應(yīng)性。如果計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)可識(shí)別出具有潛在交叉反應(yīng)性的抗原肽，應(yīng)在體外測(cè)定TCR修飾免疫細(xì)胞對(duì)表達(dá)相應(yīng)蛋白或遞呈相應(yīng)抗原肽的的細(xì)胞的識(shí)別能力。如果不能排除交叉反應(yīng)性，應(yīng)基于含有潛在交叉反應(yīng)性抗原肽的蛋白的表達(dá)模式以及TCR與潛在交叉反應(yīng)性抗原肽的親和力來進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。為獲得TCR與其他等位HLA潛在交叉反應(yīng)性的信息，應(yīng)進(jìn)行充分的HLA交叉反應(yīng)性篩選。

CRISPR/Cas9的問題：和TALEN和ZFNS技術(shù)一樣，CRISPR/Cas9技術(shù)在應(yīng)用時(shí)也存在一定概率的脫靶問題——Cas9核酸酶在非目標(biāo)位點(diǎn)發(fā)生切割，引入非預(yù)期的基因突變。脫靶切割引入的突變可能會(huì)直接破壞細(xì)胞的基本功能，帶來不可預(yù)控的嚴(yán)重后果。如何減輕脫靶效應(yīng)？gRNA的GC含量：gRNA 的序列結(jié)構(gòu)對(duì)CRISPR/Cas9基因編輯的靶向活性有影響。gRNA 序列中 40%–60%的 GC 含量可以增加靶向活性，因?yàn)檩^高的 GC 含量穩(wěn)定了DNA：RNA 雙鏈體并破壞了脫靶結(jié)合。gRNA-on-gRNA序列的位置對(duì)編輯有影響，位于四個(gè)核苷酸末端的嘌呤殘基可以提高編輯效率。鳥嘌呤優(yōu)先選擇在gRNA的20位，胞嘧啶優(yōu)先選擇在16位以增加靶向編輯。種子基因脫靶檢測(cè)多少錢？

如何檢測(cè)脫靶效應(yīng)？在gRNA修飾中，截短的sgRNA是一種減少脫靶效應(yīng)的簡(jiǎn)單方法，并且基于RNP的遞送在大多數(shù)情況下適用于獲得更高的目標(biāo)活性。此外，選擇合適的Cas變體對(duì)于減少脫靶效應(yīng)也至關(guān)重要。但選擇合適的脫靶檢測(cè)工具，也是重中之重。脫靶預(yù)測(cè)結(jié)合PCR檢測(cè)法，利用脫靶預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)潛在的脫靶位點(diǎn)，PCR擴(kuò)增預(yù)測(cè)的脫靶位點(diǎn)，利用直接測(cè)序或酶切法檢測(cè)脫靶情況。操作簡(jiǎn)便、成本低偏倚性預(yù)測(cè)。全基因組測(cè)序，一種通過高通量測(cè)序檢測(cè)脫靶突變的方法，需要選擇適當(dāng)?shù)膮⒖蓟蚪M過濾背景突變，數(shù)據(jù)比對(duì)分析獲得含有PAM基序的潛在修飾位點(diǎn)，進(jìn)一步基因擴(kuò)增驗(yàn)證其突變情況。高通量全基因組范圍檢測(cè)可檢測(cè)SNPs，Indels和染色體水平變化。脫靶檢測(cè)方法，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。南京基因編輯技術(shù)脫靶檢測(cè)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)

高深度全基因組重測(cè)序服務(wù),該方法能多方位精細(xì)地對(duì)基因編輯的細(xì)胞或個(gè)體進(jìn)行off-target檢測(cè)。北京種子基因脫靶檢測(cè)安全性評(píng)價(jià)

長(zhǎng)期表達(dá)。與其他產(chǎn)品相比，部分基因zhiliao產(chǎn)品的明顯特征是可以在患者靶細(xì)胞或基因修飾細(xì)胞中持續(xù)存在并編碼表達(dá)作用因子（功能性蛋白或基因表達(dá)調(diào)節(jié)元件），并通過長(zhǎng)久或長(zhǎng)期改變靶細(xì)胞或組織的功能來達(dá)到zhiliao效果。同時(shí)，由于基因zhiliao編碼的作用因子在體內(nèi)的長(zhǎng)期暴露或表達(dá)異常，可能產(chǎn)生與其功能相關(guān)的長(zhǎng)期安全性風(fēng)險(xiǎn)，如細(xì)胞生長(zhǎng)失控和惡性liu形成、自身免疫反應(yīng)或其他無法預(yù)測(cè)的遲發(fā)性不良反應(yīng)。潛伏再jihuo。部分病毒類基因zhiliao產(chǎn)品可能存在從潛伏期被再jihuo的可能性或者引起機(jī)體中已有病毒ganran的再jihuo，存在ganran相關(guān)的遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。北京種子基因脫靶檢測(cè)安全性評(píng)價(jià)