2022年2月下旬,在醫(yī)麥客舉辦的年度盛會(huì)——“蓄力前行,助航新生——2021 CSGCT基因與細(xì)胞zhiliao醫(yī)學(xué)峰會(huì)”期間,唯可生物創(chuàng)始人兼CEO-吳寧博士分享了唯可生物在基因zhiliao賽道針對(duì)安全性展開的技術(shù)服務(wù),讓在場(chǎng)行業(yè)大咖和觀眾真正領(lǐng)會(huì)到ISA(integration site analysis,整合位點(diǎn)插入分析)領(lǐng)域國際金標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)的優(yōu)勢(shì),以及基因編輯定量脫靶檢測(cè)、載體拷貝數(shù)檢測(cè)、載體質(zhì)量控制等多項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)的行業(yè)意義。吳寧博士畢業(yè)于德國海德堡大學(xué),德國國家aizheng研究中心(DKFZ),并于2021年3月同幾位合伙人聯(lián)合創(chuàng)立了上海唯可生物科技有限公司。其創(chuàng)始團(tuán)隊(duì)擁有的檢測(cè)技術(shù)包括源于DKFZ,Manfred Schmidt團(tuán)隊(duì)的LAM-PCR(linear amplification-mediated Polymerase Chain Reaction,線性擴(kuò)增陽離子介導(dǎo)的聚合酶鏈反應(yīng)),LTA-PCR(Ligation-mediated target amplification Polymerase Chain Reaction,連接介導(dǎo)的目標(biāo)擴(kuò)增聚合酶鏈反應(yīng))和TES(Target enrichment sequencing,靶向富集測(cè)序)體系,并基于此形成的多項(xiàng)全球lingxian的基因zhiliao安全性檢測(cè)技術(shù)?;蚓庉嬅摪袑o處隱藏。上海crispr脫靶檢測(cè)分析
基因編輯產(chǎn)品除了適用基因zhiliao產(chǎn)品的一般考慮以及整合性載體的特殊考慮外,長期隨訪中還應(yīng)額外關(guān)注脫靶風(fēng)險(xiǎn),量化評(píng)估脫靶活性和在靶活性之間的相關(guān)性,或利用在靶活性來預(yù)測(cè)脫靶活性的水平。在開發(fā)過程中應(yīng)同時(shí)關(guān)注基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、脫靶效率、插入突變情況、目的基因在靶細(xì)胞中整合位點(diǎn)及表達(dá)。評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品整合進(jìn)基因組的可能性,判斷是否需要開展另外的遺傳毒性研究,評(píng)估插入突變(插入位點(diǎn)、插入拷貝數(shù)等)引起的遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。需要關(guān)注脫靶編輯、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座印跡引起的遺傳毒性問題;鑒定/表征基因組整合位點(diǎn)。非臨床研究是藥物開發(fā)的重要環(huán)節(jié)之一。廣州育種脫靶檢測(cè)技術(shù)高深度全基因組重測(cè)序服務(wù),該方法能多方位精細(xì)地對(duì)基因編輯的細(xì)胞或個(gè)體進(jìn)行off-target檢測(cè)。
基于已有科學(xué)經(jīng)驗(yàn)和既往非臨床/臨床研究結(jié)果,如果認(rèn)為基因修飾細(xì)胞所采用的載體系統(tǒng)可將外源基因整合到細(xì)胞基因組中并可在體內(nèi)長期存續(xù),需綜合分析以上風(fēng)險(xiǎn)因素,評(píng)估潛在的插入突變、致瘤/致性風(fēng)險(xiǎn)。非臨床研究,應(yīng)采用具有代表性的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)行基因整合位點(diǎn)分析,分析細(xì)胞的克隆組成以及在關(guān)注基因(如liu相關(guān)調(diào)控基因)附近有無優(yōu)先整合跡象,含有關(guān)注整合位點(diǎn)的細(xì)胞有無優(yōu)先異常增殖。對(duì)于嵌合抗原受體(Chimericantigenreceptor,CAR)或T細(xì)胞受體(Tcellreceptor,TCR)修飾的免疫細(xì)胞,應(yīng)盡可能采用多種方法評(píng)估其靶點(diǎn)相關(guān)毒性和脫靶毒性風(fēng)險(xiǎn)。
誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來源的細(xì)胞產(chǎn)品。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(inducedpluripotentstemcell,iPS)自身具有致瘤性風(fēng)險(xiǎn),在體內(nèi)可形成畸胎瘤,整合病毒載體的使用和誘導(dǎo)多能性可能增加iPS細(xì)胞插入致突變性和致性的風(fēng)險(xiǎn)。因此,應(yīng)在shou次臨床試驗(yàn)前完成致瘤性試驗(yàn)。若設(shè)計(jì)科學(xué)合理,能夠滿足評(píng)價(jià)要求,也可在持續(xù)時(shí)間足夠長的毒性研究中評(píng)估致瘤性風(fēng)險(xiǎn)。體內(nèi)致瘤性試驗(yàn)建議采用摻入未分化iPS細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)品作為陽性對(duì)照,以確認(rèn)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的靈敏度。如果iPS細(xì)胞設(shè)計(jì)了機(jī)制以降低致瘤風(fēng)險(xiǎn),應(yīng)在體內(nèi)試驗(yàn)中確認(rèn)/驗(yàn)證此類機(jī)制的功能 脫靶檢測(cè)企業(yè),推薦唯可生物,實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng),專業(yè)性高,檢測(cè)效率高,結(jié)果準(zhǔn)確率高。
CRISPR基因編輯zhiliao發(fā)展如火如荼,但也有不少人對(duì)基因zhiliao的安全性提出擔(dān)憂,由于CRISPR技術(shù)是直接改變基因組DNA,其中任何的改變都會(huì)被長久保留下來,所以CRISPR對(duì)于DNA序列的任何改變都需要嚴(yán)謹(jǐn)?shù)陌踩u(píng)估。根據(jù)目前已經(jīng)公開的FDA關(guān)于基因zhiliao的指導(dǎo)文件,對(duì)于基因zhiliao安全性的評(píng)估可以簡單總結(jié)為兩個(gè)方面:由于目前大部分CRISPR基因編輯zhiliao方案是基于CRISPR引起的DNA雙鏈斷裂和隨機(jī)突變進(jìn)行基因敲除,所以一類風(fēng)險(xiǎn)主要是指靶位點(diǎn)的隨機(jī)突變引發(fā)的安全風(fēng)險(xiǎn),如果出現(xiàn)大片段丟失、染色體重排等異常變化,都存在巨大的安全隱患。脫靶檢測(cè)服務(wù),推薦唯可生物,實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng),專業(yè)性高,檢測(cè)效率高,結(jié)果準(zhǔn)確率高。南通育種脫靶檢測(cè)技術(shù)
脫靶(off-target)效應(yīng)是指MicroRNA Agomir/Antagomir可以與特異性互補(bǔ)的核苷酸序列結(jié)合。上海crispr脫靶檢測(cè)分析
通常不需要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的遺傳毒性組合試驗(yàn),但應(yīng)根據(jù)基因zhiliao產(chǎn)品的特點(diǎn)、產(chǎn)品的具體適應(yīng)癥、載體的已有信息、導(dǎo)入基因序列結(jié)構(gòu)等,評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品整合進(jìn)基因組的可能性,判斷是否需要開展另外的遺傳毒性研究,如研究基因組修飾的發(fā)生情況,并檢測(cè)隨后可能發(fā)生的異常細(xì)胞行為;評(píng)估插入突變(插入位點(diǎn)、插入拷貝數(shù)等)引起的遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)基因zhiliao產(chǎn)品采用基因編輯或轉(zhuǎn)座子技術(shù)時(shí),需要關(guān)注脫靶編輯、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座印跡引起的遺傳毒性問題;鑒定/表征基因組整合位點(diǎn)。上海crispr脫靶檢測(cè)分析