2015年,隨著精細(xì)醫(yī)學(xué)概念的提出,越來越多的人開始關(guān)注如何能做到疾病的精確診斷和治病。外泌體作為一個(gè)新型的研究熱點(diǎn),由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性,已經(jīng)成為了疾病診斷治病的潛在有效方式,在精細(xì)醫(yī)學(xué)發(fā)展上有著光明的前景。多泡內(nèi)體的腔內(nèi)囊泡,要么分選進(jìn)溶酶體將物質(zhì)降解,要么作為外泌體分泌到胞外環(huán)境中。將膜分選到不同的腔內(nèi)囊泡群中的機(jī)制尚不清楚。該研究發(fā)現(xiàn)物質(zhì)被分選到內(nèi)體膜上的不同子域中,并且外泌體相關(guān)結(jié)構(gòu)域向內(nèi)體腔的轉(zhuǎn)移不取決于ESCRT(運(yùn)輸所需的內(nèi)體分選復(fù)合體)的功能,但是需要鞘脂神經(jīng)酰胺。純化的外體富含神經(jīng)酰胺,并且在神經(jīng)鞘磷脂酶被壓制后外泌體釋放減少。這些結(jié)果確定了內(nèi)體內(nèi)膜運(yùn)輸和外泌體形成的途徑。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì)。唐山正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話
人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體,包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí),外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合,進(jìn)而靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,從而細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細(xì)胞膜上未能檢測(cè)出。廣州外泌體提取試劑哪家好外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范、統(tǒng)一定量及鑒定等。
外泌體鑒定:外泌體分離之后,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,多角度進(jìn)行鑒定。l透射電鏡鑒定法:簡(jiǎn)稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法:簡(jiǎn)稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度快,檢測(cè)后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測(cè):外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;細(xì)胞質(zhì)蛋白,如肌動(dòng)蛋白(Actin)和鈣磷脂結(jié)合蛋白(Annexins);
有研究發(fā)現(xiàn),NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽性的占80%,而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽性的只占2%,因而認(rèn)為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標(biāo)志物。Park等通過Sys-BodyFlu-id數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質(zhì),進(jìn)一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號(hào)傳導(dǎo)途徑以促進(jìn)一些病癥的發(fā)生的發(fā)展,因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學(xué)標(biāo)記物。外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷:近年來眾多文獻(xiàn)報(bào)道,肺病細(xì)胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質(zhì)并促進(jìn)肺病的發(fā)生的發(fā)展,是早期診斷肺病的有效途徑。外泌體提?。河糜诰酆衔锍恋淼妮^常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。
外泌體(exosomes)是活細(xì)胞經(jīng)過"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過程而形成的膜性囊泡,來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等體液中,同時(shí)外泌體也存在于組織和細(xì)胞間隙中。人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體,人體中大約有1014個(gè)外泌體,大約平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè)。外泌體中含有核酸(DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等)、蛋白和脂類,在細(xì)胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用,研究表明其在干細(xì)胞、免疫調(diào)控、瘤轉(zhuǎn)移、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用。外泌體的提取、分離方法:免疫親和層析法。貴陽外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨
超濾離心法簡(jiǎn)單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。唐山正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話
外泌體的提取分離:1、超濾離心。由于外泌體是一個(gè)大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì),利用不同截留相對(duì)分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離,便可獲得外泌體。超濾離心法簡(jiǎn)單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。2、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實(shí)驗(yàn),難以普遍普及。唐山正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話