由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),另一方面也可以作為治病手段,未來(lái)有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病。外泌體的分離純化一直是科研工作者關(guān)注的問(wèn)題,獲得高純度的外泌體對(duì)后續(xù)的研究至關(guān)重要。據(jù)了解,目前人們多采用超速離心、免疫磁珠、超濾、沉淀或試劑盒等方法實(shí)現(xiàn)外泌體的提取分離。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì),在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過(guò)程,與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān)。外泌體的提取、分離方法:超高速離心法。昆明正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心,這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí),不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問(wèn)題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時(shí),量少。外泌體檢測(cè)作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無(wú)創(chuàng)診斷。唐山外泌體提取試劑廠家供應(yīng)外泌體提取:磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)。
外泌體的提取、分離方法:微流控技術(shù)。微流控是利用微納米級(jí)尺寸的管道來(lái)處理和操控流體所涉及的一門(mén)技術(shù),其在外泌體分離方面的應(yīng)用受到越來(lái)越多學(xué)者的關(guān)注。Jie等[16]課題組開(kāi)發(fā)了一種三維納米結(jié)構(gòu)微流控芯片,微柱陣列通過(guò)化學(xué)沉積將交叉多壁碳納米管功能化,然后其就可以識(shí)別特定的分子(CD63)并利用獨(dú)特拓?fù)浼{米材料高效的捕獲外泌體。Wunsch等[17]利用硅工藝生產(chǎn)納米級(jí)確定性側(cè)向位移(Nano-DLD)芯片,得到了均勻的間隙尺寸,該芯片可以靈敏地將20~110nm的顆粒分離。該研究證明了外泌體基于大小的位移,從而揭示了利用芯片分選和量化納米級(jí)生物膠體的潛力。
外泌體項(xiàng)目獲批學(xué)科方向:從統(tǒng)計(jì)來(lái)看,與前年相似外泌體立項(xiàng)集中的領(lǐng)域還是一些病癥學(xué),近年來(lái)外泌體發(fā)表的文章也絕大部分與其在一些病癥的形成,耐藥性,檢測(cè)等方面有關(guān)。例如2019年發(fā)表在MolecularCancer(IF=10.679)上的文章表明外泌體FMR1-AS1通過(guò)TLR7/NFκB/c-My信號(hào)通路在女性食管ai中促進(jìn)維持ai癥干細(xì)胞樣細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡。發(fā)表在JournalofExperimental&ClinicalCancerResearch(IF=5.646)上的一篇文章發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)p-STAT3可促進(jìn)結(jié)直腸ai細(xì)胞獲得性5-FU耐藥性。發(fā)表在Cancers(IF=6.162)上的一篇文章則研究了腹腔灌洗液中細(xì)胞外囊泡相關(guān)的miRNA作為子宮內(nèi)膜ai分子標(biāo)志物的可能性。此外,在神經(jīng)系統(tǒng)和精神疾病,中醫(yī)學(xué)及其他領(lǐng)域也有不少外泌體相關(guān)項(xiàng)目中標(biāo)。外泌體提取試劑直銷價(jià)外泌體檢測(cè)作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無(wú)創(chuàng)診斷逐漸取代超速離心法并推廣開(kāi)來(lái)。有些試劑盒操作簡(jiǎn)便,不用超速離心。
外泌體與肺病預(yù)后:外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時(shí)發(fā)現(xiàn),外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外,還有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時(shí)發(fā)現(xiàn),NY-ESO-1是其中對(duì)低生存率有顯著影響的標(biāo)志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA,其中l(wèi)et-7f、miR-30e-3p和miR-20b表達(dá)均下調(diào),進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者,高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān)。如何高效地提取外泌體是實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵??蓪⑼饷隗w吸附并分離出來(lái)。無(wú)錫外泌體提取試劑服務(wù)電話
外泌體提純?cè)噭┖械奶厣c優(yōu)勢(shì):無(wú)需耗時(shí)的超速離心,過(guò)濾或特殊注射器。昆明正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商
外泌體的提取分離:1、超濾離心。由于外泌體是一個(gè)大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì),利用不同截留相對(duì)分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離,便可獲得外泌體。超濾離心法簡(jiǎn)單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。2、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,即可將外泌體吸附并分離出來(lái)。磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實(shí)驗(yàn),難以普遍普及。昆明正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商