外泌體與肺病預(yù)后：在當(dāng)代精細(xì)醫(yī)療的大趨勢下，外泌體的發(fā)現(xiàn)和研究為肺病的早期診斷和治病提供了嶄新的方向。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現(xiàn)和早期診療提供可靠依據(jù)。根據(jù)一些病癥來源的外泌體在肺病的發(fā)生的發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用及相關(guān)機制的研究，臨床醫(yī)療人員可以針對不同的患者制定較合適的治病方案，以達到改善肺病患者生存率，延長肺病患者生存時間的目的。但是，針對外泌體的研究還存在諸多的問題有待廣大研究者解決，如：外泌體的純化及標(biāo)記方法、如何尋找外泌體的靶基因、外泌體的作用機制及信號通路等?？偠灾饷隗w的研究有著廣闊的前景，基于外泌體與肺病的研究，有望研發(fā)出能夠應(yīng)用于肺病臨床診斷和治病的有效措施，造福更多的患者。外泌體的提取分離：超濾離心。南京外泌體提取試劑廠家直銷

外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒，組分經(jīng)過優(yōu)化處理，適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、尿液及其他體液（腦脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等）中的外泌體提取，并搭配純化過濾裝置，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項：1.對于待測樣品粘度過大時，可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進行等體積稀釋處理。2.當(dāng)血清、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高，收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時，可用4℃預(yù)冷的1×PBS進行稀釋后再通過EPF柱離心。開封外泌體提取試劑哪家便宜外泌體提取：尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子。

外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）。超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費時，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時，對離心時間極為敏感。

人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合，進而啟動靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而啟動細(xì)胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細(xì)胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。外泌體提取的方法：過濾。

外泌體的提取方法：1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇（PEG）為常用的多聚物，可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等。用于外泌體提取的體液收集注意事項：選擇血清還是血漿？推薦大多數(shù)研究選擇血漿。無錫正規(guī)外泌體提取試劑銷售廠家

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外泌體在肺病進程中的作用：在一些病癥微環(huán)境中，一些病癥細(xì)胞來源的外泌體能夠誘導(dǎo)CD4+T分化為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，壓制機體的抗一些病癥免疫反應(yīng)；肺病細(xì)胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a，可在免疫細(xì)胞中結(jié)合并啟動TLR8，使TLR介導(dǎo)的NF-κB信號通路活化，從而導(dǎo)致一些病癥的生長和轉(zhuǎn)移。在肺病的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中，細(xì)胞間通訊扮演著重要的角色。據(jù)有關(guān)報道稱，NSCLC分泌的外泌體內(nèi)TGFβ和IL10的高表達與肺病的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。此外，啟動的T細(xì)胞可以通過調(diào)控Fas信號通路增加基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）的表達，進而促進肺病的轉(zhuǎn)移。這些機制有望成為肺病治病的潛在靶點。雖然大多數(shù)外泌體都是促進一些病癥的侵襲與轉(zhuǎn)移，但也有報道稱，外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與增殖。如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物南京外泌體提取試劑廠家直銷