大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)是目前應(yīng)用很廣的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。它具有:遺傳背景清楚。易于培養(yǎng)和控制。轉(zhuǎn)化操作簡(jiǎn)單。表達(dá)水平高。成本低。周期短等特點(diǎn)。同時(shí)是常用也是經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的蛋白表達(dá)系統(tǒng),在基因表達(dá)技術(shù)中發(fā)展至早。Escherich于1885年發(fā)現(xiàn)大腸桿菌。1976年Struhl、1977年Vapnek及1978年Chang等分別將酵母DN段、粗糙鏈孢霉DN段和哺乳動(dòng)物cDN段導(dǎo)入大腸桿菌,引起其表型的改變,證明了外源基因在大腸桿菌中可以使現(xiàn)有功能的活性表達(dá)。這些研究為大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的發(fā)展奠定了理論基礎(chǔ)。1980年,Guarante等在Science雜志上發(fā)表了以質(zhì)粒、乳糖操縱子為基礎(chǔ)建立起來的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)。這一發(fā)展構(gòu)成大腸桿菌系統(tǒng)的雛形。金黃色葡萄球常見于皮膚表面及上呼吸道黏膜。魚蛉假絲酵母
保存的銅綠假單胞菌復(fù)蘇時(shí),直接從菌種保存管挑取少量細(xì)菌移種普通瓊脂平板或肉湯管,于37攝氏度培養(yǎng)18~24小時(shí)。主要生化指標(biāo)檢測(cè),取較低溫甘油保存法和半固體保存法兩種保存法保存的菌種分別進(jìn)行42攝氏度生長(zhǎng)試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)、氧化-發(fā)酵試驗(yàn)、動(dòng)力試驗(yàn)及明膠液化試驗(yàn)檢測(cè)。半固體保存法在3個(gè)月內(nèi)復(fù)蘇,細(xì)菌生長(zhǎng)良好,但在6個(gè)月后復(fù)蘇,存活率降低,只達(dá)30%。移種普通瓊脂平板上無肉眼可見的藍(lán)綠色的色素產(chǎn)生,需連續(xù)移種3~4次后才可見到色素產(chǎn)生。改良的方法使菌種保存已達(dá)27個(gè)月,期間分別在6、12、18、24、27個(gè)月時(shí)復(fù)蘇,均可見綠膿桿菌在普通瓊脂平板上生長(zhǎng)良好,可見圓形、大小不一、光滑、濕潤(rùn)、邊緣不整齊的扁平菌落,菌落周圍的瓊脂被染成藍(lán)綠色;細(xì)菌存活率為100%。孤獨(dú)浜本酵母菌株大腸桿菌的生產(chǎn)量逐年遞增,可見其收益價(jià)值。
金黃色葡萄球菌中毒:潛伏期2~5小時(shí),極少超過6小時(shí)。起病急驟,有惡心、嘔吐,中上腹部痙攣性疼痛,繼以腹瀉。嘔吐較為突出,嘔吐物可帶膽汁黏液和血絲,腹瀉呈水樣便或稀便,每天數(shù)次至數(shù)十次不等,重癥可因劇烈吐瀉引起脫水、虛脫和肌肉痙攣。體溫大多正?;蚵愿?,絕大多數(shù)患者經(jīng)數(shù)小時(shí)或1~2小時(shí)內(nèi)迅速恢復(fù)。可伴有低鉀、低鈉等癥狀。我國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)于2013年發(fā)布《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中致病菌限量》(GB29921-2013),在國標(biāo)中制定了金黃色葡萄球菌的限量標(biāo)準(zhǔn),規(guī)定熟肉制品、熟制水產(chǎn)品、熟制糧食制品等8大類食品中,同批次采集5份樣品,每份樣品中的金黃色葡萄球菌濃度均不得超出1000CFU/g,只允許其中1份樣品在100~1000CFU/g之間。
目前有很多保藏方法可以適用于真類菌的保藏,但大體來可以分為讓真類菌連續(xù)生長(zhǎng)的保藏工藝。這一類的保藏工藝的特點(diǎn)是不斷的將菌株移植在新鮮的培養(yǎng)基上,并在合適的條件下生長(zhǎng),隨后置于一個(gè)低溫的環(huán)境中,一般是4-10攝氏度,這類保藏工藝主要包括斜面移植、油管保藏和蒸餾水保藏法等。二是利用干燥環(huán)境保藏菌株的休眠體,如分生孢子、厚垣孢子等,干燥選用的基質(zhì)可以是空氣、硅膠、土壤、沙子等。三是利用抑制菌株代謝活性的辦法達(dá)到長(zhǎng)期保藏,一般是通過脫水降低細(xì)胞內(nèi)水分或低溫冷凍,在此過程中關(guān)鍵環(huán)節(jié)是避免和降低冰晶對(duì)細(xì)胞造成的傷害,這類保藏工藝包括冷凍干燥法、低溫凍結(jié)和液氮保藏法等。銅綠假單胞菌主要產(chǎn)生青色的色素。
大腸桿菌是該屬的模式種(埃希菌屬),而埃希菌又是腸桿菌科的模式屬,其類名并非源于腸桿菌屬+“i”(sic、)+“aceae”,而是源于“腸桿菌”+“aceae”(腸桿菌不是屬,而是源于腸內(nèi)細(xì)菌的別稱)。埃切里奇(Escherich)描述的原始菌株被認(rèn)為已經(jīng)丟失了,因此選擇了一個(gè)新的類型菌株(新類型)作為表示:新類型菌株為U5/41T,也稱為存儲(chǔ)名稱DSM30083,ATCC11775,和NCTC9001,其對(duì)雞具有致病性并具有O1:K1:H7血清型。[39]然而,在大多數(shù)研究中,O157:H7、K-12MG1655或K-12W3110被用作表示大腸桿菌。該類型菌株的基因組直到至近才被測(cè)序。銅綠假單胞菌的化學(xué)式是Cu2(OH)2CO3)。拉氏普羅威登斯菌
將金黃色葡萄球培養(yǎng)在哥倫比亞血平板中,在光下觀察菌落會(huì)發(fā)現(xiàn)周圍產(chǎn)生了透明的溶血圈。魚蛉假絲酵母
典型的金黃色葡萄球菌為球型,顯微鏡下排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛,大多數(shù)無莢膜。革蘭染色陽性。金葡菌具有抗干燥、耐熱、耐低溫、耐高滲的特性。在干燥環(huán)境中存活數(shù)月;空氣中存在,但不繁殖。加熱70℃1h,80℃30min不被殺死。在冷凍食品中不易死。在含有50%~66%蔗糖或15%以上食鹽食品中才可被抑制,能在15%NaCl和40%膽汁中生長(zhǎng)。金黃色葡萄球菌是院內(nèi)傳染及社區(qū)獲得性傳染的常見細(xì)菌之一。隨著?-內(nèi)酰胺類維生素的普遍應(yīng)用,耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)隨之增加,且引起的傳染和病死率有逐年增加的趨勢(shì)。MRSA可通過接觸途徑進(jìn)行傳播,即易感人群從攜帶者或傳染者身上獲得MRSA,導(dǎo)致傳播流行。魚蛉假絲酵母
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