培養(yǎng)基的種類有哪些？鑒別培養(yǎng)基：利用細菌分解糖類和蛋白質的能力及其代謝產物的不同，在培養(yǎng)基中加入特定的作用底物和指示劑，觀察細菌生長過程中分解底物所釋放的不同產物，通過指示劑的反應不同來鑒別細菌。例如糖發(fā)酵管、克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）、伊紅-亞甲藍瓊脂和動力-吲哚-尿素（MIU）培養(yǎng)基等。選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入抑制劑，去抑制標本中的雜菌生長，有助于所選擇的細菌種類的生長。例如培養(yǎng)腸道致病菌的SS瓊脂，其中的膽鹽能抑制革蘭陽性菌，枸櫞酸鈉和煌綠能抑制大腸埃希菌，因而使致病的沙門菌、志賀菌容易分離到。液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固態(tài)培養(yǎng)基是常用的培養(yǎng)基種類。胰酪胨大豆羊血瓊脂（TSSB）基礎

在培養(yǎng)基中加入 HEPES 有何好處?培養(yǎng)基中常用的緩沖體系是碳酸氫鹽，它可提供營養(yǎng)，但卻在生理 pH 條件下會降低緩沖能力。而HEPES 是一種很強的緩沖劑，能使細胞培養(yǎng)基在 pH7.2-7.6 條件下緩沖能力增強。HEPES溶液：是一種弱酸，中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動。在開放式培養(yǎng)條件下，觀察細胞時培養(yǎng)基脫離了 5%CO2 的環(huán)境，CO2 氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時可以維持 pH7.0 左右。一般在進行克隆化培養(yǎng)時要添加HEPES。神經細胞原代培養(yǎng)的過程中能用到。TGY瓊脂培養(yǎng)基在培養(yǎng)細胞時通常還需要添加藥物，以防止細菌污染。

L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？L-谷氨酰胺（L-Glutamine）是細胞生長的必須氨基酸，可作為培養(yǎng)細胞的能量來源，參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中狀態(tài)不穩(wěn)定，它的降解速率隨保存時間，保存溫度及保存環(huán)境pH值等變化而變化。L-丙胺酰-谷氨酰胺（L-alanyl-L-glutamine）是細胞培養(yǎng)中普遍使用的L-谷氨酰胺的替代品，其在水溶液中穩(wěn)定性高，即可保持長時間穩(wěn)定的營養(yǎng)供給，也降低了分解產物造成的細胞毒性。L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液（L-alanyl-L-glutamineslution）可作為哺乳動物貼壁細胞或懸浮細胞培養(yǎng)添加劑。與谷氨酰胺相比，L-丙胺酰-谷氨酰胺不會自行降解成氨而導致細胞毒性，作為添加物培養(yǎng)條件更加可控，可有效提高細胞活力。

胰島素（Insulin）作用普遍，包括調節(jié)脂肪和蛋白質的代謝以及促進細胞生長等。胰島素功能的發(fā)揮源于其對細胞的作用，進而引起組織乃至機體的整體反應。一般可將胰島素在細胞水平的作用分為三大類：代謝作用、促生長作用、以及代謝和促生長混合作用。胰島素對細胞的代謝調節(jié)作用主要是通過其與細胞膜上的胰島素受體（Insulin receptor, IR）相互作用而介導，而胰島素對細胞的促生長作用則是通過其與細胞膜上胰島素的樣生長的因子受體（IGF Receptor, IG）相互作用而介導的。在無血清細胞培養(yǎng)液中，常添加胰島素來維持細胞生長，調節(jié)細胞對葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的攝取、利用和貯存，同時抑制糖原、蛋白質和脂肪的分解。生長細胞需要的營養(yǎng)物質包括碳源、氮源、微量元素和維生素等。

培養(yǎng)細胞時應使用5%還是10%CO2，或者根本沒有影響？一般培養(yǎng)基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作為pH的緩沖系統，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中 NaHCO3含量為每公升3.7g時，細胞培養(yǎng)時應使用10% CO2；當培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5g時，則應使用5%CO2培養(yǎng)細胞。NaHCO3的作用：培養(yǎng)基中使用了 NaHCO3-CO2 緩沖系統，并采用開放培養(yǎng)，使細胞代謝產生的CO2及時溢出培養(yǎng)瓶，再通過穩(wěn)定調節(jié)溫箱中CO2濃度（5%） ，與培養(yǎng)基中的NaHCO3處于平衡狀態(tài)，從而調節(jié)培養(yǎng)基的PH值。NEAA：非必須氨基酸，NEAA（非必需氨基酸） 是含幾種非必需氨基酸的合劑，添加到的原培養(yǎng)基不同，NEAA 也有不同的種類，比如添加至MEM的NEAA，含L-Alanine、L-Asparagine、L-Aspartic Acid、 L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。半固態(tài)培養(yǎng)基是一種介于液態(tài)培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基之間的混合形式，常用于篩選微生物菌株。假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基P基礎

好氧菌需要富含氧氣和富含葡萄糖的培養(yǎng)基，而厭氧菌則需要采用無氧培養(yǎng)技術。胰酪胨大豆羊血瓊脂（TSSB）基礎

以MS培養(yǎng)基母液為基礎，向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL，微量元素100×母液20mL，鐵鹽100×母液20mL，維生素100×母液20mL，肌醇200×母液10mL，甘氨酸200×母液10mL，配制得MS培養(yǎng)基后，再加入0.5mg·L-1的BA8mL，0.5mg·L-1的NAA8mL。然后加入實際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水，加入40g蔗糖后攪拌使其溶化，用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調整pH值至5.8-6.0。加入14g瓊脂，將鋁鍋置于電爐上，攪拌加熱使瓊脂完全溶化，然后用蒸餾水定容至終體積2L，繼續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中。胰酪胨大豆羊血瓊脂（TSSB）基礎

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