天然培養(yǎng)基血清種類:目用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細(xì)胞的原因:來源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過長時(shí)間的應(yīng)用考驗(yàn)人們對其有比較深入的理解。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動物血清更合適。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量比較大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)比較高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分較少。在制備培養(yǎng)基時(shí),要注意保持一定的 pH 值。改良霍格蘭氏營養(yǎng)液添加劑
天然培養(yǎng)基是指一類利用動物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。例如。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基等。常用的天然有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麩皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培養(yǎng)基成本較低,除在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常使用外,也適于用來進(jìn)行工業(yè)上大規(guī)模的微生物發(fā)酵生產(chǎn)。合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)而配制的培養(yǎng)基。例如。高氏1號培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基等。合成培養(yǎng)基有一定的配方,配制合成培養(yǎng)基時(shí)重復(fù)性強(qiáng),但與天然培養(yǎng)基相比其成本較高,微生物在其中生長速度較慢,一般適于在實(shí)驗(yàn)室用來進(jìn)行有關(guān)微生物營養(yǎng)需求、代謝、分類鑒定、生物量測定、菌種選育及遺傳分析等方面的研究工作。桔汁瓊脂(OSA)不同的微生物物種需要不同的培養(yǎng)基。
在保存干粉培養(yǎng)基時(shí)還需要注意以下注意事項(xiàng):盡可能縮減干粉培養(yǎng)基長時(shí)間不間斷存儲。因?yàn)殚L時(shí)間不使用,尤其是室溫下,會受到光照、濕度等自然環(huán)境的影響,溫濕度波動,會產(chǎn)生不穩(wěn)定的物理與化學(xué)效應(yīng),導(dǎo)致化學(xué)反應(yīng)發(fā)生,細(xì)菌及其他微生物生長。在保存時(shí)使用密封包裝進(jìn)行,使其隔絕空氣和水分及其他微生物的進(jìn)入。及時(shí)檢查干粉培養(yǎng)基的保質(zhì)期,避免超過保質(zhì)期的使用,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。準(zhǔn)確記錄干粉培養(yǎng)基的配方,標(biāo)簽上應(yīng)說明干粉培養(yǎng)基的名稱、生產(chǎn)日期、有效期,混合使用指導(dǎo),以方便日后使用。
培養(yǎng)基分類有哪些?營養(yǎng)缺陷型:野生型菌株經(jīng)過人工誘變或者自然突變失去合成某種營養(yǎng)(氨基酸,維生素,核酸等)的能力,只有在基本培養(yǎng)基中補(bǔ)充所缺乏的營養(yǎng)因子才能生長,稱為營養(yǎng)缺陷型(auxotroph)。營養(yǎng)缺陷型是一種生化突變株,它的出現(xiàn)是由基因突變引起的。遺傳信息的載體是一系列為酶蛋白編碼的核酸系列,如果核酸系列中某堿基發(fā)生突變,由該基因所控制的酶合成受阻,該菌株也因此不能合成某種營養(yǎng)因子,使正常代謝失去平衡。制備良好的培養(yǎng)基可為實(shí)驗(yàn)提供可靠的基礎(chǔ),并提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
在培養(yǎng)基中加人某種抑制劑和指示劑,抑制某些細(xì)菌生長,促進(jìn)目的菌的繁殖,并使所生長的細(xì)菌菌落具有一定特征,以助鑒別挑選,這類培養(yǎng)基稱為選擇性鑒別培養(yǎng)基。如SS瓊脂,在該培養(yǎng)基配方中含有乳糖(反應(yīng)底物)、中性紅和檸檬酸鐵銨(指示劑)、燦爛綠及膽鹽等(抑菌劑)。燦爛綠和膽鹽等抑菌劑能抑制革蘭氏陽性菌及部分大腸埃希菌的生長,而對沙門菌及志賀菌基本無影響,而且大腸埃希菌能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸,使菌落變紅色,沙門菌和志賀菌不發(fā)酵乳糖,其菌落為無色。如細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫,則與檸檬酸鐵銨反應(yīng)生成硫化亞鐵沉淀,菌落中心呈黑色或褐色。以此達(dá)到鑒別的目的。干粉培養(yǎng)基是生物實(shí)驗(yàn)室中不可或缺的實(shí)驗(yàn)材料,正確的制備和使用方法有助于提高實(shí)驗(yàn)的可靠性和準(zhǔn)確度。改良COMBO培養(yǎng)基添加劑D(硫胺素溶液)
培養(yǎng)基的傳遞需要在制備和使用期間保持良好的無菌技術(shù),避免細(xì)菌交叉污染。改良霍格蘭氏營養(yǎng)液添加劑
培養(yǎng)基是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基),較長時(shí)間的貯存,必須放在3-6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管,均改制成粉末。改良霍格蘭氏營養(yǎng)液添加劑
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