4.**培養(yǎng)條件**:-培養(yǎng)基的制備方法包括稱(chēng)取基礎(chǔ)培養(yǎng)基14.2g加入180ml蒸餾水,加熱溶解并不停攪拌;另取1.2g李斯特氏菌添加劑,加入20ml無(wú)菌水,并加入一些玻璃球,不停振動(dòng),使其乳化均勻,將二者分別于121℃高壓滅菌15分鐘。冷至50℃左右時(shí),把李斯特氏菌添加劑加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,并加入李斯特氏菌抑菌劑,混勻,傾入無(wú)菌平皿。5.**質(zhì)量控制**:-質(zhì)控菌株在37℃培養(yǎng)24-48小時(shí),單增李斯特氏菌和綿羊李斯特氏菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好,形成藍(lán)色菌落,菌落周?chē)幸徊煌该鳝h(huán)。其他菌如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和沙門(mén)氏菌則不生長(zhǎng)或生長(zhǎng)不良。6.**儲(chǔ)存條件**:-制備好的固體平板保存于2-8℃,應(yīng)避免光線(xiàn)直接照射。干燥培養(yǎng)基應(yīng)放置于陰暗干燥處,保存溫度2-8℃。7.**注意事項(xiàng)**:-嚴(yán)格按照標(biāo)簽說(shuō)明進(jìn)行配制培養(yǎng)基,避免混合時(shí)培養(yǎng)基和添加劑溫度過(guò)高導(dǎo)致平板出現(xiàn)絮狀物。干燥培養(yǎng)基超過(guò)保質(zhì)期、結(jié)塊和顏色變化都不能使用。這些特點(diǎn)使得李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基在食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。甘油天門(mén)冬素瓊脂培養(yǎng)皿包含L-天門(mén)冬酰胺、七水合硫酸鋅、七水合硫酸亞鐵、四水合氯化錳、磷酸氫二鉀等。葡萄糖銨瓊脂培養(yǎng)基
在配制改良高氏二號(hào)培養(yǎng)基時(shí),如果遇到成分沉淀問(wèn)題,可以采取以下措施進(jìn)行處理:1.**充分溶解**:確保所有成分在加入之前已經(jīng)充分溶解。對(duì)于不易溶解的成分,如瓊脂,需要在加熱條件下不斷攪拌直至完全溶解。2.**調(diào)整溶解順序**:根據(jù)各成分的溶解特性,調(diào)整添加順序。通常先溶解無(wú)機(jī)鹽和維生素,再加入有機(jī)物質(zhì)。3.**使用輔助溶劑**:對(duì)于某些難溶成分,可以考慮使用適當(dāng)?shù)娜軇┗蛑軇﹣?lái)幫助溶解。4.**避免混合沉淀**:在混合不同成分時(shí),要注意避免因成分相互作用而產(chǎn)生沉淀。例如,避免將鈣鹽和磷酸鹽直接混合。5.**控制pH值**:pH值的變化可能會(huì)影響某些成分的溶解度,因此在調(diào)節(jié)pH值時(shí)要小心,確保在成分完全溶解后再進(jìn)行。6.**分步滅菌**:如果培養(yǎng)基中某些成分不耐熱,可以考慮分步滅菌。即先滅菌大部分成分,冷卻后再添加不耐熱的成分。7.**過(guò)濾**:如果沉淀物已經(jīng)形成,可以通過(guò)過(guò)濾來(lái)去除。使用適當(dāng)孔徑的濾紙或?yàn)V網(wǎng)過(guò)濾培養(yǎng)基。8.**攪拌**:在溶解和加熱過(guò)程中,持續(xù)攪拌可以減少沉淀的形成。9.**使用螯合劑**:對(duì)于易氧化的成分,如硫酸亞鐵,可以使用螯合劑(如EDTA)來(lái)防止沉淀和氧化。胰化大豆硫酸鎂瓊脂(TSAM)改良CCD瓊脂培養(yǎng)皿主要用于空腸彎曲菌的分離培養(yǎng) 。pH值控制在7.2±0.2,為特定的生物提供適宜的生長(zhǎng)環(huán)境 。
改良Frey氏培養(yǎng)基是一種專(zhuān)門(mén)用于支原體培養(yǎng)的培養(yǎng)基,具有以下特點(diǎn):1.**成分組成**:-改良Frey氏培養(yǎng)基的基礎(chǔ)配方包括氯化鈉、氯化鉀、磷酸二氫鉀、水解乳蛋白、酚紅、硫酸鎂、磷酸氫二鈉、葡萄糖、酵母浸粉和醋酸鉈。每升培養(yǎng)基中具體分量為氯化鈉5.0克,氯化鉀0.4克,磷酸二氫鉀0.2克,水解乳蛋白5.0克,酚紅0.1克,硫酸鎂0.2克,磷酸氫二鈉1.4克,葡萄糖10.0克,酵母浸粉25.0克,醋酸鉈0.1克,pH值控制在7.7±0.1。2.**用途**:-主要用于培養(yǎng)滑液支原體及其他禽支原體。特別適合于滑液支原體的培養(yǎng)和檢測(cè)。3.**pH值**:-改良Frey氏培養(yǎng)基的pH值在7.6~7.8之間,適合支原體的生長(zhǎng)。4.**靈敏度和穩(wěn)定性**:-改良Frey氏液體培養(yǎng)基為澄清、無(wú)雜質(zhì),呈玫瑰紅色的液體;經(jīng)靈敏度檢驗(yàn),液體培養(yǎng)基靈敏度菌達(dá)到10^-8及以上,且陰性對(duì)照無(wú)變色,證明該培養(yǎng)基靈敏度高。5.**使用方法**:-稱(chēng)取47.4克培養(yǎng)基,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,116℃高壓滅菌30分鐘,冷至45℃左右時(shí)加入100ml無(wú)菌馬血清、輔酶I0.1g、L-半胱氨酸0.1g、精氨酸0.4g和青霉素80萬(wàn)單位。6.**添加劑**:-可加入改良Frey添加劑,每支添加于1000ml改良Frey氏培養(yǎng)基中,以增強(qiáng)培養(yǎng)效果。
改良亮綠瓊脂培養(yǎng)皿通常用于細(xì)菌的培養(yǎng)和分離,而不是直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。然而,通過(guò)一些調(diào)整和添加特定的成分,它也可以用于某些類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)。以下是改良亮綠瓊脂培養(yǎng)皿用于培養(yǎng)和分離細(xì)胞的一些方法:選擇合適的基礎(chǔ)培養(yǎng)基:改良亮綠瓊脂培養(yǎng)皿的基礎(chǔ)瓊脂可以作為細(xì)胞培養(yǎng)的基質(zhì),但需要添加適合特定細(xì)胞類(lèi)型的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、生長(zhǎng)因子。添加細(xì)胞生長(zhǎng)所需的成分:為了滿(mǎn)足細(xì)胞生長(zhǎng)的需要,需要在瓊脂中添加血清、氨基酸、維生素、礦物質(zhì)和必要的緩沖系統(tǒng)。調(diào)整瓊脂濃度:根據(jù)細(xì)胞的粘附特性,可能需要調(diào)整瓊脂的濃度,以便細(xì)胞能夠在瓊脂上生長(zhǎng)和擴(kuò)散。選擇性添加抗生物質(zhì):如果需要防止細(xì)菌污染,可以在培養(yǎng)基中添加適量的抗生物質(zhì)。改良番茄汁瓊脂培養(yǎng)基的pH值控制在6.8±0.2,這為乳酸菌的生長(zhǎng)提供了適宜的酸堿環(huán)境 。
LPM瓊脂培養(yǎng)皿的制備方法LPM瓊脂培養(yǎng)皿的制備通常遵循以下步驟:稱(chēng)量:首先,根據(jù)需要的培養(yǎng)基體積,準(zhǔn)確稱(chēng)量LPM瓊脂粉末。溶解:將稱(chēng)量好的LPM瓊脂粉末溶解在蒸餾水中,通常使用1000毫升水溶解50.5克培養(yǎng)基粉末。滅菌:將溶解后的培養(yǎng)基溶液進(jìn)行高壓滅菌,通常在121℃下保持15分鐘。冷卻:滅菌后的培養(yǎng)基需要冷卻至45-50℃,以便于后續(xù)添加添加劑。添加添加劑:在冷卻后的培養(yǎng)基中加入LPM瓊脂添加劑,如拉氧頭孢,每100毫升培養(yǎng)基中加入1支?;旌希簩⑻砑觿┡c培養(yǎng)基混合均勻。傾倒入平皿:將混合好的培養(yǎng)基溶液倒入無(wú)菌平皿中,待其凝固后即可使用。TSAM培養(yǎng)皿含有胰蛋白胨和大豆胨,這兩種成分富含氮源和碳源,能夠提供細(xì)菌生長(zhǎng)所需的氨基酸和生長(zhǎng)因子。pH7.2磷酸鹽緩沖液
YEB培養(yǎng)基特別適用于農(nóng)桿菌的培養(yǎng)和表達(dá),使用此培養(yǎng)基制備農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞,轉(zhuǎn)化效率高。葡萄糖銨瓊脂培養(yǎng)基
連四硫酸鹽肉湯培養(yǎng)基(TetrathionateBroth,簡(jiǎn)稱(chēng)TTB)是一種選擇性富集培養(yǎng)基,主要用于分離和富集沙門(mén)氏菌。以下是其主要特點(diǎn):1.**成分組成**:-連四硫酸鹽肉湯培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分包括胰酪蛋白胨、動(dòng)物組織消化物、膽鹽、碳酸鈣和硫代硫酸鈉等。每升培養(yǎng)基中通常包含胰酪蛋白胨2.5g、動(dòng)物組織消化物2.5g、膽鹽1.0g、碳酸鈣10.0g和硫代硫酸鈉30.0g。2.**選擇性**:-該培養(yǎng)基通過(guò)添加去氧膽鹽和亮綠染料等抑制劑,抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng),從而提高對(duì)沙門(mén)氏菌的選擇性。碘-碘酸鉀與硫代硫酸鈉反應(yīng)生成四硫磺酸鹽,阻遏常規(guī)腸道細(xì)菌生長(zhǎng)。3.**鑒別功能**:-葡萄糖和甘露醇是可發(fā)酵的糖類(lèi)物質(zhì),輔助腸道致病菌尤其是沙門(mén)氏菌的鑒別。連四硫酸鹽肉湯培養(yǎng)基含有碘液和煌綠水溶液,這些添加劑有助于抑制共生生物,從而改善沙門(mén)氏菌的分離。4.**應(yīng)用廣**:-主要用于傷寒沙門(mén)氏菌和其他沙門(mén)氏菌的分離、增菌和鑒定。常用于從糞便、污水等樣品中分離沙門(mén)氏菌。5.**配制方法**:-一般將培養(yǎng)基粉末溶解在蒸餾水或去離子水中,加熱煮沸,分裝后進(jìn)行高壓滅菌。使用時(shí)需現(xiàn)配現(xiàn)用,以保證培養(yǎng)基的穩(wěn)定性和選擇性。葡萄糖銨瓊脂培養(yǎng)基