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染色和封片常用的染色方法是蘇木素-伊紅(Hematoxylin-Eosin)染色法,簡稱H.E染色法。這種方法對任何固定液固定的組織和應(yīng)用各種包埋法的切片均可使用。蘇木素是一種堿性染料,可使組織中的嗜堿性物質(zhì)染成藍(lán)色,如細(xì)胞核中的染色質(zhì)等;伊紅是一種酸性染料,可使組織中的嗜酸性物質(zhì)染成紅色,如多數(shù)細(xì)胞的胞質(zhì)、核仁等在H.E染色的切片中均呈紅色。H.E染色程序如下:脫蠟、脫苯、復(fù)水、染色、脫水、透明、封固常規(guī)蘇木素染色中的對比染色是用伊紅,近年來在英、美的一些實驗室則采用焰紅(phloxine),此外也有用桔黃G(OrangeG)、比布里希猩紅(Biebrich scarlet)、波爾多紅(Bordeaux red)等作為對比染色。伊紅為染胞質(zhì)、膠原纖維、肌纖維、嗜酸性顆粒等常用的染料。北京病理切片加盟
制作病理切片浸蠟、包埋 (1)使石蠟浸入組織中,取代組織中含有的透明劑。 (2)包埋:將浸蠟后的組織置于融化的固體石蠟中,石蠟?zāi)毯?,組織即被包在其中,稱蠟塊,此過程稱為包埋。 5.制作病理切片切片和貼片 (1)修整蠟塊:可視其組織的大小,在組織邊緣約0.1~0.2cm處,切去余蠟部分,否則易造成組織皺縮不平。 (2)準(zhǔn)備好切片用具:切片刀、毛筆、眼科鑷子(彎)、漂烘溫控儀 (3)安裝蠟塊:將修好的蠟塊安裝在金屬或木制持蠟器上。 (4)安裝切片刀:將切片刀安裝在切片機的刀臺上,把刀臺上的緊固螺絲旋緊,使切片時不產(chǎn)生振動,能保持一定的切片厚度。 (5)切片的厚度:切片機的厚度調(diào)節(jié)器上刻有0~50μm或0~25μm,可任意選擇其厚度,石蠟切片的厚度一般在4~6μm。 (6)切片 (7)鋪片:用眼科鑷子鑷起蠟帶輕輕平鋪在40~45℃的水面上,借水的張力和水的溫度,將略皺的蠟帶自然展平。 (8)貼片、烘片:待切片在恒溫水面上充分展平后,將蠟片撈到載玻片的中段處傾去載玻片上的余水,置入60~65℃恒溫箱內(nèi)或切片漂烘溫控儀的烘箱內(nèi)烤片15~30分鐘,脫去溶化組織間隙的石蠟。陜西病理切片定制
病理切片的制作需要取一定大小的病變組織,用病理組織學(xué)方法制成病理切片〔通常將病變組織包埋在石蠟塊里,用切片機切成薄片,再用蘇木精-伊紅(H-E)染色〕,用顯微鏡進(jìn)一步檢查病變。 病變的發(fā) 展過程,***作出病理診斷。 病理切片的制作 1.制作病理切片取材 (1)材料新鮮:取材組織愈新鮮愈好,人體組織一般在離體后,動物組織在處死后迅速固定,以保證原有的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)。 (2)組織塊的大小:所取組織塊較理想的體積為2.0cm×2.0cm×0.3cm,以使固定液能迅速而均勻地滲入組織內(nèi)部,但根據(jù)制片材料和目的不同,組織塊的較理想體積也不同,如制作病理外檢、科研切片,其組織塊可以薄取0.1~0.2cm即可,這樣可以縮短固定脫水透明的時間,若制作教學(xué)切片厚取0.3 ~0.5cm,這樣可以同一蠟塊制作出較多的教學(xué)切片。 (3)勿擠壓組織塊: 切取組織塊用的刀剪要鋒利,切割時不可來回銼動。夾取組織時切勿過緊,以免因擠壓而使組織、細(xì)胞變形。 (4)規(guī)范取材部位: 要準(zhǔn)確地按解剖部位取材,病理標(biāo)本取材按照各病變部位、性質(zhì)的不同,根據(jù)要求規(guī)范化取材。
制作病理切片染色和封片 常用的染色方法是蘇木素-伊紅(Hematoxylin-Eosin)染色法,簡稱H.E染色法。這種方法對任何固定液固定的組織和應(yīng)用各種包埋法的切片均可使用。蘇木素是一種堿性染料,可使組織中的嗜堿性物質(zhì)染成藍(lán)色,如細(xì)胞核中的染色質(zhì)等;伊紅是一種酸性染料,可使組織中的嗜酸性物質(zhì)染成紅色,如多數(shù)細(xì)胞的胞質(zhì)、核仁等在H.E染色的切片中均呈紅色。 H.E染色程序如下:脫蠟、脫苯、復(fù)水、染色、脫水、透明、封固 常規(guī)蘇木素染色中的對比染色是用伊紅,近年來在英、美家的一些實驗室則采用焰紅(phloxine),此外也有用桔黃G(OrangeG)、比布里希猩紅(Biebrich scarlet)、波爾多紅(Bordeaux red)等作為對比染色。伊紅為染胞質(zhì)、膠原纖維、肌纖維、嗜酸性顆粒等常用的染料。
病理切片制作時將部分有病變的組織或臟器經(jīng)過各種化學(xué)品和埋藏法的處理,使之固定硬化,在切片機上切成薄片,粘附在玻片上,染以各種顏色,供在顯微鏡下檢查,以觀察病理變化,作出病理診斷。 病理切片操作規(guī)范: 一、巨檢結(jié)束后點清塊數(shù),記錄簽收。 二、組織包埋完成后進(jìn)行清點蠟塊數(shù)量。 三、大標(biāo)本固定時間不得少于6小時;小標(biāo)本不得少于3小時。 四、固定液必須及時更換,固定后必須流水沖洗。 五、固定、脫水溫度不得高于37℃。 六、包埋用石蠟必須過濾。 七、試劑必須及時更換。 八、切片刀必須鋒利,用力均勻,切片厚度3—5微米。切片完整無污染,無皺褶。 九、胃鏡、穿刺等小活檢組織切片必須作連續(xù)性切片,數(shù)量不得少于8張。 十、組織片貼附,應(yīng)在除去標(biāo)簽位置后玻片的中間。 十一、封固前必須經(jīng)酒精充分脫水,二甲苯透明,濕封。 十二、封片時不得有氣泡,不得有樹膠外溢。 十三、標(biāo)簽必須貼于玻片左側(cè),編號字跡必須清楚。 十四、取材后的制片工作一般應(yīng)在2個工作日內(nèi)完成。 十五、切片完成后交付醫(yī)師時必須按照記錄當(dāng)面清點吉林病理切片批發(fā)
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制作組胚病理切片保持材料的清潔:組織塊上如有血液、污物、粘液、食物、糞便等,可用水沖洗干凈后再放入固定液中。 保持組織的原有形態(tài):新鮮組織固定后,或多或少會產(chǎn)生收縮現(xiàn)象,有時甚至完全變形。為此可將組織展平,以盡可能維持原形。 制作病理切片固定 (1)小塊組織固定法:這是相當(dāng)常用的方法,從人體或動物體取下的小塊組織,須立即置入液態(tài)固定劑中進(jìn)行固定,通常,標(biāo)本與固定液的比例為1:4~20,但組織塊不宜過大過厚,否則固定液不能迅速滲透。故取組織塊的大小一般為2.0cm×2.0cm×0.3cm。 (2)注射、灌注固定法:某些組織塊由于體積過大或固定液極難滲入內(nèi)部,或需要對整個臟器或整個動物體進(jìn)行固定。這時宜采用注射固定或灌注固定法。將固定液注入血管,經(jīng)血管分支到達(dá)整個組織和全身,從而得到充分的固定。 (3)蒸汽固定法:比較小而厚的標(biāo)本,可采用鋨酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片,則應(yīng)在血片未干燥前采用鋨酸或甲醛蒸汽接觸固定。 相當(dāng)常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。北京病理切片加盟
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