細(xì)胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總

貼壁細(xì)胞如何進(jìn)行傳代?

去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4mlPBS洗1-2次;棄PBS，再加1.5ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細(xì)胞，顯微鏡下觀察，待細(xì)胞變圓，細(xì)胞間隙明顯，部分細(xì)胞剛開始脫離瓶壁，加4ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細(xì)胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min;棄上清，細(xì)胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶補(bǔ)足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的標(biāo)準(zhǔn)是什么？臺(tái)州特定細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

一般拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么？

收到細(xì)胞先不開蓋,用酒精將整個(gè)細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各兩張），排除細(xì)胞本身污染的情況。

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細(xì)胞接種密度多少合適?

依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長的一個(gè)重要原因。按照我們的經(jīng)驗(yàn)：一般倍增時(shí)間24 h內(nèi)的細(xì)胞，傳代比率1:6-1:12為宜，倍增時(shí)間24-48 h的細(xì)胞，傳代比率1:3-1:8為宜，倍增時(shí)間超過48h的細(xì)胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。

如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)的產(chǎn)生?

掌握細(xì)胞傳代的比較好時(shí)機(jī)，不要細(xì)胞長老了再傳代;掌握好消化時(shí)間，防止消化過度產(chǎn)生細(xì)胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到比較好;嚴(yán)格控制水質(zhì)和器皿的清潔。

 單細(xì)胞測序?qū)嶒?yàn)的第一步是單細(xì)胞懸液的制備，而懸液制備中細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性直接影響單細(xì)胞測序的數(shù)據(jù)質(zhì)量，但是關(guān)于細(xì)胞計(jì)數(shù)您真的了解嗎？

目前細(xì)胞計(jì)數(shù)主要使用臺(tái)盼藍(lán)染色法和雙熒光AO/PI染色法。

1）臺(tái)盼藍(lán)染色原理：臺(tái)盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不著色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高，可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色（藍(lán)色）。

2）雙熒光AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）可以通過完整的細(xì)胞膜，嵌入所有細(xì)胞（活細(xì)胞和死細(xì)胞）的細(xì)胞核，呈現(xiàn)綠色熒光；碘化丙啶（PI）只能通過不完整的細(xì)胞膜，即死細(xì)胞的細(xì)胞膜，嵌入所有死細(xì)胞的細(xì)胞核，呈現(xiàn)紅色熒光。

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對(duì)比細(xì)胞計(jì)數(shù)儀和血球計(jì)數(shù)板。

對(duì)比1:準(zhǔn)確度主觀差異性不論采用哪種細(xì)胞計(jì)數(shù)方法，依靠操作人員的判斷都會(huì)導(dǎo)致結(jié)果出錯(cuò)。TANK-CA0008全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器采用了先進(jìn)的算法來確定比較好焦距和光強(qiáng)度；可去除諸多主觀變量，同時(shí)還可節(jié)省時(shí)間。利用定量方法，根據(jù)細(xì)胞大小、亮度和圓度對(duì)細(xì)胞進(jìn)行設(shè)門，而不是依靠操作人員的判斷，這有助于減少主觀性錯(cuò)誤，提高樣本和用戶間的重復(fù)性

1. 采用血球計(jì)數(shù)板與 TANK-CA0008全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器進(jìn)行計(jì)數(shù)的用戶差異比較。由三位不同的操作人員，采用 TANK-CA0008全自動(dòng) 細(xì)胞 計(jì)數(shù)儀以及血球計(jì)數(shù)板和顯微鏡，對(duì)相同的 A549、COS-7、HeLa 和 U2OS 細(xì)胞樣本進(jìn)行計(jì)數(shù)。血球計(jì)數(shù)板的用戶間差 異明顯高于TANK-CA0008全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù) 儀器。 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的費(fèi)用是多少？江西智能細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀怎么使用？臺(tái)州特定細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

臺(tái)盼藍(lán)染液是細(xì)胞活性染料，常用于檢測細(xì)胞膜的完整性。細(xì)胞損傷或死亡時(shí)，臺(tái)盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜，與解體的DNA結(jié)合，使其著色。而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。故可以檢測細(xì)胞是否存活。

臺(tái)盼藍(lán)染色法的原理正常的活細(xì)胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺(tái)盼藍(lán)，使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi)；而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞，胞膜的通透性增加，可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失，即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡，這與中性紅作用相反。因此，借助臺(tái)盼藍(lán)染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一。注意凋亡小體也有臺(tái)盼藍(lán)拒染現(xiàn)象。臺(tái)盼藍(lán)染色后，通過顯微鏡下直接計(jì)數(shù)或顯微鏡下拍照后計(jì)數(shù)，就可以對(duì)細(xì)胞存活率進(jìn)行比較精確的定量。 臺(tái)州特定細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

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