傳統(tǒng)手動(dòng)計(jì)數(shù)法

回答這個(gè)問題前，我們拿一個(gè)可以比較的對(duì)象，即原始的細(xì)胞計(jì)數(shù)及活率分析方法——1臺(tái)光學(xué)顯微鏡+血球計(jì)數(shù)板，待測的細(xì)胞懸液樣品被滴加在血球計(jì)數(shù)板上，通過肉眼人工計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)細(xì)胞數(shù)量和計(jì)算細(xì)胞活率。

顯微鏡下我們可以看到血球計(jì)數(shù)板上4個(gè)區(qū)域，其中的活細(xì)胞和死細(xì)胞數(shù)目被分別統(tǒng)計(jì)。這個(gè)方法比較大的優(yōu)勢是整套設(shè)備很便宜，配套一塊血球計(jì)數(shù)板，以及自配的臺(tái)盼藍(lán)溶液即可開始整個(gè)實(shí)驗(yàn)，所以使用成本會(huì)很低，比較適合高校研究所中用于學(xué)生的教學(xué)實(shí)驗(yàn)。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀如何選擇？無錫品質(zhì)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

眾所周知，活細(xì)胞密度(VCD)和活率(viability)是評(píng)估哺乳動(dòng)物細(xì)胞系生長狀態(tài)的重要指標(biāo)。生物制藥研發(fā)人員進(jìn)行懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，每天所不能避免的工作，就是取樣計(jì)數(shù)。使用細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行人工計(jì)數(shù)無疑是金標(biāo)準(zhǔn)方法。

但這個(gè)傳統(tǒng)方法其勞動(dòng)強(qiáng)度十分驚人，樣品量少的時(shí)候還能吃得消，樣品量大一些，甚至于要做大規(guī)模的DOE實(shí)驗(yàn)時(shí)，估計(jì)很多實(shí)驗(yàn)人員想死的心都會(huì)有。而且人工計(jì)數(shù)有較強(qiáng)的主觀性，對(duì)操作人員的經(jīng)驗(yàn)及操作熟練度有一定要求，導(dǎo)致有時(shí)候數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性和可比性會(huì)受到質(zhì)疑。

拓開細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，擁有自動(dòng)化，合規(guī)化，高通量等優(yōu)勢，能夠幫助您在實(shí)驗(yàn)室里高效率，高標(biāo)準(zhǔn)的完成細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞檢測等工作，是您細(xì)胞科研領(lǐng)域的強(qiáng)力伙伴。 安徽通用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀咨詢問價(jià)全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的耗材貴嗎？

培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點(diǎn)，是污染嗎?

首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則，是否運(yùn)動(dòng)，是做布朗運(yùn)動(dòng)還是呈直線型快速移動(dòng)。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則，做布朗運(yùn)動(dòng)，黑點(diǎn)可能是細(xì)胞碎片(可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的)，也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物。如果黑點(diǎn)大小一致，快速移動(dòng)，很可能是細(xì)菌污染。

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室之孵育區(qū)以及制備，儲(chǔ)藏，清洗和消毒滅菌區(qū)

孵育區(qū)

本區(qū)對(duì)無菌的要求雖不比無菌區(qū)嚴(yán)格，但仍需清潔無塵，因此也應(yīng)設(shè)置在干擾少而非來往穿行的區(qū)域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進(jìn)行，后者費(fèi)用高，一般實(shí)驗(yàn)室多采用孵箱進(jìn)行工作。

制備區(qū) 

在該區(qū)主要進(jìn)行培養(yǎng)液及有關(guān)培養(yǎng)用的液體等的制備。 

儲(chǔ)藏區(qū) 

主要存放各類冰箱、干燥箱、液氮罐、無菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等，此環(huán)境也需要清潔無塵。 

清洗和消毒滅菌區(qū) 

清潔和消毒滅菌區(qū)應(yīng)與其他區(qū)域分開，主要進(jìn)行所有細(xì)胞培養(yǎng)器皿的清洗、準(zhǔn)備、消毒及三蒸水制備等工作。 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀會(huì)用到那些耗材？

貼壁細(xì)胞傳代如何使用胰酶?

一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液濃度過高時(shí)，易造成培養(yǎng)基中細(xì)胞碎片增多，黑渣子增多，常規(guī)細(xì)胞傳代時(shí)建議用0.05%的胰酶進(jìn)行消化，對(duì)于難消化的細(xì)胞可采用0.25%胰酶進(jìn)行消化，細(xì)胞密度過高超過80%時(shí)，采用分步消化法。胰酶儲(chǔ)存在–20°C，解凍在4°C進(jìn)行，開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中，保存于–20°C，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機(jī)會(huì)。 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對(duì)比血球計(jì)數(shù)板。湖北智能細(xì)胞計(jì)數(shù)儀廠家現(xiàn)貨

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是必備的儀器嗎？無錫品質(zhì)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

熒光素雙醋酸酯（FDA）是一種常用的培養(yǎng)動(dòng)植物細(xì)胞以及植物細(xì)胞原生質(zhì)體的生活力鑒定染料，其染色機(jī)理也利用了死活細(xì)胞在代謝上的差異：FDA本身不產(chǎn)生熒光，也無極性，能自由滲透出入完整的細(xì)胞膜。

當(dāng)FDA進(jìn)入活細(xì)胞后，被細(xì)胞內(nèi)的脂酶分解，生成有極性的、能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)——熒光素，該物質(zhì)不能自由透過活的細(xì)胞膜，積累在細(xì)胞膜內(nèi)，因而使有活力的細(xì)胞產(chǎn)生綠色熒光；而無活力的細(xì)胞因不能使FDA分解，而無法產(chǎn)生熒光。

除此之外，還有一些細(xì)胞器的專有染料。如液泡系的專有染料中性紅。中性紅是一種低毒性染料，可以使活細(xì)胞液泡著紅色，而細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不被著色；死細(xì)胞的液泡不被著色或淺染，染料彌散于整個(gè)細(xì)胞中，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)被染成紅色。有時(shí)侯為了增加染色效果可以將兩種染料結(jié)合使用，如甲基藍(lán)-中性紅混合染色法。 無錫品質(zhì)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

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