細胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總

貼壁細胞如何進行傳代?

去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4mlPBS洗1-2次;棄PBS，再加1.5ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min;棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。 細胞計數(shù)儀的型號對比。浙江高科技細胞計數(shù)儀要多少錢

細胞抱團怎么處理?

一些懸浮細胞抱團生長是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細胞在細胞密度很高的情況下，很可能會出現(xiàn)部分細胞抱團生長的現(xiàn)象，聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制好細胞密度。如果出現(xiàn)了細胞團，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細胞團，需要大家酌情而定)。 定制細胞計數(shù)儀代理商TANK全自動細胞計數(shù)儀價格。

細胞培養(yǎng)過程中的細胞計數(shù)

細胞培養(yǎng)是指從動物或植物中取出細胞，然后使其在合適的人工環(huán)境中生長。這些細胞可于培養(yǎng)前直接從組織中取出并采用酶或機械方法進行解離，或者也可來自已經(jīng)建立的細胞系或細胞株。細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說，細胞培養(yǎng)都是一個必不可少的過程，細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)?？寺?。  

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染色法鑒定機理

染色法分化學染色法和熒光染色法，根據(jù)染色機理的不同，染料或使死細胞著色，或使活細胞著色。死活細胞在生理機能和性質(zhì)上的差異主要包括：

死活細胞細胞膜通透性的差異：

活細胞的細胞膜是一種選擇性膜，對細胞起保護和屏障作用，只允許物質(zhì)選擇性的通過；而細胞死亡之后，細胞膜受損，通透性增加。常用的以臺盼藍鑒別細胞死活的方法就是利用了這一性質(zhì)。

臺盼藍，又稱錐藍，是一種陰離子型染料，不能透過完整的細胞膜。所以經(jīng)臺盼藍染色后只能使死細胞著色，而活細胞不被著色 細胞計數(shù)儀會用到那些耗材？

細胞培養(yǎng)實驗室之無菌操作區(qū)

無菌操作室：無菌操作區(qū)只限于細胞培養(yǎng)及其他無菌操作的區(qū)域，比較好能與外界隔離，不能穿行或受其他干擾。理想的無菌操作室應(yīng)劃為三部分：

a)更衣室—供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。

b)緩沖間—位于更衣間與操作間之間，目的是為了保證操作間的無菌環(huán)境，同時可放置恒溫培養(yǎng)箱及某些必需的小型儀器。

c)無菌操作間—直用于無菌操作、細胞培養(yǎng)。其大小要適當，且其頂部不宜過高（不超過2.5m）以保證紫外線的有效滅菌效果；墻壁光滑無死角以便清潔和消毒。工作臺安置不應(yīng)靠墻壁，臺面要光滑壓塑作表面，漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察。

無菌操作間的空氣消毒：

紫外線燈—產(chǎn)生臭氧，并且室內(nèi)溫度及濕度均較高，不利于工作人員健康?？諝膺^濾的恒溫恒濕裝置—比較好。

無臭氧紫外線消毒器電子消毒滅菌器-在高壓電場作用下，電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強烈電子轟擊，使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧。臭氧是一種強氧化劑，能同細菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進行氧化分解反應(yīng)，從而靠臭氧氣體彌漫性擴散達到殺菌之目的，消毒時沒有死角。消毒后空間的殘留臭氧只需30～40min即能自行還原成氧氣，空氣不留異味，消毒物體表面不留殘毒。 細胞計數(shù)儀如何購買？江蘇通用細胞計數(shù)儀銷售電話

全自動細胞計數(shù)儀的成本。浙江高科技細胞計數(shù)儀要多少錢

臺盼藍染液是細胞活性染料，常用于檢測細胞膜的完整性。細胞損傷或死亡時，臺盼藍可穿透變性的細胞膜，與解體的DNA結(jié)合，使其著色。而活細胞能阻止染料進入細胞內(nèi)。故可以檢測細胞是否存活。

臺盼藍染色法的原理正常的活細胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺盼藍，使之不能夠進入胞內(nèi)；而喪失活性或細胞膜不完整的細胞，胞膜的通透性增加，可被臺盼藍染成藍色。通常認為細胞膜完整性喪失，即可認為細胞已經(jīng)死亡，這與中性紅作用相反。因此，借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培養(yǎng)中常用的死細胞鑒定染色方法之一。注意凋亡小體也有臺盼藍拒染現(xiàn)象。臺盼藍染色后，通過顯微鏡下直接計數(shù)或顯微鏡下拍照后計數(shù)，就可以對細胞存活率進行比較精確的定量。 浙江高科技細胞計數(shù)儀要多少錢

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