如何獲取高質(zhì)量的細胞懸液，下面就帶您一步步***從組織到細胞懸液的旅程，讓細胞懸液制備不再成為困擾您的難題。

樣本準備

新鮮組織樣本是制備細胞懸液的首要條件，新鮮組織從***取下后，去除周圍的脂肪、結締組織或者壞死組織，用預冷的PBS或者生理鹽水沖洗干凈，快速轉移到解離實驗室進行細胞懸液制備，一般1個黃豆大小的組織量（200 mg）即可滿足一次組織解離。如果收集到新鮮樣本后無法立即進行懸液制備，可暫時用組織保存液4℃保存，盡快完成細胞懸液制備。 細胞計數(shù)儀的型號對比。安徽多功能細胞計數(shù)儀要多少錢

眾所周知，活細胞密度(VCD)和活率(viability)是評估哺乳動物細胞系生長狀態(tài)的重要指標。生物制藥研發(fā)人員進行懸浮細胞培養(yǎng)，每天所不能避免的工作，就是取樣計數(shù)。使用細胞計數(shù)板進行人工計數(shù)無疑是金標準方法。

但這個傳統(tǒng)方法其勞動強度十分驚人，樣品量少的時候還能吃得消，樣品量大一些，甚至于要做大規(guī)模的DOE實驗時，估計很多實驗人員想死的心都會有。而且人工計數(shù)有較強的主觀性，對操作人員的經(jīng)驗及操作熟練度有一定要求，導致有時候數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性和可比性會受到質(zhì)疑。

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細胞活力鑒定——臺盼藍染色法

臺盼藍（Trypan Blue），也稱二胺藍（Diamine Blue）和加拉藍（Niagra Blue）,是一種用于選擇性著色死細胞和即將死亡的細胞的重要染料。這種染料不能進入細胞膜完整的細胞，而能在細胞膜受損的死細胞或即將死亡的細胞內(nèi)迅速積累，從而在顯微鏡下顯出藍色。若染色時間過長，臺盼藍可能通過胞吞或胞飲作用進入細胞。

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熒光素雙醋酸酯（FDA）是一種常用的培養(yǎng)動植物細胞以及植物細胞原生質(zhì)體的生活力鑒定染料，其染色機理也利用了死活細胞在代謝上的差異：FDA本身不產(chǎn)生熒光，也無極性，能自由滲透出入完整的細胞膜。

當FDA進入活細胞后，被細胞內(nèi)的脂酶分解，生成有極性的、能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)——熒光素，該物質(zhì)不能自由透過活的細胞膜，積累在細胞膜內(nèi)，因而使有活力的細胞產(chǎn)生綠色熒光；而無活力的細胞因不能使FDA分解，而無法產(chǎn)生熒光。

除此之外，還有一些細胞器的專有染料。如液泡系的專有染料中性紅。中性紅是一種低毒性染料，可以使活細胞液泡著紅色，而細胞質(zhì)和細胞核不被著色；死細胞的液泡不被著色或淺染，染料彌散于整個細胞中，細胞核和細胞質(zhì)被染成紅色。有時侯為了增加染色效果可以將兩種染料結合使用，如甲基藍-中性紅混合染色法。 全自動細胞計數(shù)儀的成本。

培養(yǎng)細胞時應使用5%或10%CO2?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3 - / CO32- / H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時，細胞培養(yǎng)時應使用10%CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應使用5%CO2培養(yǎng)細胞。

CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?

定期(每周一次)更換水盤里面的水，水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子，水盤中可添加1%硫酸銅以預防霉菌污染。

希望能幫到大家。

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細胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總

一般拿到細胞后，應該注意什么?

收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各兩張)，排除細胞本身污染的情況。

何時須更換培養(yǎng)基?

視細胞生長密度而定，常規(guī)細胞2-3天更換培養(yǎng)基。

細胞何時進行傳代較好?

一般情況下細胞生長至完全匯合后就應該傳代，所有細胞生長都有一個要求不宜生長過密(也就是常說的長老了)，但有接觸抑制的細胞，在匯合前就必須進行傳代，這類細胞一般在密度70-80%就進行傳代，否則會引起細胞分化。 安徽多功能細胞計數(shù)儀要多少錢

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