單細(xì)胞測序?qū)嶒灥牡谝徊绞菃渭?xì)胞懸液的制備，而懸液制備中細(xì)胞計數(shù)的準(zhǔn)確性直接影響單細(xì)胞測序的數(shù)據(jù)質(zhì)量，但是關(guān)于細(xì)胞計數(shù)您真的了解嗎？

目前細(xì)胞計數(shù)主要使用臺盼藍(lán)染色法和雙熒光AO/PI染色法。

1）臺盼藍(lán)染色原理：臺盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不著色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高，可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色（藍(lán)色）。

2）雙熒光AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）可以通過完整的細(xì)胞膜，嵌入所有細(xì)胞（活細(xì)胞和死細(xì)胞）的細(xì)胞核，呈現(xiàn)綠色熒光；碘化丙啶（PI）只能通過不完整的細(xì)胞膜，即死細(xì)胞的細(xì)胞膜，嵌入所有死細(xì)胞的細(xì)胞核，呈現(xiàn)紅色熒光。

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染色法鑒定機(jī)理

染色法分化學(xué)染色法和熒光染色法，根據(jù)染色機(jī)理的不同，染料或使死細(xì)胞著色，或使活細(xì)胞著色。死活細(xì)胞在生理機(jī)能和性質(zhì)上的差異主要包括：

死活細(xì)胞細(xì)胞膜通透性的差異：

活細(xì)胞的細(xì)胞膜是一種選擇性膜，對細(xì)胞起保護(hù)和屏障作用，只允許物質(zhì)選擇性的通過；而細(xì)胞死亡之后，細(xì)胞膜受損，通透性增加。常用的以臺盼藍(lán)鑒別細(xì)胞死活的方法就是利用了這一性質(zhì)。

臺盼藍(lán)，又稱錐藍(lán)，是一種陰離子型染料，不能透過完整的細(xì)胞膜。所以經(jīng)臺盼藍(lán)染色后只能使死細(xì)胞著色，而活細(xì)胞不被著色 廣東優(yōu)勢細(xì)胞計數(shù)儀定制價格全自動細(xì)胞計數(shù)儀的對比數(shù)據(jù)。

一般拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么？

收到細(xì)胞先不開蓋,用酒精將整個細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各兩張），排除細(xì)胞本身污染的情況。

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細(xì)胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總

貼壁細(xì)胞如何進(jìn)行傳代?

去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4mlPBS洗1-2次;棄PBS，再加1.5ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細(xì)胞，顯微鏡下觀察，待細(xì)胞變圓，細(xì)胞間隙明顯，部分細(xì)胞剛開始脫離瓶壁，加4ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細(xì)胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min;棄上清，細(xì)胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶補(bǔ)足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。 全自動細(xì)胞計數(shù)儀的缺點。

培養(yǎng)細(xì)胞時應(yīng)使用5%或10%CO2?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3 - / CO32- / H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時，細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10%CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。

CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?

定期(每周一次)更換水盤里面的水，水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子，水盤中可添加1%硫酸銅以預(yù)防霉菌污染。

希望能幫到大家。

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根據(jù)臺盼藍(lán)原理開發(fā)的全自動細(xì)胞計數(shù)儀。浙江推廣細(xì)胞計數(shù)儀咨詢問價

細(xì)胞接種密度多少合適?

依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長的一個重要原因。按照我們的經(jīng)驗：一般倍增時間24 h內(nèi)的細(xì)胞，傳代比率1:6-1:12為宜，倍增時間24-48 h的細(xì)胞，傳代比率1:3-1:8為宜，倍增時間超過48h的細(xì)胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。

如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)中黑點的產(chǎn)生?

掌握細(xì)胞傳代的比較好時機(jī)，不要細(xì)胞長老了再傳代;掌握好消化時間，防止消化過度產(chǎn)生細(xì)胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到比較好;嚴(yán)格控制水質(zhì)和器皿的清潔。 浙江推廣細(xì)胞計數(shù)儀咨詢問價

上海拓開生物科技有限公司是一家生產(chǎn)型類企業(yè)，積極探索行業(yè)發(fā)展，努力實現(xiàn)產(chǎn)品創(chuàng)新。上海拓開是一家有限責(zé)任公司企業(yè)，一直“以人為本，服務(wù)于社會”的經(jīng)營理念;“誠守信譽(yù)，持續(xù)發(fā)展”的質(zhì)量方針。公司業(yè)務(wù)涵蓋葡萄糖乳酸分析儀，生化分析儀，智能控制系統(tǒng)，細(xì)胞計數(shù)儀，價格合理，品質(zhì)有保證，深受廣大客戶的歡迎。上海拓開將以真誠的服務(wù)、創(chuàng)新的理念、***的產(chǎn)品，為彼此贏得全新的未來！