原代培養(yǎng)及其操作步驟

從供體內(nèi)取出組織后，經(jīng)機(jī)械以及消化分離成單個(gè)細(xì)胞或單一型細(xì)胞群，使之在體外模擬人體生理環(huán)境，在無(wú)菌、適當(dāng)溫度和一定的營(yíng)養(yǎng)條件下，生存、生長(zhǎng)和繁殖。原代培養(yǎng)細(xì)胞常有不同的細(xì)胞成分，生長(zhǎng)緩慢，但是更能說(shuō)明所來(lái)源的組織細(xì)胞類型和表達(dá)組織的特異性特征。利用原代細(xì)胞培養(yǎng)做各種實(shí)驗(yàn)，如藥物測(cè)試、細(xì)胞分化及病毒學(xué)方面的試驗(yàn)效果很好。

拓開細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，擁有自動(dòng)化，合規(guī)化，高通量等優(yōu)勢(shì)，能夠幫助您在實(shí)驗(yàn)室里高效率，高標(biāo)準(zhǔn)的完成細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞檢測(cè)等工作，是您細(xì)胞科研領(lǐng)域的強(qiáng)力伙伴。 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀如何購(gòu)買？河北什么是細(xì)胞計(jì)數(shù)儀價(jià)目表

在各種細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析方法中，臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)疑是細(xì)胞活率分析的金標(biāo)準(zhǔn)。目前，通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色分析細(xì)胞活率的方法包括：傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡+血球計(jì)數(shù)板法，也有市場(chǎng)上很普遍的插片式半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，以及無(wú)需手動(dòng)混勻和染色的全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀。

其中，后兩個(gè)分析儀器的出現(xiàn)，不僅很大程度地解放了人力，同時(shí)相比于顯微鏡+血球計(jì)數(shù)板法會(huì)更省時(shí)，更合規(guī)，所以被各大制藥企業(yè)所使用。而全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀更是在工藝開發(fā)和生產(chǎn)質(zhì)控方面表現(xiàn)出特有的優(yōu)勢(shì)，即減少了人為的操作誤差和提高了儀器間數(shù)據(jù)的一致性而廣受歡迎。 湖北常規(guī)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀哪家便宜細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的耗材貴嗎？

經(jīng)典的細(xì)胞計(jì)數(shù)原理：臺(tái)盼藍(lán)

臺(tái)盼藍(lán)(Trypan Blue)是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一。正常的活細(xì)胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺(tái)盼藍(lán)，細(xì)胞不被染色；而死細(xì)胞的胞膜不完整，通透性增加，可使臺(tái)盼藍(lán)滲入將細(xì)胞染成藍(lán)色。因此，借助臺(tái)盼藍(lán)染色可以簡(jiǎn)單、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。

細(xì)胞損傷或死亡時(shí)，臺(tái)盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜使其變色，活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞懸液與0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液以9:1混合混勻（終濃度0.04%）

貼壁細(xì)胞傳代如何使用胰酶?

一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液濃度過(guò)高時(shí)，易造成培養(yǎng)基中細(xì)胞碎片增多，黑渣子增多，常規(guī)細(xì)胞傳代時(shí)建議用0.05%的胰酶進(jìn)行消化，對(duì)于難消化的細(xì)胞可采用0.25%胰酶進(jìn)行消化，細(xì)胞密度過(guò)高超過(guò)80%時(shí)，采用分步消化法。胰酶儲(chǔ)存在–20°C，解凍在4°C進(jìn)行，開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中，保存于–20°C，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機(jī)會(huì)。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的壽命。

細(xì)胞傳代培養(yǎng)常見問(wèn)題匯總

貼壁細(xì)胞如何進(jìn)行傳代?

去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4mlPBS洗1-2次;棄PBS，再加1.5ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細(xì)胞，顯微鏡下觀察，待細(xì)胞變圓，細(xì)胞間隙明顯，部分細(xì)胞剛開始脫離瓶壁，加4ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細(xì)胞小心吹打下來(lái)，1000rpm/min室溫離心5min;棄上清，細(xì)胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶補(bǔ)足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的缺點(diǎn)。四川使用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀價(jià)格走勢(shì)

全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是實(shí)驗(yàn)室必備。河北什么是細(xì)胞計(jì)數(shù)儀價(jià)目表

細(xì)胞抱團(tuán)怎么處理?

一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下，很可能會(huì)出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細(xì)胞，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán)，可以通過(guò)細(xì)胞篩去掉部分較大的細(xì)胞團(tuán)，也可以嘗試一下方法：將細(xì)胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細(xì)胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細(xì)胞團(tuán)，需要大家酌情而定)。 河北什么是細(xì)胞計(jì)數(shù)儀價(jià)目表

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