實驗中操作和分析軟件的合規(guī)性

合規(guī)性還是針對于質(zhì)控（QC）部門、GMP實驗室和生產(chǎn)車間。因為生產(chǎn)的藥物，各個國家對藥物生產(chǎn)都有嚴(yán)格的法規(guī)要求，包括GMP和FDA等，要求所測試的數(shù)據(jù)是可追蹤的，使用儀器的分析軟件有多級用戶權(quán)限管理和審計追蹤、電子簽名功能（，以保證測試數(shù)據(jù)的完整性、安全性和可靠性。

除此之外，大家還需要結(jié)合自己的預(yù)算，每天要測試的樣品數(shù)量，實驗室可放置儀器的空間大小等其他各個方面綜合起來考慮，終選擇一款合適的細(xì)胞計數(shù)和活率分析儀。 全自動細(xì)胞計數(shù)儀對比血球計數(shù)板的缺點。重慶發(fā)展細(xì)胞計數(shù)儀價目表

 單細(xì)胞測序?qū)嶒灥牡谝徊绞菃渭?xì)胞懸液的制備，而懸液制備中細(xì)胞計數(shù)的準(zhǔn)確性直接影響單細(xì)胞測序的數(shù)據(jù)質(zhì)量，但是關(guān)于細(xì)胞計數(shù)您真的了解嗎？

目前細(xì)胞計數(shù)主要使用臺盼藍染色法和雙熒光AO/PI染色法。

1）臺盼藍染色原理：臺盼藍不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不著色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高，可使染料進入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色（藍色）。

2）雙熒光AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）可以通過完整的細(xì)胞膜，嵌入所有細(xì)胞（活細(xì)胞和死細(xì)胞）的細(xì)胞核，呈現(xiàn)綠色熒光；碘化丙啶（PI）只能通過不完整的細(xì)胞膜，即死細(xì)胞的細(xì)胞膜，嵌入所有死細(xì)胞的細(xì)胞核，呈現(xiàn)紅色熒光。

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如何控制胰酶消化時間?

胰酶消化的程度是細(xì)胞培養(yǎng)中的一個關(guān)鍵步驟：消化過度細(xì)胞碎片增多，黑渣子增多，細(xì)胞會成片脫落，嚴(yán)重影響細(xì)胞活性，并有部分細(xì)胞漂浮，隨棄去的胰酶流失;消化不足則細(xì)胞難于從瓶壁上吹下，反復(fù)吹打同樣也會損傷細(xì)胞活性。不同細(xì)胞對消化液的敏感性不同，胰酶消化的時間也會有差異。胰酶消化時間與胰酶的濃度，是否含EDTA，胰酶的儲存時間，胰酶的儲存溫度，是否反復(fù)凍融，消化加入的胰酶體積，消化溫度及細(xì)胞的密度有關(guān)。消化對于新購買的細(xì)胞，建議客戶先用低濃度的胰酶仔細(xì)去摸索一下消化時間，可每隔1分鐘鏡下觀察細(xì)胞是否變圓，記錄比較好消化時間，下一次操作參考之前的記錄來控制時間即可。

細(xì)胞內(nèi)有空泡，是否是正?，F(xiàn)象?

部分細(xì)胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等)，這個是正常現(xiàn)象。如果只有少數(shù)細(xì)胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳，可以通過調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時間等方法來調(diào)整細(xì)胞狀態(tài);如果大部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡，且單個細(xì)胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細(xì)胞代次較高，細(xì)胞老化所致，需更換代次較早的細(xì)胞。

細(xì)胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因

很可能是培養(yǎng)體系不適合細(xì)胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系);或者消化過度，對細(xì)胞有嚴(yán)重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細(xì)胞，傳代太稀;或者生長較快的細(xì)胞，傳代較密，細(xì)胞嚴(yán)重堆疊生長)。 細(xì)胞計數(shù)儀的使用難度。

細(xì)胞培養(yǎng)過程中的細(xì)胞計數(shù)

細(xì)胞培養(yǎng)是指從動物或植物中取出細(xì)胞，然后使其在合適的人工環(huán)境中生長。這些細(xì)胞可于培養(yǎng)前直接從組織中取出并采用酶或機械方法進行解離，或者也可來自已經(jīng)建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個必不可少的過程，細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)?？寺　? 

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經(jīng)典的細(xì)胞計數(shù)原理：臺盼藍

臺盼藍(Trypan Blue)是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一。正常的活細(xì)胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺盼藍，細(xì)胞不被染色；而死細(xì)胞的胞膜不完整，通透性增加，可使臺盼藍滲入將細(xì)胞染成藍色。因此，借助臺盼藍染色可以簡單、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。

細(xì)胞損傷或死亡時，臺盼藍可穿透變性的細(xì)胞膜使其變色，活細(xì)胞能阻止染料進入細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9:1混合混勻（終濃度0.04%） 重慶發(fā)展細(xì)胞計數(shù)儀價目表

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