細(xì)胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總

一般拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么?

收到細(xì)胞先不開蓋,用酒精將整個(gè)細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各兩張)，排除細(xì)胞本身污染的情況。

何時(shí)須更換培養(yǎng)基?

視細(xì)胞生長密度而定，常規(guī)細(xì)胞2-3天更換培養(yǎng)基。

細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代較好?

一般情況下細(xì)胞生長至完全匯合后就應(yīng)該傳代，所有細(xì)胞生長都有一個(gè)要求不宜生長過密(也就是常說的長老了)，但有接觸抑制的細(xì)胞，在匯合前就必須進(jìn)行傳代，這類細(xì)胞一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代，否則會引起細(xì)胞分化。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的款式。西藏定制細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室之凈化工作臺

凈化工作臺：操作簡單，安裝方便，占用空間小且凈化效果很好。一般細(xì)菌培養(yǎng)室使用的凈化工作臺主要有兩種：a)側(cè)流式或稱垂直式b)外流式或稱水平層流式。

凈化工作臺工作原理（大致相同）——通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過濾器初濾，由離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱，再經(jīng)高效空氣過濾器精濾，由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風(fēng)速通過無菌區(qū)，從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環(huán)境。

側(cè)流式工作臺—空氣凈化后的氣流由左或右側(cè)通過工作臺面流向?qū)?cè)，也有從上向下或從下向上流向?qū)?cè)，形成氣流屏障保持工作區(qū)無菌。工作臺結(jié)構(gòu)為封閉式。

外流式（水平式）工作臺—凈化后的空氣面向操作者流動(dòng)，因而外方氣流不致混入操作，但進(jìn)行有害物質(zhì)實(shí)驗(yàn)操作則對操作者不利。工作臺結(jié)構(gòu)為開放式（已少用）。 湖北推廣細(xì)胞計(jì)數(shù)儀細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的使用評價(jià)。

細(xì)胞接種密度多少合適?

依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長的一個(gè)重要原因。按照我們的經(jīng)驗(yàn)：一般倍增時(shí)間24 h內(nèi)的細(xì)胞，傳代比率1:6-1:12為宜，倍增時(shí)間24-48 h的細(xì)胞，傳代比率1:3-1:8為宜，倍增時(shí)間超過48h的細(xì)胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。

如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)的產(chǎn)生?

掌握細(xì)胞傳代的比較好時(shí)機(jī)，不要細(xì)胞長老了再傳代;掌握好消化時(shí)間，防止消化過度產(chǎn)生細(xì)胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到比較好;嚴(yán)格控制水質(zhì)和器皿的清潔。

所有和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的生物領(lǐng)域都需要進(jìn)行細(xì)胞濃度和活率的分析，不管是大學(xué)科研院所，還是各種大小規(guī)模的生物醫(yī)藥公司，細(xì)胞計(jì)數(shù)及活率分析儀無疑已經(jīng)成為了細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)領(lǐng)域的一個(gè)基本配套的分析儀器。

對于這樣一個(gè)基礎(chǔ)的分析儀器，如果我們使用關(guān)鍵詞“細(xì)胞計(jì)數(shù)及活率分析儀”，在百度上搜索可以得到巨量的結(jié)果，可以達(dá)到3450萬條相關(guān)結(jié)果。

那么在這茫茫的信息中，我們?nèi)绾蝸磉x擇一款適合自己的細(xì)胞計(jì)數(shù)及活率分析儀呢？

拓開細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，擁有自動(dòng)化，合規(guī)化，高通量等優(yōu)勢，能夠幫助您在實(shí)驗(yàn)室里高效率，高標(biāo)準(zhǔn)的完成細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞檢測等工作，是您細(xì)胞科研領(lǐng)域的強(qiáng)力伙伴。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的檢測速度。

自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀就可以替代傳統(tǒng)的手動(dòng)計(jì)數(shù)法，滿足藥物研發(fā)和生產(chǎn)質(zhì)控的需求。但對于這些自動(dòng)化的細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀，目前門類也很繁多，如何從中找到適合自己所需的那款呢，

準(zhǔn)確性無疑是重要的，我們購買的任何分析儀器，如果不能保證準(zhǔn)確性，那就無法正常使用，還不如回到光學(xué)顯微鏡+血球計(jì)數(shù)板純手動(dòng)的方法。

計(jì)數(shù)結(jié)果的重復(fù)性好壞，對全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀而言，除了取樣要有代表性外，剩下考察的是儀器的穩(wěn)定性和軟件對細(xì)胞識別的一致性。目前各家的細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀對細(xì)胞的識別都問題不大，除了某些容易團(tuán)聚的細(xì)胞，需要增加一個(gè)團(tuán)聚度參數(shù)。 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀應(yīng)該怎么選擇？廣東應(yīng)用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀哪家便宜

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的體積有多大？西藏定制細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

如何讓細(xì)胞計(jì)數(shù)更加準(zhǔn)確

減少細(xì)胞結(jié)團(tuán)率

細(xì)胞計(jì)數(shù)需要對整個(gè)細(xì)胞懸液中的少量樣本進(jìn)行分析，因此必須注意確保樣品能夠原始整個(gè)單細(xì)胞懸液。TANK-CA0008以及及原始的血球計(jì)數(shù)板法等多種方法來對細(xì)胞活性進(jìn)行監(jiān)控和計(jì)算。包括TANK-CA0008有采用臺盼藍(lán)，所以像是TANK-CA0008這樣的細(xì)胞計(jì)數(shù)器應(yīng)用算法來識別活細(xì)胞或死細(xì)胞，但它們不能對不具代表性的樣本進(jìn)行校正。當(dāng)手動(dòng)計(jì)數(shù)時(shí)，與單個(gè)細(xì)胞相比，細(xì)胞成團(tuán)率/結(jié)團(tuán)率的評分更具主觀性，從而增加了可變性。細(xì)胞裂解后的細(xì)胞向外釋放的DNA（會造成粘稠結(jié)團(tuán)））和細(xì)胞碎片是結(jié)團(tuán)的常見原因。細(xì)胞裂解可能是由于過度生長、過度移液的機(jī)械剪切或冷凍/解凍循環(huán)等因素造成的，而胰蛋白酶消化不足或過度也可能導(dǎo)致樣品的異質(zhì)性。目前為了降低細(xì)胞結(jié)團(tuán)率，我們可以通過溫和細(xì)胞裂解的方式來進(jìn)行嘗試，以防止過為劇烈的酶解方式會導(dǎo)致細(xì)胞凋亡過快從而釋放更多的DNA。如胰酶等需要謹(jǐn)慎使用。另外對細(xì)胞碎片的樣本進(jìn)行過濾，甚至是過濾膜等方式，均可以減少細(xì)結(jié)團(tuán)率。 西藏定制細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

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