細(xì)胞計(jì)數(shù)是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié),科研工作者需要從多方面對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行分析,比如活細(xì)胞數(shù)、死細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞存活率等。經(jīng)典的通過臺(tái)盼藍(lán)染色方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行人工計(jì)數(shù),是我們研究細(xì)胞必備技能之一。隨著科技發(fā)展,自動(dòng)化的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀應(yīng)運(yùn)而生,它以便捷、精細(xì)、快速等優(yōu)勢被廣泛應(yīng)用到細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中。
拓開細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,擁有自動(dòng)化,合規(guī)化,高通量等優(yōu)勢,能夠幫助您在實(shí)驗(yàn)室里高效率,高標(biāo)準(zhǔn)的完成細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞檢測等工作,是您細(xì)胞科研領(lǐng)域的強(qiáng)力伙伴。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的原理。山東細(xì)胞計(jì)數(shù)儀銷售廠
培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點(diǎn),是污染嗎?
首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁,如果變渾濁,基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁:在顯微鏡下觀察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則,是否運(yùn)動(dòng),是做布朗運(yùn)動(dòng)還是呈直線型快速移動(dòng)。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則,做布朗運(yùn)動(dòng),黑點(diǎn)可能是細(xì)胞碎片(可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的),也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的,也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物。如果黑點(diǎn)大小一致,快速移動(dòng),很可能是細(xì)菌污染。 福建現(xiàn)代細(xì)胞計(jì)數(shù)儀細(xì)胞計(jì)數(shù)儀應(yīng)該怎么選擇?
如何讓細(xì)胞計(jì)數(shù)更加準(zhǔn)確
對(duì)于每種細(xì)胞計(jì)數(shù)方法,樣品表面必須是干凈的。任何污染都可能導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。對(duì)于人工細(xì)胞計(jì)數(shù),這包括移除和清潔玻璃蓋片,然后用70%乙醇然后用水清潔計(jì)數(shù)腔。當(dāng)使用一次性塑料載玻片時(shí),每個(gè)樣品都需要一個(gè)新的載玻片(如果載玻片有兩個(gè)分開的腔室,則需要一對(duì)樣品)。
加載樣本前需要旋渦震蕩
在裝載樣品之前立即進(jìn)行漩渦震蕩處理,是確保被分析樣品具有代表性的重要步驟。
不同大小和類型的細(xì)胞將以不同的速率沉降和聚集。在加載樣品之前立即旋轉(zhuǎn)溶液會(huì)增加等分的概率,并準(zhǔn)確地反映細(xì)胞培養(yǎng)的特性。
單細(xì)胞測序?qū)嶒?yàn)的第一步是單細(xì)胞懸液的制備,而懸液制備中細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性直接影響單細(xì)胞測序的數(shù)據(jù)質(zhì)量,但是關(guān)于細(xì)胞計(jì)數(shù)您真的了解嗎?
目前細(xì)胞計(jì)數(shù)主要使用臺(tái)盼藍(lán)染色法和雙熒光AO/PI染色法。
1)臺(tái)盼藍(lán)染色原理:臺(tái)盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不著色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高,可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色(藍(lán)色)。
2)雙熒光AO/PI染色原理:吖啶橙(AO)可以通過完整的細(xì)胞膜,嵌入所有細(xì)胞(活細(xì)胞和死細(xì)胞)的細(xì)胞核,呈現(xiàn)綠色熒光;碘化丙啶(PI)只能通過不完整的細(xì)胞膜,即死細(xì)胞的細(xì)胞膜,嵌入所有死細(xì)胞的細(xì)胞核,呈現(xiàn)紅色熒光。
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一般拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?
收到細(xì)胞先不開蓋,用酒精將整個(gè)細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各兩張),排除細(xì)胞本身污染的情況。
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全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀使用范圍。山東細(xì)胞計(jì)數(shù)儀銷售廠
購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳
研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。運(yùn)輸過程對(duì)細(xì)胞有嚴(yán)重影響。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久。
細(xì)胞生長逐漸變慢是什么原因?
細(xì)胞增殖變慢有以下原因:1. 消化過度 2. 傳代過密 3.細(xì)胞營養(yǎng)不良 4.細(xì)胞頻繁傳代 5.細(xì)胞狀態(tài)不佳或老化 6.細(xì)胞存在污染。 山東細(xì)胞計(jì)數(shù)儀銷售廠
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