眾所周知,活細(xì)胞密度(VCD)和活率(viability)是評(píng)估哺乳動(dòng)物細(xì)胞系生長(zhǎng)狀態(tài)的重要指標(biāo)。生物制藥研發(fā)人員進(jìn)行懸浮細(xì)胞培養(yǎng),每天所不能避免的工作,就是取樣計(jì)數(shù)。使用細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行人工計(jì)數(shù)無(wú)疑是金標(biāo)準(zhǔn)方法。
但這個(gè)傳統(tǒng)方法其勞動(dòng)強(qiáng)度十分驚人,樣品量少的時(shí)候還能吃得消,樣品量大一些,甚至于要做大規(guī)模的DOE實(shí)驗(yàn)時(shí),估計(jì)很多實(shí)驗(yàn)人員想死的心都會(huì)有。而且人工計(jì)數(shù)有較強(qiáng)的主觀性,對(duì)操作人員的經(jīng)驗(yàn)及操作熟練度有一定要求,導(dǎo)致有時(shí)候數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性和可比性會(huì)受到質(zhì)疑。
拓開(kāi)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,擁有自動(dòng)化,合規(guī)化,高通量等優(yōu)勢(shì),能夠幫助您在實(shí)驗(yàn)室里高效率,高標(biāo)準(zhǔn)的完成細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞檢測(cè)等工作,是您細(xì)胞科研領(lǐng)域的強(qiáng)力伙伴。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的原理。上海定制細(xì)胞計(jì)數(shù)儀生產(chǎn)廠家
培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%或10%CO2?
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3 - / CO32- / H+作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10%CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時(shí),則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。
CO2培養(yǎng)箱之水盤(pán)如何保持清潔?
定期(每周一次)更換水盤(pán)里面的水,水盤(pán)的水必須使用無(wú)菌蒸餾水或無(wú)菌去離子,水盤(pán)中可添加1%硫酸銅以預(yù)防霉菌污染。
希望能幫到大家。
上?,F(xiàn)代細(xì)胞計(jì)數(shù)儀收費(fèi)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的體積有多大?
懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何傳代處理?
一般*需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細(xì)胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時(shí),將細(xì)胞懸液移入離心管中,1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清,細(xì)胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5 ml,37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細(xì)胞趨于成團(tuán)生長(zhǎng),此時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,當(dāng)補(bǔ)液時(shí),需避免反復(fù)吹打。
如何區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞?
顯微鏡下觀察:活細(xì)胞中間透亮,飽滿,有光澤,死細(xì)胞較暗。也可以通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色來(lái)計(jì)算細(xì)胞活力。
實(shí)驗(yàn)中操作和分析軟件的合規(guī)性
合規(guī)性還是針對(duì)于質(zhì)控(QC)部門(mén)、GMP實(shí)驗(yàn)室和生產(chǎn)車間。因?yàn)樯a(chǎn)的藥物,各個(gè)國(guó)家對(duì)藥物生產(chǎn)都有嚴(yán)格的法規(guī)要求,包括GMP和FDA等,要求所測(cè)試的數(shù)據(jù)是可追蹤的,使用儀器的分析軟件有多級(jí)用戶權(quán)限管理和審計(jì)追蹤、電子簽名功能(,以保證測(cè)試數(shù)據(jù)的完整性、安全性和可靠性。
除此之外,大家還需要結(jié)合自己的預(yù)算,每天要測(cè)試的樣品數(shù)量,實(shí)驗(yàn)室可放置儀器的空間大小等其他各個(gè)方面綜合起來(lái)考慮,終選擇一款合適的細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對(duì)比血球計(jì)數(shù)板的缺點(diǎn)。
貼壁細(xì)胞傳代如何使用胰酶?
一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液濃度過(guò)高時(shí),易造成培養(yǎng)基中細(xì)胞碎片增多,黑渣子增多,常規(guī)細(xì)胞傳代時(shí)建議用0.05%的胰酶進(jìn)行消化,對(duì)于難消化的細(xì)胞可采用0.25%胰酶進(jìn)行消化,細(xì)胞密度過(guò)高超過(guò)80%時(shí),采用分步消化法。胰酶儲(chǔ)存在–20°C,解凍在4°C進(jìn)行,開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中,保存于–20°C,避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低,并可減少污染之機(jī)會(huì)。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的款式。湖州自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀
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細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室之凈化工作臺(tái)
凈化工作臺(tái):操作簡(jiǎn)單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。一般細(xì)菌培養(yǎng)室使用的凈化工作臺(tái)主要有兩種:a)側(cè)流式或稱垂直式b)外流式或稱水平層流式。
凈化工作臺(tái)工作原理(大致相同)——通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過(guò)濾器初濾,由離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱,再經(jīng)高效空氣過(guò)濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風(fēng)速通過(guò)無(wú)菌區(qū),從而形成無(wú)塵無(wú)菌的高潔凈度工作環(huán)境。
側(cè)流式工作臺(tái)—空氣凈化后的氣流由左或右側(cè)通過(guò)工作臺(tái)面流向?qū)?cè),也有從上向下或從下向上流向?qū)?cè),形成氣流屏障保持工作區(qū)無(wú)菌。工作臺(tái)結(jié)構(gòu)為封閉式。
外流式(水平式)工作臺(tái)—凈化后的空氣面向操作者流動(dòng),因而外方氣流不致混入操作,但進(jìn)行有害物質(zhì)實(shí)驗(yàn)操作則對(duì)操作者不利。工作臺(tái)結(jié)構(gòu)為開(kāi)放式(已少用)。 上海定制細(xì)胞計(jì)數(shù)儀生產(chǎn)廠家
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