細(xì)胞傳代培養(yǎng)常見問(wèn)題匯總

貼壁細(xì)胞如何進(jìn)行傳代?

去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4mlPBS洗1-2次;棄PBS，再加1.5ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細(xì)胞，顯微鏡下觀察，待細(xì)胞變圓，細(xì)胞間隙明顯，部分細(xì)胞剛開始脫離瓶壁，加4ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細(xì)胞小心吹打下來(lái)，1000rpm/min室溫離心5min;棄上清，細(xì)胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶補(bǔ)足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的對(duì)比數(shù)據(jù)。重慶有什么細(xì)胞計(jì)數(shù)儀價(jià)格走勢(shì)

培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%或10%CO2?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3 - / CO32- / H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10%CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時(shí)，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。

CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?

定期(每周一次)更換水盤里面的水，水盤的水必須使用無(wú)菌蒸餾水或無(wú)菌去離子，水盤中可添加1%硫酸銅以預(yù)防霉菌污染。

希望能幫到大家。

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細(xì)胞抱團(tuán)怎么處理?

一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下，很可能會(huì)出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細(xì)胞，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán)，可以通過(guò)細(xì)胞篩去掉部分較大的細(xì)胞團(tuán)，也可以嘗試一下方法：將細(xì)胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細(xì)胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細(xì)胞團(tuán)，需要大家酌情而定)。

培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點(diǎn)，是污染嗎?

首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒(méi)有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則，是否運(yùn)動(dòng)，是做布朗運(yùn)動(dòng)還是呈直線型快速移動(dòng)。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則，做布朗運(yùn)動(dòng)，黑點(diǎn)可能是細(xì)胞碎片(可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過(guò)度引起的)，也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物。如果黑點(diǎn)大小一致，快速移動(dòng)，很可能是細(xì)菌污染。 TANK全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀價(jià)格。

如何獲取高質(zhì)量的細(xì)胞懸液，下面就帶您一步步***從組織到細(xì)胞懸液的旅程，讓細(xì)胞懸液制備不再成為困擾您的難題。

樣本準(zhǔn)備

新鮮組織樣本是制備細(xì)胞懸液的首要條件，新鮮組織從***取下后，去除周圍的脂肪、結(jié)締組織或者壞死組織，用預(yù)冷的PBS或者生理鹽水沖洗干凈，快速轉(zhuǎn)移到解離實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)胞懸液制備，一般1個(gè)黃豆大小的組織量（200 mg）即可滿足一次組織解離。如果收集到新鮮樣本后無(wú)法立即進(jìn)行懸液制備，可暫時(shí)用組織保存液4℃保存，盡快完成細(xì)胞懸液制備。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀貴嗎？四川使用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀廠家現(xiàn)貨

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二價(jià)離子抑制胰蛋白酶活性嗎?

二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性。

使用胰蛋白酶加入EDTA是為什么?

EDTA用來(lái)螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前，用EDTA清洗細(xì)胞，以消除來(lái)自培養(yǎng)基中所有的二價(jià)離子。

可否使用與原先不同的培養(yǎng)基?

不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng)，易造成細(xì)胞狀態(tài)不好，**終造成細(xì)胞無(wú)法存活。 重慶有什么細(xì)胞計(jì)數(shù)儀價(jià)格走勢(shì)

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