眾所周知，活細(xì)胞密度(VCD)和活率(viability)是評估哺乳動物細(xì)胞系生長狀態(tài)的重要指標(biāo)。生物制藥研發(fā)人員進(jìn)行懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，每天所不能避免的工作，就是取樣計數(shù)。使用細(xì)胞計數(shù)板進(jìn)行人工計數(shù)無疑是金標(biāo)準(zhǔn)方法。

但這個傳統(tǒng)方法其勞動強(qiáng)度十分驚人，樣品量少的時候還能吃得消，樣品量大一些，甚至于要做大規(guī)模的DOE實驗時，估計很多實驗人員想死的心都會有。而且人工計數(shù)有較強(qiáng)的主觀性，對操作人員的經(jīng)驗及操作熟練度有一定要求，導(dǎo)致有時候數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性和可比性會受到質(zhì)疑。

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細(xì)胞計數(shù)是細(xì)胞實驗中非常重要的一個環(huán)節(jié)，科研工作者需要從多方面對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行分析，比如活細(xì)胞數(shù)、死細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞存活率等。經(jīng)典的通過臺盼藍(lán)染色方法對細(xì)胞進(jìn)行人工計數(shù)，是我們研究細(xì)胞必備技能之一。隨著科技發(fā)展，自動化的細(xì)胞計數(shù)儀應(yīng)運而生，它以便捷、精細(xì)、快速等優(yōu)勢被廣泛應(yīng)用到細(xì)胞實驗中。

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懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何傳代處理?

一般*需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細(xì)胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，將細(xì)胞懸液移入離心管中，1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清，細(xì)胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細(xì)胞趨于成團(tuán)生長，此時細(xì)胞生長狀態(tài)良好，當(dāng)補(bǔ)液時，需避免反復(fù)吹打。

如何區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞?

顯微鏡下觀察：活細(xì)胞中間透亮，飽滿，有光澤，死細(xì)胞較暗。也可以通過臺盼藍(lán)染色來計算細(xì)胞活力。

二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎?

二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。

使用胰蛋白酶加入EDTA是為什么?

EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前，用EDTA清洗細(xì)胞，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。

可否使用與原先不同的培養(yǎng)基?

不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無法立即適應(yīng)，易造成細(xì)胞狀態(tài)不好，**終造成細(xì)胞無法存活。 全自動細(xì)胞計數(shù)儀使用范圍。

活死細(xì)胞的鑒別方法

活細(xì)胞的鑒定在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)上具有很重要的意義。細(xì)胞培養(yǎng)過程中要隨時記錄細(xì)胞的生長情況，需要經(jīng)常測定細(xì)胞的存活率；在zhong瘤細(xì)胞的研究中，為了檢驗各種藥物對zhong瘤細(xì)胞的殺傷力，也需要測定zhong瘤細(xì)胞的存活率。在臨床醫(yī)學(xué)中死活細(xì)胞的鑒定也有很大的應(yīng)用，例如為了檢測某一男子的生育能力，測定精子細(xì)胞的存活力是比較常用的辦法。死活細(xì)胞的鑒定方法有很多種，常用的有染色法和儀器分析法。染色法簡便，易于操作，但是通過直接的形態(tài)觀察來鑒別細(xì)胞死活，實驗結(jié)果很容易受操作者的主觀因素的影響，存在一定的誤差，所以，在實際操作中也常采用一些儀器來進(jìn)行精確的批量檢測。 細(xì)胞計數(shù)儀的實用性強(qiáng)嗎？天津自動化細(xì)胞計數(shù)儀價目表

細(xì)胞計數(shù)儀適用于什么領(lǐng)域？安徽發(fā)展細(xì)胞計數(shù)儀比較價格

黑點已經(jīng)產(chǎn)生了，如何進(jìn)行處理?

如果判定黑點是污染，請及時將細(xì)胞處理后丟棄。其他情況，可參照以下進(jìn)行：如果是懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞上清慢速離心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS洗2-3遍，洗的時候，輕輕拍打培養(yǎng)瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去PBS，消化時先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右，讓細(xì)胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來，去掉低濃度胰酶，然后正常消化細(xì)胞，將收集的細(xì)胞懸液慢速離心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶，并可以嘗試適當(dāng)增加血清濃度進(jìn)行培養(yǎng)。 安徽發(fā)展細(xì)胞計數(shù)儀比較價格

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